【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测领域，具体而言，涉及检测阴道微生物的核酸组合物及其试剂盒和检测方法。
技术介绍
1、阴道炎症是女性常见病、多发病，除可引起患者外阴阴道不适症状以外，还可导致一系列与生殖健康相关的严重并发症，危害女性生殖健康。常见阴道炎症包括细菌性阴道病(bacterial vaginosis，bv)、需氧菌性阴道炎(aerobic vaginitis，av)、阴道毛滴虫病(trichomoniasis)和外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginalcandidiasis，vvc)。
2、细菌性阴道病(bacterial vaginosis，bv)是以阴道内正常产生过氧化氢的乳杆菌减少或消失，而以兼性厌氧菌及厌氧菌增多为主导致的阴道感染。常见的病原体包括兼性厌氧菌(阴道加德纳菌)、厌氧菌(普雷沃菌、动弯杆菌、拟杆菌、阴道阿托普菌)以及解脲脲原体、人型支原体等，其中，阴道加德纳菌在bv中占主导地位，且在复发性bv病人样本中100％检出。bv是育龄期妇女常见的阴道感染性疾病之一。bv会增加人类免疫缺陷病毒(hiv)、淋病奈瑟菌、衣原体、人乳头瘤病毒和2型单纯疱疹病毒等性传播病原体感染的风险，与盆腔炎症性疾病、妇科手术后感染、不良妊娠结局及性传播疾病的发生风险增加相关，具有临床表现不典型、复发率高的特点。
3、需氧菌性阴道炎(aerobic vaginitis，av)是以阴道内乳杆菌减少或缺失，需氧菌增多引起的阴道炎症。av患者阴道菌群多样性增加，病原体相对复杂，以b族链球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、
4、外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginal candidiasis，vvc)是指假丝酵母菌感染引起的阴道炎症，又称霉菌性阴道炎、外阴阴道念珠病等，发病率仅次于bv，29％～49％女性在其一生中至少有1次急性感染。其病原菌是以白假丝酵母菌为主的酵母菌，占85％-90％，其他如光滑假丝酵母、热带假丝酵母、近平滑假丝酵母菌、克柔念珠菌等占少数，其中光滑假丝酵母与克柔念珠菌对抗真菌药物氟康唑耐药。vvc的实验室诊断主要依赖于镜检。
5、滴虫阴道炎(trichomonal vaginitis，tv)是由阴道毛滴虫感染引起的下生殖道感染性疾病，也是最常见的非病毒性性传播疾病，在不同国家和地区阴道毛滴虫病的发病率存在较大差异，范围为0.3％～20％。非妊娠期妇科门诊患者阴道毛滴虫病的发病率为1.7％～4.5％，孕妇的阴道毛滴虫病发病率为1.7％～3.2％。滴虫阴道炎与女性多种临床不良结局风险增加有关，阴道毛滴虫病患者感染hiv的风险是一般人群的1.5倍。在hiv患者中，同时感染阴道毛滴虫的患者阴道内病毒载量更高，且即使未经抗病毒治疗，治疗阴道毛滴虫病后也会降低其阴道内病毒载量。2021版诊疗指南依旧建议对无症状的hiv感染者筛查阴道毛滴虫。阴道毛滴虫感染的女性患者的子宫颈癌风险是一般女性的2.1倍。tv的诊断方法主要依赖于湿片镜检，但该方法在标本采集1h后敏感度会快速下降至20％。
6、混合性阴道炎是由两种或两种以上的致病微生物导致的阴道炎症，在临床上比较常见，其较单一阴道炎症诊治困难，且常伴随着复杂阴道微生态环境的存在。既往的研究报道混合性阴道炎中vvc+bv的发病率最高(20.95％～74.89％)，而加入av诊断后的研究均提示av相关的混合感染发病率最高，av+bv的发病率为37.14％～55.34％，av+vvc的发病率为50.91％，av+tv的发病率为29.71％。国外研究报道bv+tv病最常见发病率为37.8％，其次为bv+vvc发病率为14.9％及bv+vvc+阴道毛滴虫病发病率为4.1％。混合感染时，子宫颈与阴道可能同时存在感染，如外阴单纯疱疹病毒2型(hsv-2)、子宫颈沙眼衣原体(ct)、淋病奈瑟菌(ng)、支原体及hpv等病原体的感染可能与阴道炎症同时存在，且往往子宫颈感染症状隐匿，大大增加针对的复杂性。目前市场上缺乏高灵敏度、高特异性检测阴道微生物的检测试剂，尤其同时有效检测多种阴道微生物的检测试剂。
7、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供检测阴道微生物的核酸组合物及其试剂盒和检测方法。
2、本专利技术是这样实现的：
3、第一方面，本专利技术实施例提供了一种核酸组合物，其包括第一核酸组合～第五核酸组合中的至少一组：第一核酸组合包括引物对1，引物对1的核苷酸序列如seq id no:1～2所示；第二核酸组合包括引物对2，引物对1的核苷酸序列如seq id no:4～5所示；第三核酸组合包括引物对3，引物对1的核苷酸序列如seq id no:7～8所示；第四核酸组合包括引物对4，引物对1的核苷酸序列如seq id no:10～11所示；第五核酸组合包括引物对5，引物对1的核苷酸序列如seq id no:13～14所示。
4、第二方面，本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的核酸组合物在制备用于检测阴道微生物的试剂盒中的应用。
5、第三方面，本专利技术实施例提供了一种检测阴道微生物的试剂盒，其包括：前述实施例所述的核酸组合物。
6、第四方面，本专利技术实施例提供了一种阴道微生物的检测方法，其包括：采用前述实施例所述的核酸组合物对样本进行检测。
7、第五方面，本专利技术实施例提供了一种检测或筛查阴道炎的试剂盒，其包括：前述实施例所述的核酸组合物。
8、本专利技术具有以下有益效果：
9、本申请提供的核酸组合物能一次性检出11种阴道微生物，包括阴道加德纳菌、白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、b组链球菌、阴道毛滴虫、詹氏乳杆菌、加氏乳杆菌和卷曲乳杆菌，具有较高的检测灵敏度和特异性，检测限可达到5cfu/ml。
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1.一种核酸组合物，其特征在于，其包括：第一核酸组合～第五核酸组合中的至少一组：
2.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述第一核酸组合～所述第五核酸组合中的至少一组还包括探针。
3.根据权利要求2所述的核酸组合物，其特征在于，所述第一核酸组合还包括探针1，探针1的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
4.根据权利要求1～3任一项所述的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物还包括：用于检测内参基因的第六核酸组合。
5.根据权利要求4所述的核酸组合物，其特征在于，所述内参基因包括：B-actin基因；
6.如权利要求1～5任一项所述的核酸组合物在制备用于检测阴道微生物的试剂盒中的应用。
7.一种检测阴道微生物的试剂盒，其特征在于，其包括：权利要求1～5任一项所述的核酸组合物；
8.一种阴道微生物的检测方法，其特征在于，其包括：采用权利要求1～5任一项所述的核酸组合物对样本进行检测；
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述检测的方法包括荧光定量PCR或数字PCR；
10.一种检测或筛查阴道炎的试剂盒，其特征在于，其包括：权利要求1～5任一项所述的核酸组合物。
...【技术特征摘要】
1.一种核酸组合物，其特征在于，其包括：第一核酸组合～第五核酸组合中的至少一组：
2.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述第一核酸组合～所述第五核酸组合中的至少一组还包括探针。
3.根据权利要求2所述的核酸组合物，其特征在于，所述第一核酸组合还包括探针1，探针1的核苷酸序列如seq id no:3所示；
4.根据权利要求1～3任一项所述的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物还包括：用于检测内参基因的第六核酸组合。
5.根据权利要求4所述的核酸组合物，其特征在于，所述内参基因包括：b-a...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴文娟，李腾，夏江，位玉玲，
申请(专利权)人：上海市东方医院同济大学附属东方医院，
类型：发明
国别省市：
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