本发明专利技术提供了一种快速分离纯化植物细胞核的方法，使用本发明专利技术可以快速分离纯化和富集高质量、高纯度的植物细胞核，所获得的细胞核可以被用于单细胞核RNA‑seq、单细胞核ATAC‑seq和单细胞核DNA甲基化测序等高通量测序工作，对于植物分子生物学和细胞生物学研究具有重大意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物分子细胞生物学，尤其涉及一种快速分离纯化植物细胞核的方法。
技术介绍
1、虽然蛋白质组学、转录组组学以及突变体或者群体筛选等研究策略在研究植物信号感知、转导和下游基因响应机制中发挥着要作用，但是，另一个重要的问题是高等植物的不同类型细胞对于信号的感知和响应具有细胞特异性，因此对于多细胞类型的植物组织而言，这种研究策略往往会忽略不同类型细胞在响应激素或者环境信号时的细胞异质性问题，进而掩盖各个细胞类型专一性的信号感知、转导与下游调控基因，这也是目前植物功能基因鉴定和深入解析植物信号转导途径的重要限制因素，因此，如何以高分辨率方式呈现植物细胞类型专一性的信号转导与下游响应机制成为植物生物学与作物科学研究中的一个高精尖课题，植物细胞类型专一性信号转导与下游响应机制的深入解析可以将植物科学研究带入一个全新的高精度时代，进而为作物分子育种提供精准的理论指导。
2、近年来，单细胞高通量测序技术在医学领域、模式动植物及农业科学领域已经得到广泛应用，极大的提升了人类对于诸多生命发育过程和疾病的理解，单细胞高通量测序技术避免了细胞异质性对于细胞类型特异调控信息的掩盖，将医学科学以及生命科学研究带入了一个精准靶向分析时代。
3、单细胞rna测序技术(scrna-seq)在植物中的应用，提高了人们对拟南芥、水稻、玉米、棉花、花生和杨树等植物物种细胞异质性的认识(zhang tq,xu zg,shang gd,wangjw.a single-cell rna sequencing profiles the developmental landscape ofarabidopsis root.mol plant,2019,12(5):648-660；zhang tq,chen y,liu y,lin wh,wang jw.single-cell transcriptome atlas and chromatin accessibility landscapereveal differentiation trajectories in the rice root.nat commun,2021,12(1):2053；ortiz-ramírez c,guillotin b,xu x,rahni r,zhang s,yan z,coqueiro diasaraujo p,demesa-arevalo e,lee l,van eck j,gingeras tr,jackson d,gallagher kl,birnbaum kd.ground tissue circuitry regulates organ complexity in maize andsetaria.science,2021,374(6572):1247-1252；qin y,sun m,li w,xu m,shao l,liu y,zhao g,liu z,xu z,you j,ye z,xu j,yang x,wang m,lindsey k,zhang x,tul.single-cell rna-seq reveals fate determination control of an individualfibre cell initiation in cotton(gossypium hirsutum).plant biotechnol j,2022,20(12):2372-2388；liu h,hu d,du p,wang l,liang x,li h,lu q,li s,liu h,chen x,varshney rk,hong y.single-cell rna-seq describes the transcriptome landscapeand identifies critical transcription factors in the leaf blade of theallotetraploid peanut(arachis hypogaea l.).plant biotechnol j,2021,19(11):2261-2276；li h,dai x,huang x,xu m,wang q,yan x,sederoff rr,li q.single-cellrna sequencing reveals ahigh-resolution cell atlas of xylemin populus.jintegr plant biol,2021,63(11):1906-1921)，在拟南芥、水稻和玉米中，根细胞类型已经得到了很好的分析(zhang tq,xu zg,shang gd,wang jw.a single-cell rna sequencingprofiles the developmental landscape of arabidopsis root.mol plant,2019,12(5):648-660；zhang tq,chen y,liu y,lin wh,wang jw.single-cell transcriptomeatlas and chromatin accessibility landscape reveal differentiationtrajectories in the rice root.nat commun,2021,12(1):2053；ortiz-ramírez c,guillotin b,xu x,rahni r,zhang s,yan z,coqueiro dias araujo p,demesa-arevaloe,lee l,van eck j,gingeras tr,jackson d,gallagher kl,birnbaum kd.groundtissue circuitry regulates organ complexity in maize and setaria.science,2021,374(6572):1247-1252)，利用scrna-seq技术可以比较水稻和拟南芥根系的转录组异质性，结果表明，水稻中存在厚壁组织和外表皮两种特殊的细胞群，而拟南芥中不存在，在稻田中，厚壁组织和外表皮可以阻止水稻根系径向氧损失(zhang tq,chen y,liu y,linwh,wang jw.single-cell transcriptome atlas and chromatin accessibilitylandscape reveal differentiation trajectories in the rice root.nat commun,2021,12(1):2053)，单子叶植物的根分化与双子叶植物的根分化不同，单子叶植物的侧根冠和表皮不同于双子叶模式物种拟南芥那样具有共同的起始细胞(zhang l,he c,lai y,wang y,kang l,liu a,lan c,su h,gao y,li z,yang f,li q,mao h,chen d,chen w,kauf本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种植物细胞核分离试剂R缓冲液，其特征在于，所述R缓冲液试剂包括：0.4M甘露醇，20mM柠檬酸钠(pH＝7.0)，20mM氯化钾，40mM氯化镁，0.2％聚乙二醇辛基苯基醚，3mM二硫苏糖醇，1％牛血清蛋白。
2.如权利要求1所述试剂在粗分离植物细胞核中的应用。
3.一种根据权利要求1所述试剂粗分离植物细胞核的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.一种植物细胞核纯化试剂RDT缓冲液，其特征在于，所述RDT缓冲液试剂包括：0.4M甘露醇，20mM柠檬酸钠(pH＝7.0)，20mM氯化钾，40mM氯化镁，3mM二硫苏糖醇，1％牛血清蛋白。
5.一种根据权利要求4所述试剂纯化植物细胞核的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述使用RDT缓冲液和8μm的过滤筛网过滤纯化植物细胞核的具体步骤包括：
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述使用RDT缓冲液洗涤纯化植物细胞核的具体步骤包括：
【技术特征摘要】
1.一种植物细胞核分离试剂r缓冲液，其特征在于，所述r缓冲液试剂包括：0.4m甘露醇，20mm柠檬酸钠(ph＝7.0)，20mm氯化钾，40mm氯化镁，0.2％聚乙二醇辛基苯基醚，3mm二硫苏糖醇，1％牛血清蛋白。
2.如权利要求1所述试剂在粗分离植物细胞核中的应用。
3.一种根据权利要求1所述试剂粗分离植物细胞核的方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.一种植物细胞核纯化试剂rdt缓冲液，其特征在于，所述rdt缓冲液试剂包括：0....
【专利技术属性】
技术研发人员：张光恒，钱前，张立华，赵慧博，黄雅婷，胡江，张强，刘雄，董国军，朱丽，
申请(专利权)人：三亚中国农业科学院国家南繁研究院，
类型：发明
国别省市：
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