【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体涉及一种东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法及应用。
技术介绍
1、类风湿性关节炎（ra）是一种常见的自身免疫性疾病，主要表现为滑膜增生性炎症和骨破坏，可导致患者身体机能与生活质量显著下降，进而造成社会负担。类风关的全球发病率约为1%，各年龄层皆可发病，病因复杂，病程长而反复，且易引发多种并发症。ra目前尚未能根治，现有药物包括糖皮质激素、非甾体类抗炎药（nsaids）、以及改善病情抗风湿药（dmards）；这些药物都只能缓解症状，无法控制疾病进展，且有不可避免的不良反应。近年来，具高度靶向性的生物制剂（如：tnf抑制剂）被逐步应用于ra治疗；最近出现的小分子靶向性药物（如：jak抑制剂）进一步克服了蛋白质类生物制剂的缺陷。因此，开发小分子靶向性药物成为ra药物研究的新方向，也是实现个性化精准医疗的关键。
2、目前，化学合成的靶向药物（如小分子jak抑制剂：托法替布tofacitinib、巴瑞替尼baricitinib）面临严重的临床安全性问题。迄今为止，对现有的ra靶向药物进行化学结构修饰来减轻毒副作用的尝试仍未见成功。相比于化学合成物，天然产物类化合物具有复杂多样的骨架和丰富的官能团，具有独特的生物活性，适合作为新药筛选的起点。
3、研究表明，东蒗菪内酯可安全有效地治疗ra，且在ra模型中存在靶标蛋白。对于动物模型，该化合物灌胃佐剂性关节炎（aia）大鼠可显著缓解临床症状（后足红肿、尾部溃烂）、调节炎症因子反应（选择性抑制cox-2表达、调控踝滑膜组织内细胞因子il-10及i
4、天然活性化合物的靶标识别是新药开发的关键一环，不仅有助于发现具开发潜力的化合物结构，而且利于化合物的安全性与有效性评估，甚至可以为复杂疾病发现经典药理信号通路之外的新治疗靶点。活性化合物的靶标识别方法可分为间接与直接两类：间接法包括表型筛选、基因筛选、及虚拟筛选，局限在于不能排除假阴性结果；相比之下，直接法得到广泛应用，基于“药-靶”亲和性将活性化合物通过化学手段连接到固体载体上，进行靶标蛋白的富集与识别。
5、由于磁性纳米颗粒（magnetic nanoparticles，mnps）的优异特性，适合制备成化合物功能化磁性纳米探针，用作靶标垂钓的固体载体。目前，这种新兴探针的合成多是通过对化合物和mnps进行结构修饰后衔接而成。然而，对化合物进行结构修饰不利于高效靶标垂钓，因为：1）在明确活性化合物构效关系之前，改变结构不利于其与靶标蛋白的全方位接触；2）天然活性化合物结构多样，若与mnps的衔接需根据分子结构特点单独设计，则难以用统一方便的方式制作探针。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术的首要目的在于提供一种东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，该方法通过光交联技术，操作简单、快速，且无需事先明确活性化合物构效关系，不影响其与靶标蛋白的全方位接触。
2、本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、一种东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，包括如下步骤：
4、（1）将六水合三氯化铁、聚乙烯吡咯烷酮和乙酸钠分散在乙二醇中反应，得到fe3o4
5、纳米颗粒；将fe3o4纳米颗粒和正硅酸乙酯超声反应，获得fe3o4@sio2纳米颗粒；
6、（2）以乙醇为溶剂，向fe3o4@sio2纳米颗粒加入氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应，得氨基末端修饰的纳米颗粒fe3o4@sio2-nh2；
7、（3）将光亲和衔接物和东莨菪内酯混合并充分溶解在有机溶剂中，用365 nm紫外光常温照射，反应完成后，旋转干燥去除溶剂，获得光亲和衔接物-东莨菪内酯耦合物；
8、（4）将光亲和衔接物-东莨菪内酯耦合物用有机溶剂复溶，并滴入三乙胺，加入氨基末端修饰的纳米颗粒fe3o4@sio2-nh2，混匀后避光震荡过夜，反应完成后，经过产物磁铁分离、甲醇清洗，得到东莨菪内酯功能化磁性纳米探针。
9、优选地，步骤（3）中，所述光亲和衔接物为4-[3-(三氟甲基)-3h-双吖丙啶-3-基]苯甲酸（tdba）、3-(4-溴苯基)-3-(三氟甲基)-3h-二吖丙因（sdad）或3-甲基-3h-双吖丙啶-3-丙酸（mpda）中的一种或几种，更优选4-[3-(三氟甲基)-3h-双吖丙啶-3-基]苯甲酸。
10、优选地，步骤（3）中，所述光亲和衔接物与东莨菪内酯的摩尔比为1-4:1。
11、优选地，步骤（3）中，所述有机溶剂为无水甲醇、二氯甲烷或四氯化碳中的一种或几种，更优选为无水甲醇。
12、优选地，步骤（3）中，所述紫外光常温照射时间为15-60min。
13、优选地，步骤（4）中，所述有机溶剂为异丙醇与二甲基甲酰胺按体积比1:1的混合溶液、二甲基甲酰胺或2-(7-偶氮苯并三氮唑)-四甲基脲六氟磷酸酯中的一种或几种，优选异丙醇与二甲基甲酰胺按体积比1:1的混合溶液。
14、本专利技术还提供了一种东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针，由上述的制备方法制备得到。
15、本专利技术还提供了上述东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针在靶标蛋白垂钓和/或识别中的应用，利用东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针对类风湿关节炎模型蛋白组进行靶标垂钓。对垂钓出的靶标蛋白通过凝胶电泳法分离、液相质谱检测识别后，通过蛋白免疫印迹实验，验证了东蒗菪内酯在hfls-ra细胞膜上的靶标蛋白为波形蛋白，且波形蛋白与东蒗菪内酯的特异性结合包括共价结合及氢键结合。
16、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
17、本专利技术通过光交联反应技术，光亲和衔接物通过紫外光照射生成碳烯，以非选择性的方式在固体表面交叉连接各种活性化合物，该方法适合各种天然活性化合物结构，无需根据分子结构特点单独设计，操作简单、快速，且无需事先明确活性化合物构效关系，不影响其与靶标蛋白的全方位接触。
18、本专利技术利用制备得到的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针在类风湿关节炎的细胞与动物模型进行靶标垂钓，对垂钓出的靶标蛋白进行分离、质谱识别后，成功通过蛋白免疫印迹实验，验证了东蒗菪内酯在hfls-ra细胞膜上的靶标蛋白为波形蛋白，为类风湿关节炎提供了新的治疗靶点。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述光亲和衔接物为4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸、3-(4-溴苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二吖丙因或3-甲基-3H-双吖丙啶-3-丙酸中的一种或几种，优选4-[3-(三氟甲基)-3H-双吖丙啶-3-基]苯甲酸。
3.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述光亲和衔接物与东莨菪内酯的摩尔比为1-4:1。
4.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述有机溶剂为无水甲醇、二氯甲烷或四氯化碳中的一种或几种，优选无水甲醇。
5.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述紫外光常温照射时间为15-60min。
6.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于：步骤（4）中
7.一种东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针，由权利要求1-6任一项所述的制备方法制备得到。
8.权利要求7所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针在靶标蛋白垂钓和/或识别中的应用，其特征在于，利用东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针对类风湿关节炎模型蛋白组进行靶标垂钓。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，东蒗菪内酯的靶标蛋白为波形蛋白，波形蛋白与东蒗菪内酯的特异性结合包括共价结合及氢键结合。
...【技术特征摘要】
1.一种东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述光亲和衔接物为4-[3-(三氟甲基)-3h-双吖丙啶-3-基]苯甲酸、3-(4-溴苯基)-3-(三氟甲基)-3h-二吖丙因或3-甲基-3h-双吖丙啶-3-丙酸中的一种或几种，优选4-[3-(三氟甲基)-3h-双吖丙啶-3-基]苯甲酸。
3.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述光亲和衔接物与东莨菪内酯的摩尔比为1-4:1。
4.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁性纳米探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述有机溶剂为无水甲醇、二氯甲烷或四氯化碳中的一种或几种，优选无水甲醇。
5.根据权利要求1所述的东蒗菪内酯功能化磁...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈绮蕾，陈虎彪，黄玥明，
申请(专利权)人：香港浸会大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。