【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种装载icg的溶瘤痘苗病毒及其在制备治疗结肠癌药物中的应用；本专利技术还提供了制备所述装载icg的溶瘤痘苗病毒的方法。
技术介绍
1、结肠癌是全球最常见的消化道恶性肿瘤，已成为全球癌症死亡的重要原因。由于结肠癌发病较为隐匿，大部分患者在确诊时即处于晚期，晚期患者的肿瘤不能被手术完全切除，并且通常对常规化疗有抵抗力，即使是早期经过手术和辅助化疗的患者，复发率较高，预后较差。因此，亟待更安全有效的治疗模式来提高结肠癌患者治疗成功率。
2、溶瘤痘苗病毒是近年来备受关注的一类溶瘤病毒。痘苗病毒具有安全性好(只在胞浆内复制，不会整合进宿主基因组)、表达效率高、基因组容量大、对热稳定以及成本低廉等优点。当溶瘤痘苗病毒(ovv)感染肿瘤细胞时，一方面能够直接裂解肿瘤细胞；另一方面诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡，释放出的钙网蛋白、atp和hmgb1等细胞危险相关分子信号以及肿瘤相关的或/和特异性的抗原等分子被tme中的抗原呈递细胞识别并触发免疫反应。此外，病毒感染诱导促炎反应，导致细胞因子和趋化因子表达增强，从而激活免疫系统，使“冷”肿瘤变“热”。因此，ovv在抗肿瘤上具有广泛的应用前景。
3、对比传统疗法特异性差和副作用强的缺点，光动力学疗法和光热疗法在肿瘤治疗领域受到广泛关注。光动力学疗法是光敏剂在特定波长光照射下产生大量的活性氧自由基杀死肿瘤细胞。光热是依赖于具有高光热转化率的光热剂将光转化为热以破坏癌细胞。光疗可以降低全身毒性和耐药风险，但靶向性和组织穿透能力均有待提高。吲
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种装载icg的溶瘤痘苗病毒，以及其制备方法和在结肠癌治疗中的应用。本专利技术制备的装载icg的溶瘤痘苗病毒(piovv)，是将近红外荧光染料icg加载在溶瘤痘苗病毒上，同时，选取血小板膜囊泡作为piovv纳米颗粒的涂层，以此来提高piovv在体内的稳定性和局部浓度，发挥光疗和溶瘤病毒的直接杀瘤作用，结合光疗和溶瘤痘苗病毒在肿瘤部位引起的炎症反应，通过多种途径激活肿瘤免疫微环境，显著增强对结肠癌的治疗效果，降低治疗副作用。
2、具体而言，本专利技术提供了一种装载icg的溶瘤痘苗病毒，所述icg加载在溶瘤痘苗病毒上，并且装载icg的溶瘤痘苗病毒由血小板膜包裹的，整体形状为茶盘状，分散性好，颗粒形貌相似，大小均匀，纳米囊泡直径在230～280nm。
3、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述装载icg的溶瘤痘苗病毒的制备包括如下步骤：
4、步骤1：将溶瘤痘苗病毒扩增纯化，收集高滴度的溶瘤痘苗病毒；
5、步骤2：将溶瘤痘苗病毒与icg在黑暗环境下共孵育12小时后，加入血小板膜混合，依次通过逐渐缩小孔径的聚碳酸酯膜过滤器，使icg牢牢结合在溶瘤痘苗病毒上；
6、步骤3：使用差速离心法、超速离心法、蔗糖梯度密度离心法中的一种或几种组合分离提纯得到装载icg的溶瘤痘苗病毒。
7、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述装载icg的溶瘤痘苗病毒的具体制备步骤如下：
8、步骤1：用溶瘤痘苗病毒感染vero细胞，收集混合物反复冻融3次，依次在1000×g离心10分钟，1800×g离心5分钟，离心后取上清液；12000rpm离心上述混合物10分钟，弃上清，然后将沉淀颗粒重新悬浮在无菌pbs中，并转移到浓度分别为28％、32％、36％、40％的梯度蔗糖溶液的离心管中，然后在4℃下以78000×g离心1小时，制备得纯化的溶瘤痘苗病毒；
9、步骤2：将溶瘤痘苗病毒和icg在4℃的黑暗环境中放置1小时，加入血小板膜，然后通过1000nm和400nm的聚碳酸酯膜过滤器依次挤出；
10、步骤3：将混合物用蔗糖密度梯度法洗涤纯化，再用pbs重悬，获得分离提纯后的装载icg的溶瘤痘苗病毒。
11、本专利技术还提供了一种装载icg的溶瘤痘苗病毒制备方法，包括如下步骤：
12、步骤1：将溶瘤痘苗病毒扩增纯化，收集高滴度的溶瘤痘苗病毒；
13、步骤2：将溶瘤痘苗病毒与icg在黑暗环境下共孵育12小时后，加入血小板膜混合，依次通过逐渐缩小孔径的聚碳酸酯膜过滤器，使icg牢牢结合在溶瘤痘苗病毒上；
14、步骤3：使用差速离心法、超速离心法、蔗糖梯度密度离心法中的一种或几种组合分离提纯得到装载icg的溶瘤痘苗病毒。
15、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述步骤1、步骤2和步骤3的具体操作步骤为：
16、步骤1：用溶瘤痘苗病毒感染vero细胞，收集混合物反复冻融3次，依次在1000×g离心10分钟，1800×g离心5分钟，离心后取上清液；12000rpm离心上述混合物10分钟，弃上清，然后将沉淀颗粒重新悬浮在无菌pbs中，并转移到浓度分别为28％、32％、36％、40％的梯度蔗糖溶液的离心管中，然后在4℃下以78000×g离心1小时，制备得纯化的溶瘤痘苗病毒；
17、步骤2：将溶瘤痘苗病毒和icg在4℃的黑暗环境中放置1小时，加入血小板膜，然后通过1000nm和400nm的聚碳酸酯膜过滤器依次挤出；
18、步骤3：将混合物用蔗糖密度梯度法洗涤纯化，再用pbs重悬，获得分离提纯后的装载icg的溶瘤痘苗病毒。
19、本专利技术还提供了一种治疗结肠癌疾病的药物，包含上述装载icg的溶瘤痘苗病毒或上述装载icg的溶瘤痘苗病毒制备方法制备的装载icg的溶瘤痘苗病毒。
20、本专利技术还提供了一种治疗结肠癌的药物组合物，所述药物组合物包含上述装载icg的溶瘤痘苗病毒或上述装载icg的溶瘤痘苗病毒制备方法制备的装载icg的溶瘤痘苗病毒以及任选的药学上可接受的载体。
21、本专利技术还提供了上述装载icg的溶瘤痘苗病毒或上述装载icg的溶瘤痘苗病毒制备方法制备的装载icg的溶瘤痘苗病毒在制备预防和治疗肿瘤疾病的药物中的用途。
22、本专利技术还提供了一种治疗结肠癌疾病的试剂盒，所述试剂盒装有：
23、1)上述装载icg的溶瘤痘苗病毒，或上述装载icg的溶瘤痘苗病毒制备方法制备的装载icg的溶瘤痘苗病毒，或上述治疗结肠癌疾病的药物，或上述药物组合物；和
24、2)任选的使用说明书。
25、本专利技术相对于现有技术具有如下的显著优点及效果：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种装载ICG的溶瘤痘苗病毒，其特征在于，ICG加载在溶瘤痘苗病毒上，并且装载ICG的溶瘤痘苗病毒由血小板膜包裹的，整体形状为茶盘状，分散性好，颗粒形貌相似，大小均匀，纳米药物直径在200～280nm。
2.如权利要求1所述的装载ICG的溶瘤痘苗病毒，其特征在于，所述装载ICG的溶瘤痘苗病毒的制备包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的装载ICG的溶瘤痘苗病毒，其特征在于，具体制备步骤如下：
4.一种装载ICG的溶瘤痘苗病毒制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1、步骤2和步骤3的具体操作步骤为：
6.一种治疗结肠癌疾病的药物，其特征在于，包含权利要求1-3中任一项所述的装载ICG的溶瘤痘苗病毒或权利要求4-5任一项所述的装载ICG的溶瘤痘苗病毒制备方法制备的装载ICG的溶瘤痘苗病毒。
7.如权利要求6所述的治疗结肠癌疾病的药物。
8.一种治疗结肠癌疾病的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-3中任一项所述的装载ICG的溶瘤痘苗病毒或权利要求
9.权利要求1-3中任一项所述的装载ICG的溶瘤痘苗病毒或权利要求4-5任一项所述的装载ICG的溶瘤痘苗病毒制备方法制备的装载ICG的溶瘤痘苗病毒在制备预防和治疗肿瘤疾病的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种装载icg的溶瘤痘苗病毒，其特征在于，icg加载在溶瘤痘苗病毒上，并且装载icg的溶瘤痘苗病毒由血小板膜包裹的，整体形状为茶盘状，分散性好，颗粒形貌相似，大小均匀，纳米药物直径在200～280nm。
2.如权利要求1所述的装载icg的溶瘤痘苗病毒，其特征在于，所述装载icg的溶瘤痘苗病毒的制备包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的装载icg的溶瘤痘苗病毒，其特征在于，具体制备步骤如下：
4.一种装载icg的溶瘤痘苗病毒制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1、步骤2和步骤3的具体操作步骤为：
6.一种治疗结肠癌疾病的药物，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：牟晓洲，黄佳清，蔡宇，童向民，姬力臣，
申请(专利权)人：浙江省人民医院，
类型：发明
国别省市：
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