一种通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法技术

本发明专利技术提供了一种通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，属于微生物学和分子生物学领域，黏细菌活化后接种于CTT液体培养基中，培养一段之间后，添加适量的糖苷水解酶处理一段时间，离心收集菌体，然后用预冷的无菌去离子水洗涤多次，重悬于适量预冷的无菌去离子水中，与一定量的质粒混合后进行电转化。实验证实，经过糖苷水解酶处理后，黏细菌胞外多糖含量明显减少，液体培养时分散细胞数量增多，质粒更容易转化到细胞中。本发明专利技术针对黏细菌液体培养时易聚团的特点，开发了一种简便、低成本的电转化方法，为深入研究黏细菌提供了一种有效途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物学和分子生物学领域，具体涉及一种通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法。

技术介绍

1、黏细菌是自然界中广泛存在的一类革兰氏阴性杆菌，基于目前的分类标准，黏细菌被归类为黏细菌门。黏细菌具有复杂的社会学行为和生活史，是研究细菌多细胞群体行为的重要材料。黏细菌是一类捕食性细菌，其依赖于“狼群性捕食”的捕食策略，细胞聚集起来分泌大量的裂解酶，杀死周围黏附的细菌、真菌等细胞，吸收其养分，黏细菌这一特点可以被用来治理病原菌引起的农业病害。除此之外，黏细菌能够产生多种具有生物活性的次级代谢产物，是继放线菌之后又一重要药源微生物，其次级代谢产物的多样性和新颖性使其在生物医学和环境保护方面具有极大的应用价值。

2、黏细菌的开发和利用依赖于遗传操作技术的进步，但由于黏细菌生长缓慢、胞外物质丰富等特点，其遗传操作技术的开发十分受限。目前，电转化和接合转移是黏细菌中应用较多的遗传操作技术，其中电转化应用最为广泛。模式菌的遗产操作技术较为成熟和完善，但仍有极大部分的非模式黏细菌无法进行遗传操作。

3、黏细菌遗传操作困难的原因之一就是本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，所述糖苷水解酶为α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶或β-葡聚糖酶。

3.如权利要求1所述的通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，所述糖苷水解酶终浓度分别是α-葡萄糖苷酶：0.9-1.1U/mL，β-葡萄糖苷酶：0.09-0.11U/mL，β-葡聚糖酶：36-44U/mL。

4.如权利要求1所述的通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，采用糖苷水解酶对菌液进行处理的温度为28-...

【技术特征摘要】

1.一种通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，所述糖苷水解酶为α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶或β-葡聚糖酶。

3.如权利要求1所述的通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，所述糖苷水解酶终浓度分别是α-葡萄糖苷酶：0.9-1.1u/ml，β-葡萄糖苷酶：0.09-0.11u/ml，β-葡聚糖酶：36-44u/ml。

4.如权利要求1所述的通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，采用糖苷水解酶对菌液进行处理的温度为28-32℃。

5.如权利要求1所述的通过酶降解胞外物质并提高黏细菌转染率的方法，其特征在于，采用糖苷水解酶对菌液进行处理的时间为1-1.2h。

6.如权利要求1所述的通过...

【专利技术属性】
技术研发人员：李越中，卓丽，马寒，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：