【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于鱼类养殖领域，具体涉及用于鲟鱼性别鉴定的基因组dna片段、pcr引物、lamp引物及其应用。
技术介绍
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技术介绍
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1、鲟鱼是极其名贵的鱼类，由鲟鱼籽制成的鱼籽酱富含人体必需氨基酸、多种不饱和脂肪酸、维生素等物质，营养价值极高，享有“黑色黄金”的美誉，在2013年其国际售价高达每千克800-900美元，因此雌性鲟鱼比雄性鲟鱼具有更高的经济价值。目前鲟鱼养殖和鱼子酱的生产作为新兴产业，在我国发展异常迅速，据初步统计，我国鲟鱼商品鱼养殖年产量已突破2万吨，占世界鲟鱼总产量的66.17％，占养殖总产量的72.46％，俨然已经是最大的鲟鱼养殖国和主要的鱼子酱出口国，有着巨大的市场潜力。
2、然而，鲟鱼个体大，性成熟晚，养殖鲟鱼性成熟平均达7年以上，鲟鱼虽属雌雄异体发育，但因鲟鱼终生无第二性征，不同性别个体之间从形态上无法辨别，这显然对鲟鱼养殖产业不利。如不能够依照雌雄性别分别进行集约化养殖或一定性别比例进行饲养，造成饲养过多雄性个体的资源浪费，增加了养殖成本，阻碍了鲟鱼养殖产业化的快速发展。反而，如果能在养殖中对鲟鱼早期进行性别筛选，对雌、雄群体进行定向选育，可以获得更高的经济效益。因此，开发鲟鱼性别鉴定的新技术是目前鲟鱼养殖产业可持续化发展的重点关注领域之一。
技术实现思路
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技术实现思路
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1、本专利技术的第一个目的是提供用于鲟鱼性别鉴定的基因组dna片段。
2、所述的用于鲟鱼性别鉴定的基因组dna片段，其核苷酸序列如
3、本专利技术的第二个目的是提供上述基因组dna片段在鲟鱼性别鉴定中的应用。
4、本专利技术的第三个目的是提供一种鲟鱼性别鉴定的pcr引物，其包括：
5、asc 418f:5’-cagaaacccagataacaaga-3’；
6、asc 418r:5’-ccatgaaaatttggggccca-3’。
7、本专利技术的第四个目的是提供一种鲟鱼性别鉴定的lamp引物，其包括：
8、f3：5’-atacccacgcatcacaag-3’；
9、b3：5’-ctgttcttttccattatactacct-3’；
10、fip：5’-acgcagggttaatgaactcttaaaagtcgaacaacaagactggt-3’；
11、bip：
12、5’-tcagagcatacattaaacacaggaactatttaaatggtgaaagaagtgag-3’；
13、lf：5’-gctagtgtacatcagcaatttgca-3’；
14、lb：5’-aatcacacactgtttacagacaggt-3’。
15、本专利技术的第五个目的是提供一种鲟鱼性别鉴定的试剂盒，其包括上述pcr引物或lamp引物。
16、本专利技术的六个目的是提供上述pcr引物或lamp引物在鲟鱼性别鉴定中的应用。
17、本专利技术的第七个目的是提供一种鲟鱼性别鉴定的方法，包括以下步骤：
18、提取待测鲟鱼的基因组dna，利用上述pcr引物或lamp引物进行扩增，通过是否扩增出产物来判断鲟鱼性别。
19、当利用pcr引物时，其pcr反应体系为模板dna约20ng；premix taq 12.5ul；asc418f/r上下游引物终浓度分别为0.4μm；补充ddh2o至25μl；pcr反应条件为94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火45s，72℃延伸30s，30-35个循环；72℃最后延伸10min。
20、当利用lamp引物时，反应体系为模板dna40ng；引物fip/bip终浓度1.6μm；b3/f3终浓度0.4μm；lf/lb终浓度0.8μm；lamp反应mix 5μl；bst iidna polymerase 2μl；中性红浓度100μm；补充ddh2o至25μl；lamp反应条件为60-65℃条件下，30-40min。
21、本专利技术主要利用全基因组重测序技术和比较基因组学等方法，筛选到一种施氏鲟雌性特异表达dna片段、pcr特异引物，后经验证适用于所有检测的养殖鲟鱼，可作为一种特异标记用于鲟鱼的早期性别鉴定。经技术优化，以更直观更省时的lamp法快速鉴定养殖鲟鱼的早期性别。适用于施氏鲟、达氏鳇、西伯利亚鲟、俄罗斯鲟、欧洲鳇、西杂(西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂)、大杂(达氏鳇♀×施氏鲟♂)等。本专利技术提供一种鲟鱼性别鉴定的新方法，省时直观，方法简单，不需要贵重仪器，准确性高。
22、本专利技术为鲟鱼性别鉴定提供了新的雌性鲟鱼特有的基因组dna片段，pcr引物和lamp引物以及试剂盒及检测应用方法。与现有技术相比，lamp检测试剂盒可更直观更省时的快速鉴定养殖鲟鱼的早期性别。适用于施氏鲟、达氏鳇、西伯利亚鲟、俄罗斯鲟、小体鲟、欧洲鳇、西杂(西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂)、大杂(达氏鳇♀×施氏鲟♂)、bester鲟(欧洲鳇♀×小体鲟♂)等。本专利技术提供一种鲟鱼性别鉴定的新方法，省时直观，方法简单，不需要贵重仪器，更适合一线鲟鱼养殖场，准确性高。
23、本专利技术的有益效果如下：
24、1)提供一种新的、可用于鉴别常见养殖鲟鱼性别的基因组dna片段及其应用。
25、2)提供检测所述鲟鱼性别鉴定的pcr引物。
26、3)提供检测所述鲟鱼性别鉴定的lamp引物，性别鉴定结果时间比pcr法提早2小时。
27、4)提供检测所述鲟鱼性别鉴定的lamp法检测试剂盒，性别鉴定结果时间比pcr法提早4小时。
28、5)提供一种鲟鱼性别鉴定的新方法，省时直观，方法简单，不需要贵重仪器，准确性高。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于鲟鱼性别鉴定的基因组DNA片段，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
2.权利要求1所述的基因组DNA片段在鲟鱼性别鉴定中的应用。
3.一种鲟鱼性别鉴定的PCR引物，其特征在于，包括：
4.一种鲟鱼性别鉴定的LAMP引物，其特征在于，包括：
5.一种鲟鱼性别鉴定的试剂盒，其特征在于，包括权利以要求3所述的PCR引物或权利要求4所述的LAMP引物。
6.权利要求3所述的PCR引物或权利要求4所述的LAMP引物在鲟鱼性别鉴定中的应用。
7.一种鲟鱼性别鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，当利用PCR引物时，其PCR反应体系为模板DNA 20ng；premix Taq 12.5ul；Asc 418F/R上下游引物终浓度分别为0.4μM；补充ddH2O至25μl；PCR反应条件为94℃预变性3min；94℃变性30s，60℃退火45s，72℃延伸30s，30-35个循环；72℃最后延伸10min。
9.根据权利要求7所述
...【技术特征摘要】
1.一种用于鲟鱼性别鉴定的基因组dna片段，其特征在于，其核苷酸序列如seq idno.1所示。
2.权利要求1所述的基因组dna片段在鲟鱼性别鉴定中的应用。
3.一种鲟鱼性别鉴定的pcr引物，其特征在于，包括：
4.一种鲟鱼性别鉴定的lamp引物，其特征在于，包括：
5.一种鲟鱼性别鉴定的试剂盒，其特征在于，包括权利以要求3所述的pcr引物或权利要求4所述的lamp引物。
6.权利要求3所述的pcr引物或权利要求4所述的lamp引物在鲟鱼性别鉴定中的应用。
7.一种鲟鱼性别鉴定的方法，其特征在于，包括...
【专利技术属性】
技术研发人员：张秀娟，陈金平，吴文化，麦浩霆，刘凯伟，江海英，李林妙，
申请(专利权)人：广东省科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：
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