【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗，具体涉及一种腺病毒载体重组新型冠状病毒吸入疫苗。
技术介绍
1、omicron针对原始毒株而言致病力减弱，而传播能力更强，速度更快。这主要是因为其结构与原始毒株相比，刺突蛋白(spike,s)中含有多个突变位点，并且多个突变位点位于受体结合区。刺突蛋白中累积的大量突变使得该流行株一定程度上能够逃逸新冠原型株疫苗激发的抗体，进而引起新冠原型株疫苗失效或保护力降低。
2、自2021年11月份出现ba.1以来，在此基础上也在不断变化，出现了ba.2.12.1以及ba.4、ba.5，ba.4、ba.5是奥密克戎早期变异株ba.1的基础上衍生而来，与ba.1相比，s蛋白有多处氨基酸突变。但是，ba.4和ba.5这两个变异株在s蛋白上是完全一样的，其区别主要在其他非结构蛋白上。而在传播力方面，根据已有研究数据发现，ba.4、ba.5的传播能力比奥密克戎早期变异株ba.1略有增强。在致病力方面。ba.4、ba.5感染者病情严重程度和奥密克戎早期变异株相比没有太明显变化，但是对老年人的威胁仍然很大，尤其是没有接种过疫苗的高龄老人感染ba.4、ba.5，发生重症、导致死亡的风险依然很高。对于疫苗的影响，有研究表明，疫苗接种者的血清针对ba.4、ba.5的中和能力有所下降。
3、前期研究表明，将奥密克戎(omicron,b.1.1.529)变异株的s蛋白和原型株的rbd基因通过高效自剪切p2a进行连接，构建奥密克戎(omicron,b.1.1.529)变异株的s基因和原型株rbd基因的质粒制备腺病毒载体疫
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，本专利技术的一个方面，选择编码新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5亚型s蛋白作为表达蛋白，以经过优化之后的核酸序列制备重组病毒载体疫苗，吸入给药免疫后机体可产生针对ba.4/ba.5变异株病毒的中和抗体和细胞免疫反应，具备良好免疫原性；同时还可产生针对原型株、ba.4/5、bf.7、bq.1和/或xbb变异株的中和抗体，具备更全面的保护性。
2、本专利技术提供了一种针对sars-2-cov型冠状病毒刺突蛋白的优化设计，该设计在刺突蛋白的氨基酸序列特定位点中引入至少一个突变，改变s蛋白构象，提高其免疫产生中和抗体的水平，降低ade效应抗体水平。
3、另一个方面，本专利技术的多价腺病毒载体重组新型冠状病毒疫苗使用不会影响到各抗原成分的免疫原性；腺病毒载体重组新冠病毒原始毒株抗原蛋白和ba.4/ba.5变异株抗原蛋白之间化学相容性良好。之间不会产生免疫反应的相互干扰。疫苗原始毒株抗原蛋白和ba.4/ba.5变异株抗原蛋白不会发生抗原竞争。辅料与抗原间的种类及比例合适。可以有效保护机体免受ba.4/ba.5变异株和原始毒株的感染。
4、另一个方面，本专利技术的多价腺病毒载体重组新型冠状病毒疫苗还可同时有效保护机体免受覆盖bf.7、bq.1和xbb变异株的感染。
5、为了实现上述目的，本专利技术提供一种含多核苷酸的重组腺病毒载体，其特征在于，所述重组腺病毒表达多核苷酸分子编码的新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5的刺突蛋白；所述腺病毒为人腺病毒或黑猩猩腺病毒；优选地，所述人腺病毒选自：adhu2、adhu4、adhu5、adhu7、adhu11、adhu26、adhu35、adhu55；更优选为adhu5型。
6、优选地，所述编码序列为新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5亚型s蛋白的序列的s1/s2两个亚基之间的furin裂解位点688rrar691位突变和/或将92kv993位突变，以使s蛋白固定到融合前构象。
7、优选的，包含688rrar691突变为gsag和/或将992pp993突变为pp；
8、优选地，所述编码序列为新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5亚型s蛋白的序列1-12位氨基酸信号肽序列替换为信号肽为tpa；
9、优选地，编码新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5亚型s蛋白的氨基酸的序列如seq id no:2或3所示具有至少75％的同源性，更优选地，具有至少85％、90％、95％、97％、98％、99％的同源性。
10、本专利技术提供一种重组腺病毒载体疫苗，含有重组腺病毒载体及药学上可接受的辅料；优选地，所述疫苗为黏膜给药制剂，更优选地，为吸入给药制剂，更优选地，为鼻吸入或经口吸入；更优选地，所述吸入给药制剂为液体吸入制剂或干粉吸入制剂；更优选地，所述黏膜包括，鼻黏膜、口腔黏膜或肺粘膜。
11、本专利技术提供一种气溶胶，含有所述重组腺病毒载体及药学上可接受的辅料。
12、优选地，所述气溶胶为10μm以下的颗粒；优选地，0.5～10μm,更优选地，5～10μm。
13、具体的，药学上可接受的辅料包括但不限于：缓冲剂、保护剂、稳定剂、表面活性剂、渗透压调节剂、佐剂、防腐剂、灭活剂或人源白蛋白中的一种或多种；优选地，为人血白蛋白；所述缓冲剂包括但不限于hepes、his、tris、pb、琥珀酸、柠檬酸中的一种或多种；所述保护剂包括但不限于明胶、乙醇、二乙氨四乙酸(edta)、二乙氨四乙酸二钠(edta-2na)和氯化镁中的一种或者多种；所述稳定剂包括但不限于蔗糖、甘露醇、岩藻糖和麦芽糖中的一种或多种；所述表面活性剂包括但不限于吐温、司盘、甘油中的一种或者多种；所述渗透压调节剂包括但不限于氯化钠或省去；优选地，所述辅料组分包括甘露醇，蔗糖，氯化钠，氯化镁，hepes，聚山梨酯80，甘油，优选地，甘露醇10-200mg/ml、氯化钠0.5-30mg/ml、hepes0.05-10mg/ml、聚山梨酯800.01-10mg/ml、甘油0.1-5mg/ml、氯化镁0.1-5mg/ml、蔗糖1-80mg/ml；优选地，为甘露醇10-80mg/ml、氯化钠1-15mg/ml、hepes 0.1-5mg/ml、聚山梨酯800.1-5mg/ml、甘油0.5-5mg/ml、氯化镁0.2-5mg/ml、蔗糖5-40mg/ml。
14、本专利技术提供一种多价重组腺病毒载体新型冠状病毒疫苗试剂盒。
15、具体的，所述试剂盒为黏膜给药疫苗试剂盒，包括，第一种免疫原性组合物和第二种免疫原性组合物；优选地，所述第一种免疫原性组合物为含有编码新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5的刺突蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种含多核苷酸的重组腺病毒载体，其特征在于，所述重组腺病毒表达多核苷酸分子编码的新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5的刺突蛋白；所述腺病毒为人腺病毒或黑猩猩腺病毒；优选地，所述人腺病毒选自：AdHu2、AdHu4、AdHu5、AdHu7、AdHu11、AdHu26、AdHu35、AdHu55；更优选为AdHu5型。
2.根据权利要求1项所述的重组腺病毒载体，其特征在于，所述编码序列为新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型S蛋白的序列的S1/S2两个亚基之间的furin裂解位点688RRAR691位突变和/或将992KV993位突变，包含688RRAR691突变为GSAG和/或将992PP993突变为PP。
3.根据权利要求1或2所述的重组腺病毒载体，其特征在于，所述编码序列为新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型S蛋白信号肽序列替换为信号肽为TPA。
4.根据权利要求1-3任一项所述的重组腺病毒载体，其特征在于，编码新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型刺突蛋白的氨基酸的序列如S
5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组腺病毒载体在制备黏膜给药免疫组合物中的应用。
6.一种重组腺病毒载体疫苗，其特征在于，含有权利要求1-4任一项所述重组腺病毒载体及药学上可接受的辅料；优选地，所述疫苗为黏膜给药制剂，更优选地，为吸入给药制剂，更优选地，为鼻吸入或经口吸入；更优选地，所述吸入给药制剂为液体制剂或干粉制剂；更优选地，所述黏膜包括，鼻黏膜、口腔黏膜或肺粘膜。
7.一种气溶胶，其特征在于，含有权利要求1-4中任一项所述重组腺病毒载体及药学上可接受的辅料。
8.根据权利要求7所述的气溶胶，其特征在于，所述气溶胶为10μm以下的颗粒；优选地，0.5～10μm,更优选地，5～10μm。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的重组腺病毒载体疫苗或气溶胶，其特征在于，所述药学上可接受的辅料包括但不限于：缓冲剂、保护剂、稳定剂、表面活性剂、渗透压调节剂、佐剂、防腐剂、灭活剂或人源白蛋白中的一种或多种；优选地，为人血白蛋白；所述缓冲剂包括但不限于HEPES、HIS、TRIS、PB、琥珀酸、柠檬酸中的一种或多种；所述保护剂包括但不限于明胶、乙醇、二乙氨四乙酸(EDTA)、二乙氨四乙酸二钠(EDTA-2Na)和氯化镁中的一种或者多种；所述稳定剂包括但不限于蔗糖、甘露醇、岩藻糖和麦芽糖中的一种或多种；所述表面活性剂包括但不限于吐温、司盘、甘油中的一种或者多种；所述渗透压调节剂包括但不限于氯化钠或省去；优选地，所述辅料组分包括甘露醇，蔗糖，氯化钠，氯化镁，HEPES，聚山梨酯80，甘油，优选地，甘露醇10-200mg/ml、氯化钠0.5-30mg/ml、HEPES 0.05-10mg/ml、聚山梨酯800.01-10mg/ml、甘油0.1-5mg/ml、氯化镁0.1-5mg/ml、蔗糖1-80mg/ml；优选地，为甘露醇10-80mg/ml、氯化钠1-15mg/ml、HEPES 0.1-5mg/ml、聚山梨酯800.1-5mg/ml、甘油0.5-5mg/ml、氯化镁0.2-5mg/ml、蔗糖5-40mg/ml。
10.一种多价重组腺病毒载体新型冠状病毒疫苗试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为黏膜给药疫苗试剂盒，包括，第一种免疫原性组合物和第二种免疫原性组合物；优选地，所述第一种免疫原性组合物为含有权利要求1-4所述的腺病毒载体；所述第二种免疫原性组合物包含编码新型冠状病毒原型株S蛋白的基因序列的重组腺病毒载体；更优选地，所述免疫原性组合物还包含药学上可接受的辅料；更优选地，所述组合物为分开包装的或将组合物混合。
11.根据权利要求10所述的疫苗试剂盒，其特征在于，编码新型冠状病毒原型株S蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示具有至少75％的同源性，优选地，具有至少85％、90％、95％、97％、98％、99％的同源性。
12.根据权利要求6-11任一项所述的重组腺病毒载体疫苗或或气溶胶或疫苗试剂盒，其特征在于，所述重组腺病毒载体疫苗或免疫原性组合物中重组病毒载体的含量为1×108～1×1012VP/ml，优选地为1×109VP/ml。
13.根据权利要求6-12中任一项所述重组腺病毒载体疫苗或试剂盒，其特征在于，所述黏膜给药制剂选自：液体剂型、固体剂型、半固体剂型；优选地，为吸入给药制剂，更优选地，为鼻吸...
【技术特征摘要】
1.一种含多核苷酸的重组腺病毒载体，其特征在于，所述重组腺病毒表达多核苷酸分子编码的新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5的刺突蛋白；所述腺病毒为人腺病毒或黑猩猩腺病毒；优选地，所述人腺病毒选自：adhu2、adhu4、adhu5、adhu7、adhu11、adhu26、adhu35、adhu55；更优选为adhu5型。
2.根据权利要求1项所述的重组腺病毒载体，其特征在于，所述编码序列为新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5亚型s蛋白的序列的s1/s2两个亚基之间的furin裂解位点688rrar691位突变和/或将992kv993位突变，包含688rrar691突变为gsag和/或将992pp993突变为pp。
3.根据权利要求1或2所述的重组腺病毒载体，其特征在于，所述编码序列为新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5亚型s蛋白信号肽序列替换为信号肽为tpa。
4.根据权利要求1-3任一项所述的重组腺病毒载体，其特征在于，编码新型冠状病毒omicron变异株ba.4/ba.5亚型刺突蛋白的氨基酸的序列如seq id no:2或seq id no:3所示具有至少75％的同源性，优选地，具有至少85％、90％、95％、97％、98％、99％的同源性。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组腺病毒载体在制备黏膜给药免疫组合物中的应用。
6.一种重组腺病毒载体疫苗，其特征在于，含有权利要求1-4任一项所述重组腺病毒载体及药学上可接受的辅料；优选地，所述疫苗为黏膜给药制剂，更优选地，为吸入给药制剂，更优选地，为鼻吸入或经口吸入；更优选地，所述吸入给药制剂为液体制剂或干粉制剂；更优选地，所述黏膜包括，鼻黏膜、口腔黏膜或肺粘膜。
7.一种气溶胶，其特征在于，含有权利要求1-4中任一项所述重组腺病毒载体及药学上可接受的辅料。
8.根据权利要求7所述的气溶胶，其特征在于，所述气溶胶为10μm以下的颗粒；优选地，0.5～10μm,更优选地，5～10μm。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的重组腺病毒载体疫苗或气溶胶，其特征在于，所述药学上可接受的辅料包括但不限于：缓冲剂、保护剂、稳定剂、表面活性剂、渗透压调节剂、佐剂、防腐剂、灭活剂或人源白蛋白中的一种或多种；优选地，为人血白蛋白；所述缓冲剂包括但不限于hepes、his、tris、pb、琥珀酸、柠檬酸中的一种或多种；所述保护剂包括但不限于明胶、乙醇、二乙氨四乙酸(edta)、二乙氨四乙酸二钠(edta-2na)和氯化镁中的一种或者多种；所述稳定剂包括但不限于蔗糖、甘露醇、岩藻糖和麦芽糖中的一种或多种；所述表面活性剂包括但不限于吐温、司盘、甘油中的一种或者多种；所述渗透压调节剂包括但不限于氯化钠或省去；优选地，所述辅料组分包括甘露醇，蔗糖，氯化钠，氯化镁，hepes，聚山梨酯80，甘油，优选地，甘露醇10-2...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑秀玉，邵娟，赵晓龙，周站平，邓捷，司伟雪，苟锦博，李军强，廖正芳，张旭，许丽锋，朱涛，
申请(专利权)人：康希诺生物股份公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。