【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物，具体提供一种氯霉素或氟苯尼考的抗体以及氯霉素和氟苯尼考的联检试剂盒。
技术介绍
1、氯霉素属于一种广谱抗生素，因其对革兰氏阴性、阳性菌以及敏感菌都有良好的抑制作用，曾作为动物饲料的添加剂被广泛使用，后因氯霉素会导致造血功能障碍等严重副作用，国际上及国内对动物源性食品的氯霉素残留进行严格限制。1999年我国农业部发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》，规定了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中不得检出。2002年3月被我国农业部发布关于《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》将其列为禁止使用的抗生素。
2、氟苯尼考是上世纪八十年代后期成功研制的氯霉素类广谱抗生素，氯霉素结构中的硝基是引起再生障碍性贫血的主要基团，而氟苯尼考在结构上以甲砜基取代了硝基，其不再产生再生障碍性贫血的不良反应，因此氟苯尼考在兽医临床中应用广泛。但是抗生素的不当使用同样会导致动物源性食品中残留过多，对人的身体健康造成严重影响。因此国际上和国内对氟苯尼考的最高残留限量做出了严格规定。gb31650-2019食品安全国家标准中对氟苯尼考的残留限量做出严格限定：氟苯尼考在家禽的产蛋期和牛羊的泌乳期被列为禁用药物。
3、禽肉、禽蛋和牛/羊奶中的氟苯尼考和氯霉素残留检测，目前均主要采用单一的高效液相法和液质联用法，该检测方法准确，但是仪器昂贵、前处理方法复杂，时间长，操作繁琐，不利于高通量、快速的现场检测。
4、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的第一
2、本专利技术的第二目的在于提供一种特异性结合氟苯尼考的抗体或抗原结合片段。
3、本专利技术的第三目的在于提供抗体或抗原结合片段在制备检测氯霉素和/或氟苯尼考产品中的应用。
4、本专利技术的第四目的在于提供一种氯霉素和氟苯尼考的生物芯片联检试剂盒。
5、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
6、一种特异性结合氯霉素的抗体或抗原结合片段，抗体或抗原结合片段含有重链可变区和轻链可变区，其中，重链可变区为seq id no.2所示的氨基酸序列，轻链可变区为seqid no.4所示的氨基酸序列。
7、在一个实施方式中，seq id no.2的编码核苷酸序列为seq id no.1或其简并序列；seq id no.4的编码核苷酸序列为seq id no.3或其简并序列。优选地，抗体为单克隆抗体4d9。
8、一种特异性结合氟苯尼考的抗体或抗原结合片段，抗体或抗原结合片段含有重链可变区和轻链可变区，重链可变区为seq id no.6所示的氨基酸序列；轻链可变区为seq idno.8所示的氨基酸序列。
9、在一个实施方式中，seq id no.6的编码核苷酸序列为seq id no.5或其简并序列；seq id no.8的编码核苷酸序列为seq id no.7或其简并序列；优选地，抗体为单克隆抗体4b1。
10、在本专利技术中，上述的抗原结合片段可以是fab、fab’、f(ab’)2、scfv或fv片段。其中，单克隆抗体4d9亚型为igg1，轻链为κ链；单克隆抗体4b1亚型为igg1，轻链为κ链。
11、上述特异性结合氯霉素的抗体或抗原结合片段、特异性结合氟苯尼考的抗体或抗原结合片段均可用于检测氯霉素和/或氟苯尼考，以此制备的产品可以为试剂盒，例如试纸条、elisa试剂盒、生物芯片等。
12、一种氯霉素和氟苯尼考的生物芯片联检试剂盒，包括氯霉素和氟苯尼考检测芯片、抗体工作液和酶标工作液。其中，抗体工作液包括特异性结合氯霉素的抗体和特异性结合氟苯尼考的抗体；特异性结合氯霉素的抗体含有氨基酸序列如seq id no.2所示的重链可变区和seq id no.4所示的轻链可变区；特异性结合氟苯尼考的抗体含有氨基酸序列如seq id no.6所示的重链可变区和seq id no.8所示的轻链可变区。
13、在优选的实施方式中，特异性结合氯霉素的抗体为单克隆抗体4d9；特异性结合氟苯尼考的抗体为单克隆抗体4b1。
14、在一些实施方式中，特异性结合氯霉素的抗体的工作浓度为0.02μg/ml；特异性结合氟苯尼考的抗体的工作浓度为0.03μg/ml。
15、本专利技术中，抗体工作液的缓冲液可以为点样液，具体为：5w/v％甘油溶液、5w/v％山梨醇溶液、0.05v/v％曲拉通溶液、dmso溶液、ph6.8 pbs溶液按照10∶15∶0.1∶50∶100的体积比混匀而成。
16、在一些实施方式中，氯霉素和氟苯尼考检测芯片设有点样点，点样点包括质控品点1～3、氯霉素检测点6、氟苯尼考检测点5和空白对照点4，质控品点1～3包被有质控品，质控品为鼠igg，包被量为1～4ng/点。质控品点1～3具体为质控品点1、质控品点2和质控品点3。每一个质控品点的鼠igg的包被量均独立地可以但不限于为1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0ng/点。质控品点1～3的鼠igg的包被量可以互不相同。
17、与传统elisa试剂盒均设有标准品作为试剂盒内质控品相比，标准品要求较高、制备较难、费用昂贵，本专利技术生物芯片检测试剂盒通过技术提升，在反应载体上设有质控品点，质控品为商品化鼠igg，大大提升试剂盒操作便捷性及准确性。本专利技术经研究发现在一定含量范围内的鼠igg可作为质控品，无需设阴性对照、阳性对照，鼠igg的作用在于作为单个检测孔内无抗体反应时的反应对照，用于评估试验的有效性，体现无阻断时酶标试剂的反应程度。而鼠igg可以商业上购买或通过常规方法制备，操作简便。
18、在优选的实施方式中，质控品点的包被量优选为4ng/点。
19、在一些实施方式中，氯霉素检测点6包被有0.3～0.4ng/点的氯霉素包被原。氯霉素包被原的包被量可以为0.30ng/点、0.31ng/点、0.32ng/点、0.33ng/点、0.34ng/点、0.35ng/点、0.36ng/点、0.37ng/点、0.38ng/点、0.39ng/点或0.40ng/点。点样体积为20nl/点。
20、氯霉素包被原：将氯霉素与丁二酸酐反应得到氯霉素半抗原，经活化与ova(卵清白蛋白)反应得到氯霉素包被原。
21、在一些实施方式中，所述氟苯尼考检测点5包被有0.4～0.6ng/点的氟苯尼考包被原。氟苯尼考包被原的包被量可以为0.40ng/点、0.41ng/点、0.42ng/点、0.43ng/点、0.44ng/点、0.45ng/点、0.46ng/点、0.47ng/点、0.48ng/点、0.49ng/点、0.50ng/点、0.51ng/点、0.52ng/点、0.53ng/点本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性结合氯霉素的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段含有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；所述轻链可变区为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，SEQ ID NO.2的编码核苷酸序列为SEQ ID NO.1或其简并序列；SEQ ID NO.4的编码核苷酸序列为SEQ ID NO.3或其简并序列；
3.权利要求1或2所述的抗体或抗原结合片段在制备检测氯霉素产品中的应用。
4.一种特异性结合氟苯尼考的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段含有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列；所述轻链可变区为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，SEQ ID NO.6的编码核苷酸序列为SEQ ID NO.5或其简并序列；SEQ ID NO.8的编码核苷酸序列为SEQ ID NO.7或其简并序列；
...【技术特征摘要】
1.一种特异性结合氯霉素的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段含有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区为seq id no.2所示的氨基酸序列；所述轻链可变区为seq id no.4所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，seq id no.2的编码核苷酸序列为seq id no.1或其简并序列；seq id no.4的编码核苷酸序列为seq id no.3或其简并序列；
3.权利要求1或2所述的抗体或抗原结合片段在制备检测氯霉素产品中的应用。
4.一种特异性结合氟苯尼考的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段含有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区为seq id no.6所示的氨基酸序列；所述轻链可变区为seq id no.8所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，seq id ...
【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，郭江涛，张许科，
申请(专利权)人：洛阳中科生物芯片技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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