一种蛋白质芯片板的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种蛋白质芯片板的制备方法，所述制备方法包括：步骤1)配制膜处理液，将纳米膜浸泡在所述膜处理液中，然后用纯化水冲洗、吹干；步骤2)配制点样液，将蛋白质用点样液稀释后于纳米膜上进行点样，获得蛋白质芯片；步骤3)将蛋白质芯片于温度23℃

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质芯片板的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种蛋白质芯片板的制备方法，属于生物技术领 域。

技术介绍

[0002]蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白 质表达分析，研究蛋白质之间的相互作用，在疾病筛查，早期诊断以及 筛选药物作用的蛋白靶点方面有突出的优势。蛋白质芯片技术的研究对 象是蛋白质，其原理是对固相载体进行特殊的化学处理，使其表面具有 一定的功能性，再将一种蛋白分子产物固定其上(如酶、抗原、抗体、 受体、配体、细胞因子等)，根据这些生物分子的特性，捕获能与之特 异性结合的待测蛋白(存在于血清、血浆、淋巴、间质液、尿液、渗出 液、细胞溶解液、分泌液等)，经洗涤、纯化，再进行确认和生化分析； 它为获得重要生命信息(如未知蛋白组分、序列、体内表达水平、生物 学功能、与其他分子(如酶、抗原、抗体、受体、配体、细胞因子等) 的相互调控关系、药物筛选、药物靶位的选择等)提供有力的技术支持。
[0003]蛋白质微阵列是蛋白质芯片的其中一类，其原理是通过点样 机械装置在基底上面进行设计点样，将点样针吸取纯化后的蛋白质溶液， 然后移至基材上方，通过接触或非接触式的喷射，将蛋白质溶液固定在 基材表面，后续处理后形成蛋白质芯片。
[0004]但是，在试剂盒制备过程中，蛋白质芯片板是造成批内批间 差异化的主要原因，蛋白质芯片板的制备所涉及到的处理液影响样品点 的形态及溢出状态，矩阵也极易不规整，封闭液影响蛋白质后续反应结 果，但本领域对于点样仪及点样针或蛋白质芯片的基材研究成果比较多， 鲜有对基材处理液、封闭液进行深入研究的。因此，亟需建立一种能 减小蛋白质芯片差异化的制备方法，以满足大批量转产的需求。

技术实现思路

[0005]为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于优化一种蛋白质 芯片板制备的方法，通过优化使得蛋白质样品点无溢出无拖尾无晕圈现 象、边缘清晰，矩阵规整，样品点直径变异系数较小，反应后不同蛋白 的颜色适中、灰度值适中且变异系数较小，重复性较好，保存期较长。
[0006]为此，本专利技术提供了一种蛋白质芯片板的制备方法，所述制 备方法包括：
[0007]步骤1)配制膜处理液，将纳米膜浸泡在所述膜处理液中， 然后用纯化水冲洗、吹干；
[0008]步骤2)配制点样液，将蛋白质用点样液稀释后于纳米膜上 进行点样，获得蛋白质芯片；
[0009]步骤3)将蛋白质芯片于温度23℃
±
2℃、湿度25％以下的 条件下干燥；
[0010]步骤4)配制膜封闭液，用膜封闭液对蛋白质芯片进行封闭， 获得蛋白质芯片板。
[0011]作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤1)中所述膜处理液 为含4％w/v(g/ml)EDC、2％w/v(g/ml)NHS、0.25％v/v～1％v/v DMSO 的PBS溶液，临用前加入0.1％v/v DCC混
匀，所述PBS溶液为pH值 5.5的PBS溶液。
[0012]DMSO含量可以选自0.25％v/v、0.30％v/v、0.35％v/v、 0.40％v/v、0.45％v/v、0.50％v/v、0.55％v/v、0.60％v/v、0.65％v/v、0.70％v/v、 0.75％v/v、0.80％v/v、0.85％v/v、0.90％v/v、0.95％v/v、1％v/v。
[0013]作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤1)中所述膜处理液 为4％w/v EDC、2％w/v NHS、0.5％v/v DMSO的PBS溶液，临用前加入 0.1％v/v DCC混匀。
[0014]作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤1)中，将所述纳米 膜浸泡在所述膜处理液中30-60分钟，优选50分钟。
[0015]本专利技术所提供的膜处理液，用于蛋白质芯片板制备，可使样 品点无溢出、边缘清晰，明显改善纳米膜表面静电的干扰，使得矩阵规 整，样品点直径变异系数小，样品点灰度值变异系数小，表明处理液处 理后的纳米膜均一性良好。
[0016]作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤2)中蛋白质包括猪 伪狂犬病病毒gDgE蛋白、霉菌毒素抗原、禽用抗生素抗原、轮状病毒 抗体。
[0017]作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤3)中将所述蛋白质 芯片于温度23℃
±
2℃、湿度25％以下的条件下干燥6-8小时，优选6 小时。
[0018]作为本专利技术的一种实施方式，所述步骤4)中膜封闭液为含 BSA、甘油、Tween-20的PBS溶液，所述PBS溶液为pH值7.4的PBS 溶液；优选地，所述膜封闭液为含1％w/v BSA、0.1％～0.5％v/v甘油、 0.1％v/v Tween-20的PBS溶液。
[0019]甘油含量可以选自0.10％v/v、0.11％v/v、0.12％v/v、0.13％v/v、 0.14％v/v、0.15％v/v、0.16％v/v、0.17％v/v、0.18％v/v、0.19％v/v、0.20％v/v、 0.21％v/v、0.22％v/v、0.23％v/v、0.24％v/v、0.25％v/v、0.26％v/v、0.27％v/v、 0.28％v/v、0.29％v/v、0.30％v/v、0.31％v/v、0.32％v/v、0.33％v/v、0.34％v/v、 0.35％v/v、0.36％v/v、0.37％v/v、0.38％v/v、0.39％v/v、0.40％v/v、0.41％v/v、 0.42％v/v、0.43％v/v、0.44％v/v、0.45％v/v、0.46％v/v、0.47％v/v、0.48％v/v、 0.49％v/v、0.50％v/v。
[0020]本专利技术所提供的膜封闭液，用于蛋白质芯片板制备，可使样 品点规则、无拖尾无晕圈现象，反应后颜色适中且变异系数较小，较易 判定样品的阴阳性，加速稳定性可保存6天，实时稳定性可保存15个 月。
[0021]本专利技术还提供了一种膜处理液，所述膜处理液为含4％w/vEDC、2％w/v NHS、0.25％v/v～1％v/v DMSO的PBS溶液，临用前加入 0.1％v/v DCC混匀，所述PBS溶液为pH值5.5的PBS溶液；优选地， 所述膜处理液为4％w/v EDC、2％w/v NHS、0.5％v/v DMSO的PBS溶液， 临用前加入0.1％v/v DCC混匀。
[0022]本专利技术还提供了一种膜封闭液，所述膜封闭液为含BSA、甘 油、Tween-20的PBS溶液，所述PBS溶液为pH值7.4的PBS溶液； 优选地，所述膜封闭液为含1％W/V BSA、0.1％～0.5％V/V甘油、0.1％ V/V Tween-20的PBS溶液。
[0023]术语“磷酸盐缓冲液”是指含有磷酸或其盐并被调至理想 pH值的溶液，是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液。一般地， 磷酸盐缓冲液是从磷酸或磷酸盐(包括但不限于钠和钾盐)制备的。本 领域已经知道一些磷酸盐，例如磷酸二氢钠和磷酸二氢钾、磷酸氢二钠 和磷酸氢二钾、磷酸钠和磷酸钾。已本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质芯片板的制备方法，其中，所述制备方法包括：步骤1)配制膜处理液，将纳米膜浸泡在所述膜处理液中，然后用纯化水冲洗、吹干；步骤2)配制点样液，将蛋白质用所述点样液稀释后于所述纳米膜上进行点样，获得蛋白质芯片；步骤3)将所述蛋白质芯片于温度23℃
±
2℃、湿度25％以下的条件下干燥；步骤4)配制膜封闭液，用膜封闭液对所述蛋白质芯片进行封闭，获得蛋白质芯片板。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤1)中所述膜处理液为含4％w/v EDC、2％w/v NHS、0.25％v/v～1％v/v DMSO的PBS溶液，临用前加入0.1％v/v DCC混匀，所述PBS溶液为pH值5.5的PBS溶液；优选地，所述步骤1)中所述膜处理液为4％w/v EDC、2％w/v NHS、0.5％v/v DMSO的PBS溶液，临用前加入0.1％v/v DCC混匀；优选地DMSO含量选自0.25％v/v、0.30％v/v、0.35％v/v、0.40％v/v、0.45％v/v、0.50％v/v、0.55％v/v、0.60％v/v、0.65％v/v、0.70％v/v、0.75％v/v、0.80％v/v、0.85％v/v、0.90％v/v、0.95％v/v、1％v/v。3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤1)中，将所述纳米膜浸泡在所述膜处理液中30-60分钟，优选50分钟。4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤2)中，所述蛋白质包括猪伪狂犬病病毒gDgE蛋白、霉菌毒素抗原、禽用抗生素抗原、轮状病毒抗体。5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤3)中将所述蛋白质芯片于温度23℃
±
2℃、湿度25％以下的条件下干燥6-8小时，优选6小时。6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤4)中所述膜封闭液为含BSA、甘油、Tween-20的PBS溶液，所述PBS溶液为...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，张继颖，彭伍平，张许科，
申请(专利权)人：洛阳中科生物芯片技术有限公司，
类型：发明
国别省市：