【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗检测，更具体的说是涉及一种利用豚鼠进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法。
技术介绍
1、猪瘟(slassical swine fever，cfs)以出血和发热为主要特征，呈急性或慢性经过，是一种对猪危害性极大的传染病，被国际兽疫局列为a类动物传染病。目前使用的弱毒疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本gpe疫苗和法国的thireval疫苗。分子生物学技术的兴起和发展，为新型猪瘟疫苗的研究和开发奠定了基础。亚单位疫苗和活载体疫苗是目前研究的热点。目前，猪瘟e2蛋白亚单位疫苗在国内外已有多款产品被研发上市。成品效力检验是产品制造工艺的一个重要组成部分，但猪瘟e2蛋白亚单位疫苗的效力检验却无法像猪瘟活疫苗一样，通过检测成品中猪瘟活病毒的病毒含量进行成品效力评价，往往需要利用靶动物“免疫接种－攻毒”或通过测定抗原组分含量等方法评价。免疫攻毒试验整个周期约50天，而且因用到了猪瘟强毒，还需要用p3动物舍进行；测定抗原组分含量尽管不需要用到试验动物，但有时需要使用昂贵复杂的仪器进行，或有些检测方法本身并不稳定。使用替代动物进行产品检验是国际推荐优先采用的方法，也是近几年我国极力提倡新兽药研制者进行优先开发的方法。近年来有人开发了利用家兔代替猪进行效力评价的方法，即通过“给家兔注射疫苗测定家兔血清中猪瘟抗体水平”的方法进行评价。
2、用替代动物家兔进行猪瘟亚单位疫苗效力评价，已是一种很大的进步。与豚鼠、小鼠等常用的实验动物相比，尽管家兔有标准实验动物spf兔，但供应商并不多，不易购买，饲养难度也较大。基于此
3、因此，提供一种利用豚鼠进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种利用豚鼠进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，即给豚鼠注射疫苗，28天后测定豚鼠血清中e2特异性抗体水平，通过抗体水来评价成品疫苗的效力。本专利技术方法使用豚鼠替代猪进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗效力检验，与使用家兔进行检验相比，实验动物易购买、成本低，组内差异小、检测结果可信度高，饲养容易，优势明显。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种利用豚鼠进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，包括以下步骤：
4、(1)取健康易感豚鼠，随机平均分在每个对照组和每个免疫组(如有多个免疫组，可以共用一个对照组)中；
5、(2)免疫组豚鼠注射待检测的猪瘟e2蛋白亚单位疫苗，而对照组的豚鼠不注射；注射疫苗的豚鼠和对照组的豚鼠按照正常饲养方式饲养；
6、(3)在步骤(2)注射疫苗28日后，对免疫组和对照组的豚鼠均进行心脏采血并分离血清，分别检测e2特异性抗体，对照组豚鼠抗体水平全部阴性且免疫组豚鼠至少4/5抗体阻断率在50％以上则证明猪瘟e2蛋白亚单位疫苗效力检验合格。
7、进一步，所述健康易感豚鼠为猪瘟病毒elisa抗体为阴性的豚鼠。
8、进一步，步骤(2)所述注射疫苗为颈部肌肉注射。
9、进一步，步骤(2)所述给豚鼠注射一次猪瘟e2蛋白亚单位疫苗后测定豚鼠血清e2特异性抗体水平。
10、可以根据实际需要，给豚鼠注射两次猪瘟e2蛋白亚单位疫苗后测定豚鼠血清e2特异性抗体水平。
11、进一步，步骤(2)所述猪瘟e2蛋白亚单位疫苗的注射剂量为1/5个猪头份/只(即猪免疫剂量的1/5)。
12、进一步，步骤(2)所述分离血清采用离心分离，离心速度为5000r/min，离心时间为10分钟。
13、进一步，步骤(3)采用elsia法检测e2特异性抗体。
14、进一步，所述的方法在猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验中的应用。
15、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种利用豚鼠进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，采用本专利技术方法进行相对效力的检测，与免疫攻毒法检测结果一致，还不使用靶动物进行攻毒试验，不需要p3实验室条件，不具有生物安全风险，与用家兔作为替代动物进行检验的方法相比，实验动物易购买、成本低、组内差异小，饲养容易，优势明显。因此，对于市场潜力巨大的猪瘟e2蛋白亚单位疫苗的效力评价而言，具有非常好的应用价值。
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1.一种利用豚鼠进行猪瘟E2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种利用豚鼠进行猪瘟E2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，其特征在于，所述健康易感豚鼠为猪瘟病毒ELISA抗体为阴性的豚鼠。
3.根据权利要求1所述的一种利用豚鼠进行猪瘟E2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，其特征在于，步骤(2)所述注射疫苗为颈部肌肉注射。
4.根据权利要求1所述的一种利用豚鼠进行猪瘟E2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，其特征在于，步骤(2)所述给豚鼠注射一次猪瘟E2蛋白亚单位疫苗后测定豚鼠血清E2特异性抗体水平。
5.根据权利要求1所述的一种利用豚鼠进行猪瘟E2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，其特征在于，步骤(3)采用ELSIA法检测E2特异性抗体。
6.权利要求1-5任一项所述的方法在猪瘟E2蛋白亚单位疫苗成品效力检验中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种利用豚鼠进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种利用豚鼠进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，其特征在于，所述健康易感豚鼠为猪瘟病毒elisa抗体为阴性的豚鼠。
3.根据权利要求1所述的一种利用豚鼠进行猪瘟e2蛋白亚单位疫苗成品效力检验的方法，其特征在于，步骤(2)所述注射疫苗为颈部肌肉注射。
4.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：董鹏，王家福，张金龙，康斌，何芳，朱国坡，李雪峰，赵炳武，邵攀峰，哈斯，
申请(专利权)人：金河佑本生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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