【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制药，尤其涉及一种结核病毒样颗粒及其制备方法与应用。
技术介绍
1、结核病(tuberculosis,tb)是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,mtb)感染引起的、以呼吸系统感染为主的传染性疾病。接种疫苗是预防结核病最经济有效的手段，卡介苗(bcg)是目前唯一批准上市的结核疫苗，但其保护效果存在局限性。全球有17种结核候选疫苗进入临床研究阶段，根据其设计策略可分为减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗以及mrna疫苗。以上几种疫苗各有优缺点。减毒活疫苗通常产生持久免疫力，不需要佐剂。但其生产成本高、制造困难、且具有在感染hiv或其他免疫缺陷的个体中引起自身免疫反应、过敏反应或疾病的风险；灭活疫苗的生产工艺成熟、简单，但其存在潜在的安全问题；重组亚单位疫苗可能面临免疫原性方面的限制，因为它们通常由几种结核分枝杆菌免疫原组成；病毒载体疫苗具有以下优点：可以携带编码大抗原片段的基因，可以诱导高水平的体液和细胞免疫反应，不需要佐剂来增强免疫应答，但其缺点也显而易见；预先存在的针对病毒载体的中和抗体可能限制加强疫苗接种策略，某些病毒载体可能不适合用于免疫功能低下的个体；mrna的优点在于它可以被广泛地改造以增强体内稳定性和抗原的产生，没有宿主基因组整合的风险，并且与活病毒和dna疫苗相比，它可以刺激更好的免疫反应。然而，目前mrna疫苗需要冷链运送，而且生产成本昂贵，尽管生产成本肯定会随着需求而下降。
2、病毒样颗粒(virus like particle，vlp)
3、因此，倘若能够提供一种结核vlp，具有良好的免疫原性和免疫保护作用，则具有重要的理论意义和社会意义。
4、有鉴于此特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种具有较强的免疫原性的结核病毒样颗粒。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种结核病毒样颗粒，所述结核病毒样颗粒的氨基酸序列如seq idno：1所示；
4、编码氨基酸的核苷酸序列如seq id no：2所示。
5、本专利技术还提供了所述的结核病毒样颗粒的制备方法，包括如下步骤：将结核分枝杆菌的膜外片段与人乳头瘤病毒衣壳蛋白融合；
6、所述结核分枝杆菌的膜外片段的氨基酸序列如seq id no：3所示；
7、所述人乳头瘤病毒衣壳蛋白的氨基酸序列如seq id no：4所示；
8、作为优选，所述人乳头瘤病毒衣壳蛋白为去除铰链区的人乳头瘤病毒衣壳蛋白。
9、本专利技术还提供了所述的结核病毒样颗粒在制备预防和/或治疗结核病的药物中的应用。
10、本专利技术还提供了所述的结核病毒样颗粒在制备结核疫苗中的应用。
11、本专利技术还提供了一种重组质粒，包括结核病毒样颗粒和空载载体；
12、所述结核病毒样颗粒为所述的结核病毒样颗粒；
13、所述空载载体为ppic3.5k。
14、本专利技术还提供了所述的重组质粒在制备预防和/或治疗结核病的药物中的应用。
15、本专利技术还提供了一种重组菌株，包括质粒和宿主菌；
16、所述质粒为所述的重组质粒；
17、所述宿主菌为gs115酵母菌。
18、本专利技术还提供了所述的重组菌株在制备预防和/或治疗结核病的药物中的应用。
19、本专利技术还提供了一种结核疫苗，包括结核病毒样颗粒、重组质粒或重组菌株；
20、所述结核病毒样颗粒为所述的结核病毒样颗粒；
21、所述重组质粒为所述的重组质粒。
22、所述重组菌株为所述的重组菌株。
23、本专利技术的有益效果：
24、1、本专利技术的结核病毒样颗粒由结核结核分枝杆菌的膜外片段yidc与人乳头瘤病毒衣壳蛋白hpv-16l1连接得到的，与单分子yidc相比，具有较强的免疫原性；
25、本专利技术将结核hpv-16l1/yidc病毒样颗粒皮下注射免疫小鼠可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答，与单分子yidc相比，结核hpv-16l1/yidc病毒样颗粒的免疫原性得到显著提高。
26、2、目前国内外利用酵母表达系统制备结核病毒样颗粒鲜有报道，本专利技术建立了酵母细胞制备病毒样颗粒方法，对分离表达条件进行探索和优化，确定最佳实验条件，获得结核病毒样颗粒。具体的，本专利技术通过蜗牛酶消化结合超声破碎酵母细胞，并采用密度梯度离心法纯化得到大量的结核hpv-16l1/yidc病毒样颗粒分子。
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1.一种结核病毒样颗粒，其特征在于，所述结核病毒样颗粒的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示；
2.权利要求1所述的结核病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将结核分枝杆菌的膜外片段与人乳头瘤病毒衣壳蛋白融合；
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述人乳头瘤病毒衣壳蛋白为去除铰链区的人乳头瘤病毒衣壳蛋白。
4.权利要求1所述的结核病毒样颗粒在制备预防和/或治疗结核病的药物中的应用。
5.权利要求1所述的结核病毒样颗粒在制备结核疫苗中的应用。
6.一种重组质粒，其特征在于，包括结核病毒样颗粒和空载载体；
7.权利要求6所述的重组质粒在制备预防和/或治疗结核病的药物中的应用。
8.一种重组菌株，其特征在于，包括质粒和宿主菌；
9.权利要求8所述的重组菌株在制备预防和/或治疗结核病的药物中的应用。
10.一种结核疫苗，其特征在于，包括结核病毒样颗粒、重组质粒或重组菌株；
【技术特征摘要】
1.一种结核病毒样颗粒，其特征在于，所述结核病毒样颗粒的氨基酸序列如seq idno：1所示；
2.权利要求1所述的结核病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将结核分枝杆菌的膜外片段与人乳头瘤病毒衣壳蛋白融合；
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述人乳头瘤病毒衣壳蛋白为去除铰链区的人乳头瘤病毒衣壳蛋白。
4.权利要求1所述的结核病毒样颗粒在制备预防和/或治疗结核病的药物中的应用。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：周方斌，张冬梅，张逸龙，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学，
类型：发明
国别省市：
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