【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体的说，涉及一种抑制或干扰msi2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
技术介绍
1、肺癌发病率高达17％，是目前发病率位居第一的恶性肿瘤，而非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，nsclc)作为最主要的肺癌已成为癌症死亡之首。nsclc是当前国家乃至世界最大的公共卫生问题，除了传统的手术切除之外，放射治疗是治疗肺癌最有效的方法，被推荐作为nsclc的主要治疗手段。但是，放疗并发症和肿瘤放疗抵抗两大难题严重阻碍了放疗实施和放疗效果，严重影响了肿瘤患者的预后生存状况。肿瘤对辐射不敏感或对辐射产生抗拒性，是放射治疗难以根治恶性肿瘤的主要原因之一。
2、近年来，msi2(gene id:124540)在肿瘤学研究领域引起越来越多的关注。msi2最早是在造血干细胞的研究中被报道，随后在各种干细胞中被相继研究，msi2在生殖细胞及胚胎发育中都起着重要作用(nicolea siddall,2006,pmid:16717192)。许多研究者随后发现，msi2在多种肿瘤的增殖、侵袭和转移中同样发挥重要作用(alexander e kudinov,2017,pmid:28143872)。一些研究者通过比较非小细胞肺癌(nsclc)中高侵袭性肺癌与低侵袭性肺癌，从细胞干性基因中筛选出了msi2，并通过临床样本确认了在转移性肺癌中的最高表达水平，其次是原发性肺癌，最低则在正常肺组织中(sun-mi park,2014,pmid:24395885)。生物信息学分析发现msi2在
3、msi2究竟有何作用？在nsclc中是否也发挥放射线抵抗作用？它是否像msi1一样通过dna损伤修复通路起作用？目前尚无相关研究报道。抑制msi2基因在制备肿瘤放疗增敏药物中的应用国内外也尚无人报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种抑制或干扰msi2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术的第一方面，提供了一种抑制或干扰msi2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
4、所述肿瘤指的是肺癌。
5、所述抑制或干扰msi2基因表达的试剂是指该试剂抑制msi2基因活性和/或降低msi2基因的表达量。
6、所述抑制或干扰msi2基因表达的试剂是指通过与msi2基因结合改变其活性和/或表达量。
7、所述抑制或干扰msi2基因表达的试剂是通过构建msi2的shrna慢病毒载体敲低msi2基因。
8、所述构建msi2的shrna慢病毒载体的pcr引物由
9、正义引物gaatgaagatgttgtggagaa(seq id no.1)和
10、反义引物ttctccacaacatcttcattc(seq id no.2)构成。
11、所述抑制或干扰msi2基因表达的试剂是作为单一活性成分或作为组合物中的组分在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
12、本专利技术的第二方面，提供了一种抑制或干扰msi2基因表达的试剂在制备肿瘤放疗增敏药物中的应用。
13、所述肿瘤指的是肺癌。
14、本专利技术用对照组scramble和msi2敲低组sh-msi2的慢病毒去感染肺癌细胞a549，获得稳定表达的细胞株后通过western blot对肺癌细胞a549的msi2蛋白进行检测。结果发现：msi2的shrna可以有效抑制a549细胞中msi2蛋白的表达。
15、接下来，对a549细胞对照组scramble和msi2敲低组sh-msi2给予不同剂量(0、2、4、6gy)的60coγ射线照射，然后继续培养2周后采用克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力，结果显示：msi2敲低组sh-msi2的a549细胞随着照射剂量的增加，细胞克隆形成率明显低于对照组scramble。同时，专利技术人对a549细胞对照组scramble+mock和msi2敲低后rescue组sh-msi2+msi2给予不同剂量(0、2、4、6gy)的60coγ射线照射，然后继续培养2周后采用克隆形成实验检测克隆形成能力，结果显示：msi2敲低后rescue组sh-msi2+msi2的a549细胞随着照射剂量的增加，细胞的克隆形成率与对照组scramble+mock无统计学差异，说明rescuemsi2的表达能够恢复肺癌细胞的克隆形成能力。
16、进一步，专利技术人通过cck8实验检测细胞的增殖能力，发现与照射对照组相比，敲低msi2后照射8gy后48ha549细胞增殖水平显著下降，而rescue msi2后能够恢复a549细胞的增殖水平，说明敲低msi2能显著抑制照射后肺癌细胞的增殖水平。
17、随后，专利技术人给予a549细胞scramble和sh-msi2组分别8gy的60coγ射线照射，然后继续培养24h后采用annexin v-apc及7-add双染后通过流式细胞仪检测细胞凋亡，结果显示：sh-msi2组a549细胞的凋亡率照后明显高于scramble组，说明敲低msi2能显著增加照射后肺癌细胞的凋亡水平。
18、然后，专利技术人通过检测dna损伤的标志物γ-h2ax的foci形成数量来评估敲低msi2对肺癌细胞照射后dna损伤的影响。结果显示：对a549细胞进行8gy照射后24小时的检测，敲低msi2γ-h2ax形成的foci数平均每个细胞为18.11个，而对照组为6.227个，敲低组明显比对照组多，p<0.0001，统计学差异显著，说明敲低msi2能显著增加照射后肺癌细胞的辐射损伤。
19、最后，专利技术人通过彗星实验检测细胞dna彗星电泳的拖尾长度来衡量dna的损伤程度。结果显示：对a549细胞进行8gy照射后8小时，msi2敲低组的dna拖尾程度比对照组显著增加，敲低msi2能显著增加照射后肺癌细胞的辐射损伤。
20、本专利技术通过抑制msi2基因，可以提高放射治疗的敏感性，从而提高放射治疗疗效，尤其是对于肺癌的放疗治疗疗效，因此，抑制或干扰msi2基因表达的试剂可以作为肿瘤放疗增敏药物本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制或干扰MSI2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的抑制或干扰MSI2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤指的是肺癌。
3.根据权利要求1所述的抑制或干扰MSI2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述抑制或干扰MSI2基因表达的试剂是指该试剂抑制MSI2基因活性和/或降低MSI2基因的表达量。
4.根据权利要求1所述的抑制或干扰MSI2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述抑制或干扰MSI2基因表达的试剂是指通过与MSI2基因结合改变其活性和/或表达量。
5.根据权利要求1所述的抑制或干扰MSI2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述抑制或干扰MSI2基因表达的试剂是通过构建MSI2的shRNA慢病毒载体敲低MSI2基因。
6.根据权利要求5所述的抑制或干扰MSI2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述构建MSI2的shRNA慢病毒载体的PCR引物由SEQ ID
7.一种抑制或干扰MSI2基因表达的试剂在制备肿瘤放疗增敏药物中的应用。
8.根据权利要求5所述的抑制或干扰MSI2基因表达的试剂在制备肿瘤放疗增敏药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤指的是肺癌。
...【技术特征摘要】
1.一种抑制或干扰msi2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的抑制或干扰msi2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤指的是肺癌。
3.根据权利要求1所述的抑制或干扰msi2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述抑制或干扰msi2基因表达的试剂是指该试剂抑制msi2基因活性和/或降低msi2基因的表达量。
4.根据权利要求1所述的抑制或干扰msi2基因表达的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述抑制或干扰msi2基因表达的试剂是指通过与msi2基因结合改变其活性和/或表达量。
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【专利技术属性】
技术研发人员：李百龙，曲红金，杨彦勇，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学，
类型：发明
国别省市：
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