【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及烟雾病辅助诊断，尤其是涉及一种用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络及其应用。
技术介绍
1、烟雾病(moyamoyadisease，mmd)是一种鲜见的慢性血管阻塞性疾病，因血管造影图像状似“烟雾”而得名。流行病数据显示mmd好发于在亚洲地区，其中日本、韩国以及中国尤为多发。mmd主要临床表现分为缺血性、出血性或无症状，通常会带来很严重的后遗症如中风、癫痫、神经心理疾病、高度致残甚至死亡。目前尚无证据表明药物治疗能够延缓甚至逆转mmd的进展，此时血运重建手术成为mmd患者最有效的治疗方法。但是术后风险依旧很高如血管压力变化而引起头疼、出血、中风、癫痫以及认知障碍加重等症状。不仅如此，mmd还有一定的家族聚集性特征，这些都强烈地暗示遗传因素是mmd发病的主要诱因。除遗传因素外，女性、年龄、高血压、甲状腺功能异常，免疫炎症等也是mmd患者发病率的高危因素。
2、随着测序技术的成熟，转录组基因对疾病的影响逐渐被证实。mirna是一种短片段内源性非编码rna，通过促进mrna降解或抑制mrna的翻译对众多基因的表达进行调控。近年来mirna与mrna在mmd中的研究较少，mirna-mrna的调控关系对mmd的影响更是少之又少。如let-7c能够靶向rnf213参与mmd发病机制。在一项2血管闭塞+脑-肌-联合血管形成大鼠实验结果中显示，hsa-mirna-126-5p可通过pi3k/akt通路介导vegf、cd31和enos的表达增加来促进内皮细胞增殖和血管生成，促进了大鼠认知功能的恢复。多项研究显示
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是提供一种特异性强、灵敏度高的用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络及其应用，其中hsa-mirna-29b-3p表达量与烟雾病患病呈正相关，ntrk2基因表达量与烟雾病患病风险呈负相关。
2、本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络，所述的调控网络为hsa-mirna-29b-3p靶向ntrk2调控网络，其中所述的hsa-mirna-29b-3p的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述的ntrk2的核苷酸序列如seq idno.2所示。
3、上述用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络在制备烟雾病早期诊断或检测药物方面的应用。
4、进一步，所述的药物在烟雾病早期诊断或检测中促进hsa-mirna-29b-3p基因的表达和/或抑制ntrk2基因的表达。
5、上述用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络在制备烟雾病早期诊断或检测试剂盒中的应用。
6、进一步，所述的试剂盒包括检测hsa-mirna-29b-3p的荧光定量pcr引物，及检测ntrk2基因的荧光定量pcr引物。
7、进一步，所述的hsa-mirna-29b-3p的荧光定量pcr引物包括hsa-mirna-29b-3p荧光定量pcr特异性上游引物，hsa-mirna-29b-3p荧光定量pcr特异性下游引物和hsa-mirna-29b-3p逆转录扩增引物，所述的hsa-mirna-29b-3p的荧光定量pcr特异性上游引物为5’-acactccagctgggtagcaccatttgaaatca-3’，所述的hsa-mirna-29b-3p荧光定量pcr下游通用引物为5’-ctcaactggtgtcgtggagtc-3’，所述的hsa-mirna-29b-3p逆转录扩增引物为5’-ctcaactggtgtcgtggagtcggcaattcagttgagaacactga-3’。
8、进一步，所述的ntrk2基因的荧光定量pcr引物包括ntrk2基因荧光定量pcr特异性上游引物和ntrk2基因荧光定量pcr特异性下游引物，所述的ntrk2基因荧光定量pcr特异性上游引物的序列为：5'-gcaacaagcaccgaggag-3'，所述的ntrk2基因荧光定量pcr特异性下游引物的序列为：5'-acgatgccaggagaaggg-3'。
9、进一步，所述的hsa-mirna-29b-3p基因表达量与烟雾病患病呈正相关，所述的ntrk2基因表达量与烟雾病患病风险呈负相关。
10、与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术首次公开了一种用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络及其应用，该调控网络包括一个微小rna hsa-mirna-29b-3p和一个信使rna基因ntrk2组成，hsa-mirna-29b-3p在烟雾病脑血管组织和血浆中高表达，ntrk2在烟雾病患者脑血管和血浆中低表达。其机理可能是hsa-mirna-29b-3p调节其靶基因ntrk2的表达参与到烟雾病的病理发展过程中，并且hsa-mirna-29b-3p与ntrk2基因3’utr端有2个结合位点，进一步通过细胞功能实验证明hsa-mirna-29b-3p调控ntrk2网络可能通过pi3k/nlrp3通路对血管细胞炎症反应进行调节，参与烟雾病的发展进程。因此，以检测hsa-mirna-29b-3p/ntrk2网络组合标记物hsa-mirna-29b-3p调控ntrk2基因/蛋白表达水平为基础的检测试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对烟雾病的检测，检测效率高，针对性强，同时，以mirna网络组合标记物hsa-mirna-29b-3p/ntrk2为烟雾病辅助诊断、检测和筛选的一种创新用途。
11、综上所述，本专利技术以检测mirna网络组合标记物hsa-mirna-29b-3p/ntrk2的表达水平为基础的检测试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对烟雾病的检测，其中分子标志物hsa-mirna-29b-3p高表达，ntrk2基因低表达时具有烟雾病患病风险，检测效率高，针对性强，有利于烟雾病的早期发现和及时治疗。
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1.一种用于烟雾病早期诊断或检测的miRNA调控网络，其特征在于所述的调控网络为hsa-miRNA-29b-3p靶向NTRK2调控网络，其中所述的hsa-miRNA-29b-3p的核苷酸序列如SEQID No.1所示，所述的NTRK2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.一种权利要求1所述的用于烟雾病早期诊断或检测的miRNA调控网络在制备烟雾病早期诊断或检测药物方面的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的药物在烟雾病早期诊断或检测中促进hsa-miRNA-29b-3p基因的表达和/或抑制NTRK2基因的表达。
4.一种权利要求1所述的用于烟雾病早期诊断或检测的miRNA调控网络在制备烟雾病早期诊断或检测试剂盒中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的试剂盒包括检测hsa-miRNA-29b-3p的荧光定量PCR引物及检测NTRK2基因的荧光定量PCR引物。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的hsa-miRNA-29b-3p的荧光定量PCR引物包括hsa-miR
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的NTRK2基因的荧光定量PCR引物包括NTRK2基因荧光定量PCR特异性上游引物和NTRK2基因荧光定量PCR特异性下游引物，所述的NTRK2基因荧光定量PCR特异性上游引物的序列为：5’-GCAACAAGCACCGAGGAG-3’，所述的NTRK2基因荧光定量PCR特异性下游引物的序列为：5’-ACGATGCCAGGAGAAGGG-3’。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的hsa-miRNA-29b-3p基因表达量与烟雾病患病呈正相关，所述的NTRK2基因表达量与烟雾病患病风险呈负相关。
...【技术特征摘要】
1.一种用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络，其特征在于所述的调控网络为hsa-mirna-29b-3p靶向ntrk2调控网络，其中所述的hsa-mirna-29b-3p的核苷酸序列如seqid no.1所示，所述的ntrk2的核苷酸序列如seq id no.2所示。
2.一种权利要求1所述的用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络在制备烟雾病早期诊断或检测药物方面的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的药物在烟雾病早期诊断或检测中促进hsa-mirna-29b-3p基因的表达和/或抑制ntrk2基因的表达。
4.一种权利要求1所述的用于烟雾病早期诊断或检测的mirna调控网络在制备烟雾病早期诊断或检测试剂盒中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的试剂盒包括检测hsa-mirna-29b-3p的荧光定量pcr引物及检测ntrk2基因的荧光定量pcr引物。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的hsa-mirna-29b-3p的荧光定量pcr引物包括hsa-mirna-29b-3p荧光定量pcr特异性上游引物、hsa-mirna-29b-3p荧光定...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄毅，聂晟，孙杰，高翔，周晨辉，
申请(专利权)人：宁波大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：
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