【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于法医学鉴定，具体涉及一种基于酶转化法从精液或精斑中推断年龄的方法及复合体系和引物组合。
技术介绍
1、遗留在案件现场的血液、精液、唾液，月经血，阴道分泌物等体液及斑痕检材有助于法医学工作者获得更多的案件信息，这类体液样本，不仅能够进行dna分型以识别检材的个体来源，并且检材的生物学来源对案件性质的判别、案件方向的指明以及犯罪现场的重建具有重要意义。dna甲基化遗传标记具备良好的体液特异性，且稳定性较高。可以认为，现场的检材中只要能检测到dna，就可以用于dna甲基化分析，从而达到体液分析的目的。通过生物检材进行年龄推断，也有助于缩小案件调查范围，为案件侦破提供有效帮助。
2、传统的法医年龄推断是基于骨骼和牙齿的形态学特征并结合影像学技术手段。但该方法仅适用于保存较为完整的骨骼和牙齿样本。法医实践中血液、精液等体液检材更为常见。随着分子生物学的发展和多学科的交叉融汇，在分子水平上对这类体液检材进行年龄推断的研究逐渐增加。dna甲基化是现阶段个体年龄推断领域研究最广泛的分子标志物，基于外周血、唾液等法医常见检材的dna甲基化年龄预测模型已达到较高的预测效能。由于dna甲基化具有组织特异性，针对某种组织开发的年龄推断体系仅适用于相应的组织，在其他体液中准确度很低。精液样本是性侵案件中的常见检材，相比于外周血、口腔拭子等体细胞检材，现阶段对精液样本进行年龄推断的研究较少。heidegger等使用13个甲基化位点推断精液样本年龄，mad＝5.1年，灵敏度为50ng，虽然预测准确度较好，但所用位点较多，在法医实际面
3、基因组中存在组织特异性差异甲基化区域，为基于dna甲基化进行样本组织类型的推断奠定了基础。除基于dna甲基化的方法外，常见的体液类型鉴定方法还有mrna和microrna等，但mrna易受环境中广泛存在的核酸酶影响而被降解，而microrna由于是相对表达，检测结果难以标准化。balamurugan等使用6个甲基化位点区分精液与其他体液，灵敏度可达1.5ng。但目前研究仅单独针对年龄推断或体液类型推断，未见将年龄与体液位点复合至同一体系中的研究。
4、由于直接检测dna甲基化较为困难，因此dna甲基化的检测通常需要经过转化。目前dna甲基化检测常用的转化方法是亚硫酸氢盐转化法。但该方法由于其严苛的反应条件，如高温、酸性条件、高亚硫酸氢盐浓度和碱处理，亚硫酸氢盐转化会导致dna降解。
技术实现思路
1、针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种基于酶转化法从精液或精斑中推断年龄的方法及复合体系和引物组合。该引物组合可特异性扩增精液中的精液特异性甲基化位点和年龄相关性位点，一次检测即可得出样本是否为精液以及样本年龄信息，同时进行体液鉴定与年龄推断，可以快速准确地进行人类特征标记物分析，进而鉴别精液并推断嫌疑人年龄，有助于性侵案件的性质认定及嫌疑人年龄推断。
2、为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
3、一种用于体液鉴定的复合体系，包括检测位点和扩增上述位点的引物组合，检测位点包括cg06880412、cg17610929、cg17791346、cg17433294、cg25093603、cg06304190、cg06966678、cg25187042和cg06979108；引物组合包括特异性扩增引物和sbe引物。
4、一种用于体液鉴定的引物组合，包括如seq id no.1～18所示的特异性扩增引物，以及如seq id no.19～27所示的sbe引物。
5、其中，位点具体信息见表1，引物具体信息见表2和表3。
6、表1位点信息
7、 位点 chr mapinfo_hg19 genesymbol 特点 cg06880412 chr18 47166306 na 年龄相关 cg17610929 chr2 220379044 accn4/asic4 精液特异 cg17791346 chr3 78096108 linc02077 年龄相关 cg17433294 chr5 151784216 nmur2 精液特异 cg25093603 chr5 168725179 slit3 年龄相关 cg06304190 chr14 91283606 ttc7b 年龄相关 cg06966678 chr11 19692025 nav2 年龄相关 cg25187042 chr16 65867976 na 年龄相关 cg06979108 chr11 89322851 nox4 年龄相关
8、表2扩增引物
9、
10、
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【技术保护点】
1.一种用于体液鉴定的复合体系，其特征在于，包括检测位点和扩增上述位点的引物组合，所述检测位点包括cg06880412、cg17610929、cg17791346、cg17433294、cg25093603、cg06304190、cg06966678、cg25187042和cg06979108；所述引物组合包括特异性扩增引物和SBE引物。
2.一种用于体液鉴定的引物组合，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1～18所示的特异性扩增引物，以及如SEQ ID NO.19～27所示的SBE引物。
3.根据权利要求2所述的引物组合，其特征在于，体液为精液。
4.权利要求2所述的引物组合在制备用于法医学鉴定的产品中的用途。
5.权利要求2所述的引物组合在制备用于个体识别、亲权鉴定、群体遗传学分析和/或年龄推断的产品中的用途。
6.一种法医学鉴定用试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的引物组合。
7.一种基于酶转化法从精液或精斑中推断年龄的方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，扩增程序为：95℃预变性15min，94℃变性30s，58℃退火90s，共31个循环，72℃延伸60s，最后60℃延伸30min。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，年龄推断模型为Random Forest模型。
...【技术特征摘要】
1.一种用于体液鉴定的复合体系，其特征在于，包括检测位点和扩增上述位点的引物组合，所述检测位点包括cg06880412、cg17610929、cg17791346、cg17433294、cg25093603、cg06304190、cg06966678、cg25187042和cg06979108；所述引物组合包括特异性扩增引物和sbe引物。
2.一种用于体液鉴定的引物组合，其特征在于，包括如seq id no.1～18所示的特异性扩增引物，以及如seq id no.19～27所示的sbe引物。
3.根据权利要求2所述的引物组合，其特征在于，体液为精液。
4.权利要求2所述的引物组合在制备用于法医学鉴定的产品中的用途。
5.权利要求2所述的引物组合在制备用于个体识别、亲权鉴定、群体遗传...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁伟波，黄逸航，蹇慧，朱镜，屈胜秋，肖园园，吕梅励，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：
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