【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于癌症精准医疗新靶点及药物，具体涉及一种trim32为靶点在制备或筛选增强放疗敏感性药物中的应用。
技术介绍
1、三阴性乳腺癌(tnbc)是乳腺癌中最致命的亚型，具有高度的异质性和侵袭性。尽管近期术后放疗取得了进展，但tnbc患者的中位总生存期为10.2个月，迫切需要新的分子靶点来对抗放射抵抗，从而导致不良结果和治疗失败。最近的研究结果表明，蛋白激酶失调通常发生在包括tnbc在内的癌症中，并在肿瘤的恶性生物学行为中发挥关键作用。此外，蛋白激酶被证明与癌症的放疗抗性有关。
2、细胞周期在细胞增殖中起着至关重要的作用，细胞增殖受细胞周期蛋白依赖性激酶家族(cdk)调控。细胞周期蛋白依赖性激酶2(cdk2)是cdks的重要成员，由结合伴侣细胞周期蛋白8激活。cdk2调节细胞周期，并在广泛的生物学过程中发挥重要作用，包括信号转导、dna损伤、蛋白质降解、细胞内转运、dna或rna翻译和代谢。cdk2通过与细胞信号通路中的蛋白质相互作用和磷酸化，从g1晚期到整个s期调节细胞周期。新的证据显示，cdk2在许多人类癌症中被解除调控，并与癌细胞增殖相关。据报道，cdk可调节乳腺癌的增殖和治疗抗性，尤其是cdk2。三阴性乳腺癌(tnbc)具有比其他亚型更具侵袭性的表型和较差的预后。据报道，cdk2通过调节tnbc细胞dna复制和修复途径的损伤，与tnbc患者的总体生存率相关。据报道，cdk2是tnbc的潜在治疗靶点。三苯氧胺和cdk2抑制剂的联合治疗可有效抑制tnbc生长，提高体内存活率。然而，cdk2调节tnbc放疗抵抗
3、含有trim32的三元基序是环型e3泛素连接酶家族的一种蛋白质，参与癌症的发生和发展。trim32被证明通过增强akt活性和葡萄糖转运促进胃癌细胞的生长。我们先前的研究表明，trim32通过抑制tc45去磷酸化的stat323而促进tnbc放疗抵抗。在本研究中，我们首次提出证据表明trim32在放射治疗驱动的tnbc中充当cdk2的底物。放疗促进cdk2磷酸化trim32中的328和339丝氨酸，导致trim32通过顺反异构化发生核转位，其中pin1/导入素α3轴是必需的。然后，核trim32抑制tc45去磷酸化的stat3，导致tnbc中stat3转录激活和放疗抵抗增强。本研究证实了tnbc中cdk2-trim32-stat3的一种新的放疗抵抗机制和潜在的放射治疗靶点。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术提供了一种trim32为靶点在制备或筛选增强放疗敏感性药物中的应用，具体包括以下内容：
2、第一方面，本专利技术提供了一种人源trim32蛋白作为靶点在制备或筛选增强放疗敏感性药物中的应用，所述药物抑制/沉默cdk2的表达，或所述药物抑制人源trim32蛋白磷酸化，或所述药物阻止cdk2与人源trim32的结合，或所述药物抑制cdk2磷酸化人源trim32蛋白。
3、优选地，所述应用是指将人源trim32蛋白作为作用对象，对药物进行筛选，以找到阻止cdk2与人源trim32蛋白结合，进而抑制cdk2磷酸化人源trim32蛋白的药物作为增强放疗敏感性药物。
4、优选地，所述药物阻止cdk2与人源trim32蛋白310-653位氨基酸区域结合，或所述药物抑制人源trim32蛋白310-653位氨基酸磷酸化。
5、优选地，所述药物阻止cdk2与人源trim32蛋白s328和s339位点结合，或所述药物抑制抑制人源trim32蛋白s328和s339位点磷酸化。
6、优选地，所述肿瘤为乳腺癌。
7、优选地，所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。
8、第二方面，本专利技术提供了一种增强放疗敏感性药物，所述增强放疗敏感性药物抑制cdk2与trim32蛋白的s328和s339位点，抑制人源trim32蛋白磷酸化。
9、优选地，所述药物为多肽，所述多肽的序列如seq id no.1-17任一所示。
10、优选地，所述药物为cdk2抑制剂。
11、优选地，所述cdk2抑制剂包括罗斯科维汀。
12、第三方面，本专利技术提供了一种以人源trim32蛋白为靶点蛋白筛选增强放疗敏感性药物的方法，所述方法包括以下步骤：
13、(1)确定人源trim32蛋白与cdk2相互作用的结构域；
14、(2)采用生物信息学，依据人源trim32蛋白与cdk2相互作用的结构域确定活性中心，设定活性口袋；
15、(3)采用生物信息学，对小分子化合物库或多肽库中的化合物或多肽进行对接；
16、(4)根据对接结果进行活性筛选；
17、第四方面，本专利技术提供了一种以分离的人源trim32蛋白作为药物或制剂筛选增强放疗敏感性药物的方法，所述方法为：
18、(1)表达制备trim32蛋白和cdk2，用生物素标记trim32蛋白；
19、(2)将待评估药物、生物素标记的trim32蛋白和32p-atp加入缓冲液中，再加入cdk2，反应30-150min，加入cdk2的选择性抑制剂中止反应，测定trim32蛋白s328和s339位点的磷酸化水平，阳性对照不添加待评估多肽药物，空白对照不添加cdk2和待评估多肽药物，所述测定磷酸化水平的方法为：将链霉亲和素修饰的spa珠加入到上述反应溶液中，反应后用microbeta闪烁计数器检测spa信号，信号值即代表磷酸化程度；
20、(3)比较阳性对照组中trim32蛋白s328和s339位点的磷酸化水平和待评估药物组的trim32蛋白s328和s339位点的磷酸化水平，如果两者存在显著性差异，证明待评估药物具备增强放疗敏感性的功效。
21、本专利技术的有益效果是：①首次发现cdk2能够与trim32蛋白相互作用，使trim32蛋白的s328和s339位点发生磷酸化，并导致trim32通过顺反异构化发生核转位，增强放疗抵抗。因此，所述trim32蛋白可作为靶点用于筛选增强放疗敏感性药物；②本专利技术发现通过抑制trim32蛋白的s328和s339位点磷酸化，或抑制cdk2与trim32相互作用可显著增强放疗药物的敏感性，增强放疗效果，因此，以trim32蛋白的s328和s339位点为靶点可用于增强放疗敏感性药物。
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1.人源TRIM32蛋白作为靶点在制备或筛选增强放疗敏感性药物中的应用，所述药物抑制/沉默CDK2的表达，或所述药物抑制人源TRIM32蛋白磷酸化，或所述药物阻止CDK2与人源TRIM32的结合，或所述药物抑制CDK2磷酸化人源TRIM32蛋白。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是指将人源TRIM32蛋白作为作用对象，对药物进行筛选，以找到阻止CDK2与人源TRIM32蛋白结合，进而抑制CDK2磷酸化人源TRIM32蛋白的药物作为增强放疗敏感性药物。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物阻止CDK2与人源TRIM32蛋白310-653位氨基酸区域结合，或所述药物抑制人源TRIM32蛋白310-653位氨基酸磷酸化。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物阻止CDK2与人源TRIM32蛋白S328和S339位点结合，或所述药物抑制抑制人源TRIM32蛋白S328和S339位点磷酸化。
5.如权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为乳腺癌。
6.如权利要求5所述的应用，其特征
7.一种增强放疗敏感性药物，其特征在于，所述增强放疗敏感性药物抑制CDK2与TRIM32蛋白的S328和S339位点结合，抑制人源TRIM32蛋白磷酸化。
8.如权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物为多肽，所述多肽的序列如SEQ IDNO.1-17任一所示。
9.一种以人源TRIM32蛋白为靶点蛋白筛选增强放疗敏感性药物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
10.一种以分离的人源TRIM32蛋白作为药物或制剂筛选增强放疗敏感性药物的方法，其特征在于，所述方法为：
...【技术特征摘要】
1.人源trim32蛋白作为靶点在制备或筛选增强放疗敏感性药物中的应用，所述药物抑制/沉默cdk2的表达，或所述药物抑制人源trim32蛋白磷酸化，或所述药物阻止cdk2与人源trim32的结合，或所述药物抑制cdk2磷酸化人源trim32蛋白。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是指将人源trim32蛋白作为作用对象，对药物进行筛选，以找到阻止cdk2与人源trim32蛋白结合，进而抑制cdk2磷酸化人源trim32蛋白的药物作为增强放疗敏感性药物。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物阻止cdk2与人源trim32蛋白310-653位氨基酸区域结合，或所述药物抑制人源trim32蛋白310-653位氨基酸磷酸化。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物阻止cdk2与人源trim32蛋白s328...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐建明，王一青，
申请(专利权)人：苏州青锐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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