【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物检测的，具体涉及一种样品稀释液及其制备方法与在elisa检测中的应用。
技术介绍
1、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay)简称elisa，其中elisa抗体检测试剂盒主要原理为将可溶性抗原吸附到聚苯乙烯等固相载体上，样品中的抗体与载体上吸附的抗原发生特异性反应，形成抗原抗体免疫复合物，加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上，加入底物进行显色反应，测定光吸收度，通过计算达到抗体测定的目的。
2、elisa检测方法操作步骤虽简单，但影响因素较多，其中样品稀释液是最重要的影响因素之一。在检测过程中，为了避免过高的阴性本底影响检测结果的判定，样品必须先进行稀释，样品稀释液可以减少样品中杂蛋白和无关免疫球蛋白等的非特异性吸附，提高试验的特异性和灵敏度。稀释液选择不好反而会提高阴性本底值，增强非特异性反应，造成假阳性结果的出现。一般情况下人们会采用pbst作为elisa试剂盒的样品稀释液，该配方的生产成本低，但是无法起到降低阴性本底值和保护待测样品的作用。
技术实现思路
1、为了降低样品非特异性反应，减少假阳性的出现，提高试剂盒的特异性，本申请提供一种样品稀释液及其制备方法与在elisa检测中的应用。
2、本申请提供了一种样品稀释液，具体包括以下浓度的组分：氯化钠35-45g/l、np-40乙基苯基聚乙二醇2-8ml/l、酪蛋白0.25-0.75g/l、新生牛血清44-56ml/l、硫氧还蛋白7-13g
3、本申请提供的样品稀释液中，氯化钠可以起到维持溶液渗透压的作用，np-40可降低表面张力，酪蛋白及新生牛血清起封闭作用，可减少非特异性反应，硫氧还蛋白具有很好的抗氧化作用，作为氢受体参与氧化还原反应，大大降低了抗体被损坏的几率，对样品中的抗体起到了保护作用，proclin300起防腐作用；tris-hcl三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和tris-base三羟甲基氨基甲烷提供tris缓冲液，使溶液具备缓冲能力，表面活性剂有助于使稀释液中各组分进行良好的相容，提高各组分的相互协同性，进而使得各组分发挥最大的作用。
4、目前，常用的样品稀释液pbst起不到稳定蛋白及去除非特异的作用，从而无法达到保护样品及提高试剂盒特异性的目的；相比于pbst样品稀释液，本申请提供的上述样品稀释液具有稳定待测样品蛋白的作用，进而提高检测方法的灵敏度；且可以起到有效地保护蛋白的作用，提高检测方法的稳定性；同时降低反应过程中的基质效应，进而提高检测方法的特异性。
5、优选地，所述样品稀释液具体包括以下重量份的组分：氯化钠38-42g/l、np-40乙基苯基聚乙二醇3-7ml/l、酪蛋白0.35-0.65g/l、新生牛血清48-53ml/l、硫氧还蛋白9-11g/l、proclin300防腐剂0.35-0.65ml/l、tris-hcl 5.9-6.1g/l、tris-base三羟甲基氨基甲烷0.92-1.05g/l、表面活性剂0.7-1.2g/l。
6、优选地，所述表面活性剂选自月桂基羟丙基磺基甜菜碱、十四烷基二羟乙基氧化胺、月桂基二甲基氧化胺中的一种或多种。
7、优选地，所述表面活性剂是由重量比为11-15：1-3的十四烷基二羟乙基氧化胺、月桂基二甲基氧化胺混合制备得到。
8、在一个具体的实施方案中，所述十四烷基二羟乙基氧化胺、月桂基二甲基氧化胺的重量比可以为11：1、11：2、11：3、13：1、13：2、13：3、15：1、15：2、15：3。
9、在一些具体的实施方案中，所述十四烷基二羟乙基氧化胺、月桂基二甲基氧化胺的重量比还可以为11-13：1、11-13：2、11-15：3、13：1-2、13：2-3、13：1-3、13-15：1、15：1-2、15：1-3。
10、经过试验分析可知，本申请利用上述重量比的十四烷基二羟乙基氧化胺、月桂基二甲基氧化胺混合制备得到表面活性剂，可以进一步提高检测方法的稳定性。
11、优选地，所述样品稀释液还包括0.06-0.12g/l的多酚物质。
12、在一些具体的实施方案中，所述多酚物质的浓度可以为0.06g/l、0.08g/l、0.09g/l、0.10g/l、0.12g/l。
13、在一个具体的实施方案中，所述多酚物质的浓度还可以为0.06-0.08g/l、0.06-0.09g/l、0.06-0.10g/l、0.08-0.09g/l、0.08-0.10g/l、0.08-0.12g/l、0.09-0.10g/l、0.09-0.12g/l、0.10-0.12g/l。
14、进一步地，所述多酚物质选自苹果多酚、柑橘多酚、山竹多酚中的一种或多种。
15、优选地，所述样品稀释液的ph值为7.6-8.2。
16、第二方面，本申请还提供了一种上述样品稀释液的制备方法，具体包括以下步骤：
17、分别称取相应重量份的各原料组分；
18、将所述tris-hcl及所述tris-base溶解于纯化水中，调整ph至7.6-8.2，然后加入剩余原料组分，混匀，最后利用纯化水定容至1l，0.22μm滤膜过滤除菌。
19、第三方面，本申请还提供了一种elisa检测试剂盒，包括上述的样品稀释液。
20、第四方面，本申请还提供了上述样品稀释液或者上述elisa检测试剂盒在检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体中的应用。
21、综上所述，本申请的技术方案具有以下效果：
22、本申请提供的样品稀释液中，通过特定用量的特定组分相互配合、相互协同，应用于elisa抗体检测中，具有稳定待测样品抗体的作用，且可以起到有效地保护抗体的作用，同时降低反应过程中的基质效应，进而提高检测方法的特异性、稳定性和灵敏度。
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1.一种样品稀释液，其特征在于，具体包括以下浓度的组分：氯化钠35-45g/L、NP-40乙基苯基聚乙二醇2-8ml/L、酪蛋白0.25-0.75g/L、新生牛血清44-56ml/L、硫氧还蛋白7-13g/L、Proclin300防腐剂0.3-0.8ml/L、Tris-HCl 5.8-6.2g/L、Tris-Base 0.8-1.1g/L、表面活性剂0.5-1.5g/L。
2.根据权利要求1所述的样品稀释液，其特征在于，具体包括以下浓度的组分：氯化钠38-42g/L、NP-40乙基苯基聚乙二醇3-7ml/L、酪蛋白0.35-0.65g/L、新生牛血清48-53ml/L、硫氧还蛋白9-11g/L、Proclin300防腐剂0.35-0.65ml/L、Tris-HCl 5.9-6.1g/L、Tris-Base三羟甲基氨基甲烷0.92-1.05g/L、表面活性剂0.7-1.2g/L。
3.根据权利要求1所述的样品稀释液，其特征在于，所述表面活性剂选自月桂基羟丙基磺基甜菜碱、十四烷基二羟乙基氧化胺、月桂基二甲基氧化胺中的一种或多种。
4.根据权利要求3
5.根据权利要求1所述的样品稀释液，其特征在于，所述样品稀释液还包括0.06-0.12g/L的多酚物质。
6.根据权利要求5所述的样品稀释液，其特征在于，所述多酚物质选自苹果多酚、柑橘多酚、山竹多酚中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的样品稀释液，其特征在于，所述样品稀释液的pH值为7.6-8.2。
8.一种如权利要求1-7任一项所述的样品稀释液的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
9.一种ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-7任一项所述的样品稀释液。
10.权利要求1-7任一项所述的样品稀释液或者权利要求9所述的ELISA检测试剂盒在检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种样品稀释液，其特征在于，具体包括以下浓度的组分：氯化钠35-45g/l、np-40乙基苯基聚乙二醇2-8ml/l、酪蛋白0.25-0.75g/l、新生牛血清44-56ml/l、硫氧还蛋白7-13g/l、proclin300防腐剂0.3-0.8ml/l、tris-hcl 5.8-6.2g/l、tris-base 0.8-1.1g/l、表面活性剂0.5-1.5g/l。
2.根据权利要求1所述的样品稀释液，其特征在于，具体包括以下浓度的组分：氯化钠38-42g/l、np-40乙基苯基聚乙二醇3-7ml/l、酪蛋白0.35-0.65g/l、新生牛血清48-53ml/l、硫氧还蛋白9-11g/l、proclin300防腐剂0.35-0.65ml/l、tris-hcl 5.9-6.1g/l、tris-base三羟甲基氨基甲烷0.92-1.05g/l、表面活性剂0.7-1.2g/l。
3.根据权利要求1所述的样品稀释液，其特征在于，所述表面活性剂选自月桂基羟丙基磺基甜菜碱、...
【专利技术属性】
技术研发人员：王亚玲，商丽丽，吴星亮，文晶亮，黄丹丹，金玲，贾玉琦，肖文会，邢佳鹏，杨洵，李璞君，朱文鹏，
申请(专利权)人：北京金诺百泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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