【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体是用于检测布鲁氏菌的高效引物组、试剂盒及方法。
技术介绍
1、布鲁氏菌是一种细胞内寄生小球杆状菌，革兰氏染色阴性，主要感染动物，牛、羊、猪、狗以及骆驼、鹿等动物，主要是通过接触感染的动物或者吃被感染的食物以及实验室接触等方式传播给人类。能引起人和多种动物的急性和慢急性疾病，被感染的人和动物表现为流产及不孕不育等症状。
2、《布鲁氏菌病诊断标准及处理原则》规定了人群布鲁氏菌病(简称布病)的诊断和疫区处理原则，适用于各类医疗、卫生防疫机构。该原则中提到的布鲁氏菌病的检测方法为血清学检查。血清学检查是在标准试管凝集试验(sat)滴度为1∶100及以上；对半年内有布氏菌苗接种史者，sat滴度虽达1∶100及以上，过2～4周后应再检查，滴度升高4倍及以上；或用补体结合试验(cft)检查，cft滴度1∶10及以上；抗人免疫球蛋白实验(coomb's)滴度1∶400及以上。疑似病例：具备3.1、3.2和3.3者。确诊病例：疑似病例加3.4或3.5中任何一种方法阳性者。
3、研究一种能高效检测布鲁氏菌的试剂或方法，具有重要的临床价值。
技术实现思路
1、本专利技术提供了用于检测布鲁氏菌的高效引物组、试剂盒及方法，对于优化布鲁氏菌的临床筛查或科学研究，具有重要的意义和应用价值。
2、为达此目的，本专利技术提供如下的技术方案：
3、本专利技术的第一个方面，提供了一种用于检测布鲁氏菌的高效引物组，包括正向引物序列seq id no.
4、f2(seq id no.5)：cttgtggatggctgccaat；
5、r2(seq id no.6)：tgaaccgctgtccatttgc；
6、p2(seq id no.7)：cgcgatctgcctgcgaccttc。
7、优选的，在反应体系中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的浓度均为0.1-0.25μmol/l。
8、本专利技术的第二个方面，提供了一种用于检测布鲁氏菌的试剂盒，包括正向引物序列seq id no.5、反向引物序列seq id no.6和探针序列seq id no.7。
9、优选的，还包括5*buffer、mg2+、dntp、taq酶和逆转录体系。
10、优选的，正向引物序列seq id no.5、反向引物序列seq id no.6和探针序列seqid no.7的初始浓度均为10um。
11、本专利技术的第三个方面，提供了一种非诊断目的检测布鲁氏菌的方法，包括以下
12、步骤：
13、s1、提取样本总dna；
14、s2、加入5*buffer、mg2+、dntp、taq酶、逆转录体系、水、正向引物、反向引物和探针，其中，正向引物序列seq id no.5、反向引物序列seq id no.6和探针序列seq id no.7的浓度均为10um；
15、s3、将反应体系进行qpcr扩增。
16、优选的，步骤s2中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的终浓度均为0.1-0.25μmol/l。
17、优选的，步骤s3中，qpcr扩增的反应条件为：热盖100-105℃、预热90-95℃、变性90-95℃、退火55-60℃、延伸70-72℃，变性、退火和延伸共循环40次。
18、优选的，步骤s2中的反应体系为5*buffer 5ul、mg2+1.25ul、dntp 0.5ul、f引物(10um)0.35ul、r引物(10um)0.35ul、探针(10um)0.3ul、taq酶0.35ul、逆转录体系1ul、h2o10.25ul、样本5ul。
19、优选的，步骤s3中，qpcr扩增的反应条件为：
20、
21、循环变性、退火和延伸共循环40次。
22、与现有技术相比，本专利技术有益效果及显著进步在于：本专利技术筛选了大量用于检测布鲁氏菌的引物组，最终筛选出了扩增效率为96.6％、拥有更为标准的扩增曲线、更高的灵敏度和低限检测的引物组。
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1.一种用于检测布鲁氏菌的高效引物组，其特征在于，包括正向引物序列SEQ IDNO.5、反向引物序列SEQ ID NO.6和探针序列SEQ ID NO.7。
2.如权利要求1所述的一种用于检测布鲁氏菌的高效引物组，其特征在于，在反应体系中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的浓度均为0.1-0.25μmol/L。
3.一种用于检测布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，包括正向引物序列SEQ ID NO.5、反向引物序列SEQ ID NO.6和探针序列SEQ ID NO.7。
4.如权利要求3所述的一种用于检测布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，还包括5*buffer、Mg2+、dNTP、Taq酶和逆转录体系。
5.如权利要求3所述的一种用于检测布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，正向引物序列SEQ ID NO.5、反向引物序列SEQ ID NO.6和探针序列SEQ ID NO.7的初始浓度均为10uM。
6.一种非诊断目的检测布鲁氏菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.如权利要求6所述的一种非诊断目的检测布鲁氏菌的方法，其
8.如权利要求6所述的一种非诊断目的检测布鲁氏菌的方法，其特征在于，步骤S3中，qPCR扩增的反应条件为：热盖100-105℃、预热90-95℃、变性90-95℃、退火55-60℃、延伸70-72℃，变性、退火和延伸共循环40次。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测布鲁氏菌的高效引物组，其特征在于，包括正向引物序列seq idno.5、反向引物序列seq id no.6和探针序列seq id no.7。
2.如权利要求1所述的一种用于检测布鲁氏菌的高效引物组，其特征在于，在反应体系中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的浓度均为0.1-0.25μmol/l。
3.一种用于检测布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，包括正向引物序列seq id no.5、反向引物序列seq id no.6和探针序列seq id no.7。
4.如权利要求3所述的一种用于检测布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，还包括5*buffer、mg2+、dntp、taq酶和逆转录体系。
5.如权利要求3...
【专利技术属性】
技术研发人员：马小娟，谭淼，龙翔，袁青，
申请(专利权)人：苏州海苗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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