【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体是用于检测蜱媒病原体的高效引物组、试剂盒及方法。
技术介绍
1、蜱传播疾病已经覆盖了全世界的范围，其已经成为了人类健康的一个显著危险因素。中国是世界上最大的发展中国家，在传染病的预防和控制方面已经取得了非常巨大的进步。蜱媒疾病作为一类新兴的传染性疾病并没有受到大部分医疗卫生人员的重视。
2、蜱虫，又称为壁虱，可寄生于多种动物，包括爬行动物和哺乳动物，可生活在多种气候和环境中。在一些发达国家，大家都已经了解蜱虫会严重威胁人类及动物健康，包括宠物、工作犬、马及家畜。蜱虫是多种病原的传播媒介：病毒、细菌、原虫及寄生虫；其中有一些可感染人及动物。从全球范围来讲，可感染宠物的蜱虫种类包括硬蜱属、扇头蜱属、革蜱属、花蜱属(钝眼蜱属)及血蜱属。
3、蜱媒病毒中对我国已造成较大影响的有蜱传脑炎病毒、发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒和克里米亚-刚果出血热病毒，以及近期流行的非洲猪瘟病毒，对人畜动物建康及社会经济均带来了许多不利的影响。而国内虽然未见西尼罗病毒、科罗拉多蜱传热病毒和波本病毒等蜱媒病毒感染人畜动物的报道，但其对所流行的国家却造成了重创。蜱媒病毒所致疾病早期往往缺乏特异的临床表现，加之人们对这一类疾病缺乏足够的认识，这些都会阻碍疾病的早期诊治及有效控制。随着宏基因组测序分析等微生物检测技术的发展，我们能够更快速地找到蜱媒病毒感染的证据。蜱媒病毒的研究除了具有医学价值，对国家生物安全战略的研究也提供一定的参考。
技术实现思路
1、本专利技术提供
2、为达此目的，本专利技术提供如下的技术方案：
3、本专利技术的第一个方面，提供了一种用于检测蜱媒病原体的高效引物组，包括第一引物组和第二引物组；所述第一引物组包括：正向引物序列seq id no.3、反向引物序列seqid no.4和探针序列seq id no.5；所述第一引物组包括：正向引物序列seq id no.6、反向引物序列seq id no.7和探针序列seq id no.8。
4、本专利技术中，第一引物组：
5、f1(seq id no.3)：ttttggacacatttggattgttg；
6、r1(seq id no.4)：ctggtgcatcgtctgattcaa；
7、p1(seq id no.5)：agcaataaccctgcgcag。
8、第二引物组：
9、f2(seq id no.6)：ctcggatgagacgctgcat；
10、r2(seq id no.7)：gctcgcgcagcgaagtag；
11、p2(seq id no.8)：acagacagtacccaaacc。
12、优选的，在反应体系中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的浓度均为0.5-0.2μmol/l。
13、本专利技术的第二个方面，提供了一种用于检测蜱媒病原体的试剂盒，包括第一引物组和第二引物组；所述第一引物组包括：正向引物序列seq id no.3、反向引物序列seq idno.4和探针序列seq id no.5；所述第一引物组包括：正向引物序列seq id no.6、反向引物序列seq id no.7和探针序列seq id no.8。
14、优选的，还包括5*buffer、mg2+、dntp、taq酶和逆转录体系。
15、优选的，正向引物序列seq id no.3/seq id no.6、反向引物序列seq id no.4/seq id
16、no.7和探针序列seq id no.5/seq id no.8的初始浓度均为10um。
17、本专利技术的第三个方面，提供了一种非诊断目的检测蜱媒病原体的方法，包括以下步骤：
18、s1、提取样本总dna；
19、s2、加入5*buffer、mg2+、dntp、taq酶、逆转录体系、水、正向引物、反向引物和探针，其中，正向引物序列seq id no.3/seq id no.6、反向引物序列seq id no.4/seq idno.7和探针序列seq id no.5/seq id no.8的浓度均为10um；
20、s3、将反应体系进行qpcr扩增。
21、优选的，步骤s2中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的终浓度均为0.5-0.2μmol/l。
22、优选的，步骤s3中，qpcr扩增的反应条件为：热盖100-105℃、逆转录40-42℃、预热90-95℃、变性90-95℃、退火55-60℃、延伸70-72℃，变性、退火和延伸共循环40次。
23、优选的，步骤s2中的反应体系为5*buffer 5ul、mg2+1.25ul、dntp 0.5ul、f引物(10um)0.3ul、r引物(10um)0.35ul、探针(10um)0.3ul、taq酶0.35ul、逆转录体系1ul、h2o10.35ul、样本5ul。
24、优选的，步骤s3中，qpcr扩增的反应条件为：
25、
26、与现有技术相比，本专利技术有益效果及显著进步在于：本专利技术筛选了大量用于检测蜱媒病原体的引物组，最终筛选出了扩增效率为112.849％和99.214％、拥有更为标准的扩增曲线、更高的灵敏度和低限检测的2组引物组。
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1.一种用于检测蜱媒病原体的高效引物组，其特征在于，包括第一引物组和第二引物组；
2.如权利要求1所述的一种用于检测蜱媒病原体的高效引物组，其特征在于，在反应体系中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的浓度均为0.5-0.2μmol/L。
3.一种用于检测蜱媒病原体的试剂盒，其特征在于，包括第一引物组和第二引物组；
4.如权利要求3所述的一种用于检测蜱媒病原体的试剂盒，其特征在于，还包括5*buffer、Mg2+、dNTP、Taq酶和逆转录体系。
5.如权利要求3所述的一种用于检测蜱媒病原体的试剂盒，其特征在于，正向引物序列SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.6、反向引物序列SEQ ID NO.4/SEQ ID NO.7和探针序列SEQ IDNO.5/SEQ ID NO.8的初始浓度均为10uM。
6.一种非诊断目的检测蜱媒病原体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.如权利要求6所述的一种非诊断目的检测蜱媒病原体的方法，其特征在于，步骤S2中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的终浓度均为0.5
8.如权利要求6所述的一种非诊断目的检测蜱媒病原体的方法，其特征在于，步骤S3中，qPCR扩增的反应条件为：热盖100-105℃、逆转录40-42℃、预热90-95℃、变性90-95℃、退火55-60℃、延伸70-72℃，变性、退火和延伸共循环40次。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测蜱媒病原体的高效引物组，其特征在于，包括第一引物组和第二引物组；
2.如权利要求1所述的一种用于检测蜱媒病原体的高效引物组，其特征在于，在反应体系中，正向引物序列、反向引物序列或探针序列的浓度均为0.5-0.2μmol/l。
3.一种用于检测蜱媒病原体的试剂盒，其特征在于，包括第一引物组和第二引物组；
4.如权利要求3所述的一种用于检测蜱媒病原体的试剂盒，其特征在于，还包括5*buffer、mg2+、dntp、taq酶和逆转录体系。
5.如权利要求3所述的一种用于检测蜱媒病原体的试剂盒，其特征在于，正向引物序列seq id no.3/seq id no.6、反向引物序列s...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁青，谭淼，马小娟，龙翔，
申请(专利权)人：苏州海苗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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