【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、原发性双侧肾上腺大结节增生(pbmah)是一种生长速度非常缓慢的肾上腺良性病变。这种增生是在有皮质醇过量的临床症状的患者中诊断出来的，通常是在成年后期——通常是在一生中五十多或六十多岁的时候。
2、还有一些患者的疾病诊断，在临床上并无明显的皮质醇增多症表型，但是在腹部ct扫描中偶然发现肾上腺增大。在普通人群中，有0.4-5％可观察到肾上腺偶发瘤，10-15％的病例为双侧(主要对应于pbmah)。事实上，普通人群中pbmah的确切患病率尚不清楚，而且患病率取决于诊断标准。
3、pbmah可能是造成垂体促肾上腺皮质激素依赖性皮质醇过多和库欣综合征的原因1。这些双侧偶发瘤中有约35％被诊断为库欣综合征。在pbmah患者中库欣综合征通常是轻微且隐匿的，即使可能会遇到严重的形式。
4、库欣综合征可导致多种症状，包括向心性肥胖、高血压、心血管疾病、神经精神疾病、骨质疏松症、葡萄糖不耐受或糖尿病。这些后果会导致生活质量严重受损，如果不及时治疗，还会导致死亡率增加。一些研究表明，尽管治愈了皮质醇过多的情况，但仍然存在显著的发病率，并且即使在治愈的患者中，由于长期暴露于皮质醇过多的后果，寿命也会缩短(clayton rn等人，201635，drougat等人，201536)。
5、因此，有必要确定减少皮质醇过量持续时间的策略。考虑到库欣综合征的罕见性以及非专科医生筛查和诊断的困难，库欣综合征的早期诊断非常具有挑战性。
6、因此，在这种情况下，迫切需要找到诊断工具，以便能够
7、有人认为，库欣综合征在某些情况下是由基因改变引发的，这可以有助于更早地诊断这些患者。例如，研究表明，camp/蛋白激酶a(pka)信号传导通路的作用物(actor)或引起遗传性家族性肿瘤综合征的基因(包括腺瘤性息肉病大肠杆菌基因(apc)、menin(men1)和延胡索酸水合酶(fh))可以有利于或负责发展出pbmah，但这些病例非常罕见。此外，armc5(含有犰狳重复序列的蛋白5)基因突变已被确定为散发性或家族性pbmah的常见原因。结合迄今为止报告的所有armc5研究，在明显散发性的pbmah患者中约25-35％总共鉴定出29种生殖系和32种体细胞致病性突变(drougat等人，201536)。
8、pbmah中armc5的失活遵循导致遗传性肿瘤综合征的肿瘤抑制基因的“二击(two-hit)”模型。就armc5而言，该模型表明，肾上腺皮质的细胞在生殖系armc5突变之后继发失去控制，导致发展出结节性增生。
9、尽管第一个被发现频繁参与pbmah的基因是armc5，但仅在约三分之一的pbmah患者中观察到armc5生殖系和继发性体细胞(secondary somatic)失活突变2。换句话说，三分之二的pbmah成人病例的病因仍未得到解释。
10、在大部分pbmah患者中，皮质醇过量是由肾上腺病变中几种g蛋白偶联受体(gpcr)的异常(异位或过度)表达引起的，这种在单侧腺瘤患者中比较少见3。pbmah中葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(gip)受体(gipr)的异位表达可能与逆皮质醇节律相关，即空腹早晨血浆皮质醇浓度较低，进食后血浆皮质醇浓度增加4,5。餐后皮质醇分泌的增加是由gip诱导的，gip是一种由肠道k细胞在口服摄入脂质、碳水化合物或蛋白质后产生的肠促胰岛素。异位gipr的激活与camp信号传导功能耦合，引发了肾上腺细胞增殖和过量类固醇产生。导致肾上腺皮质组织中异位gipr表达的分子事件尚不清楚。最近报告称，在两名gip依赖性库欣综合征患者的皮质醇分泌腺瘤中，存在包含gipr位点的体细胞19q13.32微重复与其他染色体区域发生重排8。然而，pbmah中异位gipr表达的分子发病机制仍有待阐明。
11、如果gip依赖性库欣综合征患者的pbmah也是遗传起源，那么这些疾病的致病基因仍有待确定。
12、因此，迫切需要更好地了解gip依赖性库欣病患者发展出pbmah的分子机制，从而找出可以解释这些疾病病因的易感遗传因素。
13、了解此类遗传易感因素将有助于早期诊断pbmah以及可能与之相关的gip依赖性库欣综合征。这将有助于防止因长期暴露于皮质醇过量的环境中而导致的严重后果，因此可以转化为有效的治疗和预防方案。
14、更一般地说，因此需要额外的努力来确定可靠的诊断标记物以识别内分泌肿瘤的遗传易感性，以及确定可靠的标记物用于预测其是否会进展为更严重的疾病。
技术实现思路
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1.一种用于鉴定需要其的受试者对内分泌疾病的遗传易感性的体外方法，所述方法包括分析来自所述受试者的生物样本的步骤，以检测所述样本中存在KDM1A基因的生殖系无效突变和/或KDM1A蛋白的异常表达或活性。
2.根据权利要求1所述的体外方法，其包括以下步骤：
3.根据权利要求1或2所述的体外方法，其中所述异常低表达或活性降低是由于与对照样本相比KDM1A蛋白的表达降低，或者是由于截短的非功能性KDM1A蛋白表达，或者是由于影响KDM1A酶活性的杂合无效突变的存在。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的体外方法，其中所述生物样本是血液样本。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述KDM1A基因中的生殖系无效突变选自：缺失、插入、点突变如影响剪接位点的突变、截短突变、移码突变、错义突变和无义突变。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的体外方法，其中所述KDM1A基因中的所述无效突变选自：c.1848dupG、c.352-1G>A、c.1309G>T、c.1737_1738insGA、c.2361T>
7.根据权利要求1至6中任一项所述的体外方法，其中所述KDM1A基因中的所述无效突变是在1号染色体的至少一个等位基因上检测到的KDM1A基因座缺失。
8.一种在需要其的受试者中早期诊断内分泌疾病的体外方法，所述方法包括以下检测步骤：
9.一种在需要其的受试者中早期诊断内分泌疾病的体外方法，所述方法包括以下步骤：
10.根据权利要求8和9所述的体外方法，其中所述无效突变见于SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2中，优选选自：c.1848dupG、c.352-1G>A、c.1309G>T、c.1737_1738insGA、c.2361T>G、c.2441_2445del、c.952C>T、c.811C>T和c.386delA。
11.根据权利要求8至10所述的体外方法，其中存在所述无效突变或异常低表达和/或活性降低表示所述受试者正在发展为内分泌疾病。
12.根据权利要求9至11所述的体外方法，其中如果所述内分泌组织中突变等位基因的NGS比率高于50％，则表示存在所述无效突变。
13.根据权利要求8至12中任一项所述的体外方法，其使用SEQ ID NO:4-5的引物。
14.包含SEQ ID NO:4-5的引物、或特异性识别SEQ ID NO:3的KDM1A蛋白的抗体的试剂盒在权利要求1至13所述的方法中的用途。
15.KDM1A表达或活性的抑制剂用于治疗患有与胰岛素或胰高血糖素分泌改变相关的代谢紊乱的用途，如糖尿病的患者。
16.根据权利要求15所述用途的抑制剂，其中所述抑制剂是siRNA，优选是选自SEQ IDNO:12-15的siRNA或天然或合成的化学药物，如IMG-7289(Bomedemstat)、反苯环丙明(TCP)、SP-2577(seclidemstat)、INCB059872、CC-90011、GSK2879552、ORY-1001(iadademstat)、TAK-418、ORY-2001(Vadifemstat)、阿博林宁、去甲乌药碱、卡瓦内酮、雷洛昔芬或非诺多泮。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于鉴定需要其的受试者对内分泌疾病的遗传易感性的体外方法，所述方法包括分析来自所述受试者的生物样本的步骤，以检测所述样本中存在kdm1a基因的生殖系无效突变和/或kdm1a蛋白的异常表达或活性。
2.根据权利要求1所述的体外方法，其包括以下步骤：
3.根据权利要求1或2所述的体外方法，其中所述异常低表达或活性降低是由于与对照样本相比kdm1a蛋白的表达降低，或者是由于截短的非功能性kdm1a蛋白表达，或者是由于影响kdm1a酶活性的杂合无效突变的存在。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的体外方法，其中所述生物样本是血液样本。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述kdm1a基因中的生殖系无效突变选自：缺失、插入、点突变如影响剪接位点的突变、截短突变、移码突变、错义突变和无义突变。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的体外方法，其中所述kdm1a基因中的所述无效突变选自：c.1848dupg、c.352-1g>a、c.1309g>t、c.1737_1738insga、c.2361t>g、c.2441_2445del、c.952c>t、c.811c>t和c.386dela。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的体外方法，其中所述kdm1a基因中的所述无效突变是在1号染色体的至少一个等位基因上检测到的kdm1a基因座缺失。
8.一种在需要其的受试者中早期诊断内分泌疾病的体外方法，所述方法包括以下检测步骤：
9.一种在需要其的受试者中早期诊断内分泌疾病的体外方法，所述方法包括以下步骤：
10.根据权利要求8和9...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·布利冈，I·波尔多，F·沙瑟卢，A·拉克鲁瓦，P·卡门尼基，
申请(专利权)人：巴黎萨克雷大学，
类型：发明
国别省市：
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