【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于病毒学以及生物制剂保存领域，更具体地，本专利技术涉及一种rna样品保存液及其应用。
技术介绍
1、核糖核酸(ribonucleic acid，rna)是存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。绝大部分rna是单链的，不如双链dna稳定。rna一旦从生物体中释放，极易被rnase降解。rna的后续实验必须以前期的完整性为基础。
2、病毒(virus)是一类比较原始的、有生命特征的、能够自我复制和严格细胞内寄生的非细胞生物，病毒个体微小、结构简单，只含有一种遗传物质，dna或rna，遗传物质是dna就是dna病毒。病毒不具细胞结构，无法独立生长和复制，但可以感染所有的具有细胞的生命体，具有遗传、复制等生命特征。病毒主要由核酸和蛋白质外壳组成。有些病毒有囊膜和刺突，如流感病毒。病毒基因可以发生突变和重组，这与其它生物体类似。一些病毒，如艾滋病毒，可以与人体长时间共存，并且依然能保持感染性而不受到宿主免疫系统的影响。但在通常情况下，病毒感染机体后，机体会引发免疫反应、消灭入侵的病毒。一些病毒能够引起慢性感染，可以在机体内不断复制而不受宿主防御系统的影响。这类病毒包括乙肝病毒和丙肝病毒。
3、dna病毒和rna病毒是将病毒按遗传物质清分类，二者都包含有多种的不同病毒病。常见的dna病毒有乙肝病毒、天花病毒、水痘-带状疱疹病毒、eb病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等。常见的rna病毒有艾滋病病毒、丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、全部的流感病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒、sar
4、影响人类或动物健康的病毒包括流感病毒、艾滋病毒、肝炎病毒、冠状病毒等各种常见的病毒，其传染性强、潜伏期久，无特效药物，即使部分有特效疫苗，也很难短时间完全清除。病毒核酸检测依然是目前病毒最有效的检测方式。缩短检测时间、减少检测步骤、提高检测准确性和灵敏性依然是目前需要努力的方向。目前通常的检测方法需要先进行rna的抽提，然后再进行基于qrt-pcr等方法的核酸检测。rna抽提步骤的存在，会增加操作流程和检测时间，同样也会增加检测人员被病毒感染的风险，同时操作步骤的增加也会增加检测结果假阳性或假阴性的风险。
5、因此，迫切需要有一种通用于各种病毒的简单有效的、步骤简化，免于rna抽提，能使rna样品完整保存的保存液，用于病毒核酸检测的技术方法。本专利技术人的前期研究中，致力于开发rna病毒直接检测用试剂，进行了多代产品的研发和优化，本专利技术提供了新的改进。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种广谱的rna样品保存液及其应用。
2、在本专利技术的第一方面，提供一种体外检测rna样品(样本)的方法，包括：(1)将rna样品加入到保存液中，获得含有rna样品的保存液；和(2)以(1)的含有rna样品的保存液进行核酸扩增，检测靶标核酸的存在情况(包括存在与否(定性)或存在量(定量))；其中，所述的保存液包括：两性高分子聚合物，rnase inhibitor，carrier rna，海藻糖，血清，nacl，cacl2，mgcl2，d-葡萄糖；所述两性高分子聚合物为式(i)所示的聚合物：
3、
4、其中，n为20～5000的正整数。
5、在本专利技术的第二方面，提供一种保存rna样品(如rna病毒样品)的方法，包括：将rna样品加入到保存液中，获得含有rna样品的保存液；其中，所述的保存液包括：两性高分子聚合物，rnase inhibitor，carrier rna，海藻糖，血清，nacl，cacl2，mgcl2，d-葡萄糖；所述两性高分子聚合物为式(i)所示的聚合物。
6、在一种或多种实施方式中，所述保存液中，各组分的含量为：
7、
8、在一种或多种实施方式中，所述保存液中，还包括proclean 150。
9、在一种或多种实施方式中，proclean 150含量为：0.01～0.2v/v％，较佳地0.02～0.15v/v％。
10、在一种或多种实施方式中，proclean 150浓度0.01～0.2v/v％相当于0.1～2ml/l，也相当于0.01～0.2ml/100ml。
11、在一种或多种实施方式中，所述保存液的ph为7.0～8.0(较佳地7.3～7.9)。
12、在一种或多种实施方式中，各组分在ph缓冲液或溶液中混合。
13、在一种或多种实施方式中，所述ph缓冲液包括(但不限于)：hepes缓冲液、tris-hcl缓冲液、磷酸盐缓冲液、mops缓冲液；更佳地，所述保存液包括hepes缓冲液或tris-hcl缓冲液。
14、在一种或多种实施方式中，所述的核酸扩增包括(但不限于)：聚合酶链式反应(pcr)扩增，rna实时荧光恒温扩增(sat)，环介导等温扩增(lamp)、切口内切酶恒温扩增技术(near)、依赖核酸序列扩增(nasba)、滚环核酸扩增(rca)、解链酶扩增(hda)、重组酶聚合酶扩增(rpa)或酶促重组恒温扩增技术(era)。
15、在一种或多种实施方式中，所述的rna样品包括(但不限于)：细菌、真菌、病毒、动物、植物细胞的rna样品、mrna样品来源的样品。
16、在一种或多种实施方式中，所述存在情况包括存在与否(定性)或存在量(定量)。
17、在一种或多种实施方式中，所述方法不包括从rna样本中抽提rna的步骤。
18、在一种或多种实施方式中，所述血清包括(但不限于)来源于小鼠、大鼠、人、牛、猪、兔、羊、马等的血清，或为血型替代物。
19、在一种或多种实施方式中，所述血清包括(但不限于)：胎牛血清(fbs)、新生牛血清、小牛血清、成牛血清、山羊血清。
20、在一种或多种实施方式中，所述方法为不以判断疾病结果为直接目的的方法。
21、在一种或多种实施方式中，所述方法为非诊断性方法。例如，所述方法用于检测环境(如但不限于场所、容器、物品、食品等)来源的样本的靶标核酸的存在情况。
22、在一种或多种实施方式中，室温或4℃时，所述步骤(2)与步骤(1)的间隔时间例如0～30天(如1h，5h，12h，18h，1天，2天，3天，5天，8天，10天，15天，20天，25天)；冷冻时，所述步骤(2)与步骤(1)的间隔时间为0～365天或更长。
23、在一种或多种实施方式中，n例如为30、50、100、200、400、600、800、1200、1500、2500、3500、4000等；优选地为300～3000的正整数，更优选地为500、1000或2000。
24、在本专利技术的第三方面，提供一种rna样品(如rna病毒样品)的保存液，包括：两性高本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种体外检测RNA样品的方法，包括：
2.一种保存RNA样品的方法，包括：将RNA样品加入到保存液中，获得含有RNA样品的保存液；
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述保存液中，还包括ProClean 150。
4.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述保存液中，各组分的含量为：
5.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述保存液的pH为7.0～8.0；较佳地，各组分在pH缓冲液或溶液中混合；较佳地，所述pH缓冲液包括：HEPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、MOPS缓冲液；更佳地，所述保存液包括HEPES缓冲液或Tris-HCl缓冲液；或
6.一种RNA样品的保存液，包括：两性高分子聚合物，RNase Inhibitor，Carrier RNA，海藻糖，血清，NaCl，CaCl2，MgCl2，D-葡萄糖；各组分的含量为：
7.如权利要求6所述的RNA样品的保存液，其特征在于，所述保存液的pH为7.0～8.0；较佳地，所述保存液包括pH缓冲液；较佳地，所述缓冲
8.一种制备RNA样品的保存液的方法，包括将两性高分子聚合物，RNase Inhibitor，Carrier RNA，海藻糖，血清，NaCl，CaCl2，MgCl2，D-葡萄糖进行混合；较佳地，调节所述保存液的pH为7.0～8.0；较佳地，与缓冲液或溶液混合调节pH；更佳地，所述缓冲液包括：HEPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、MOPS缓冲液；更佳地，所述保存液包括HEPES缓冲液或Tris-HCl缓冲液；其中各组分用量如下或为如下的等比例浓缩态：各组分的含量为：
9.一种试剂盒，其包括：容器或包装；以及，装于所述容器或包装的权利要求6或7所述的RNA样品的保存液。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于进行体外检测RNA样品，其中还包括：容器或包装；以及，装于所述容器或包装的核酸扩增和/或核酸检测试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种体外检测rna样品的方法，包括：
2.一种保存rna样品的方法，包括：将rna样品加入到保存液中，获得含有rna样品的保存液；
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述保存液中，还包括proclean 150。
4.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述保存液中，各组分的含量为：
5.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述保存液的ph为7.0～8.0；较佳地，各组分在ph缓冲液或溶液中混合；较佳地，所述ph缓冲液包括：hepes缓冲液、tris-hcl缓冲液、磷酸盐缓冲液、mops缓冲液；更佳地，所述保存液包括hepes缓冲液或tris-hcl缓冲液；或
6.一种rna样品的保存液，包括：两性高分子聚合物，rnase inhibitor，carrier rna，海藻糖，血清，nacl，cacl2，mgcl2，d-葡萄糖；各组分的含量为：
7.如权利要求6所述的rna样品的保存液，其特征在于，所述保存液的ph为7.0～8.0；较佳地，所述保存液包...
【专利技术属性】
技术研发人员：葛新建，余方荣，王利芳，张美玲，
申请(专利权)人：上海碧云天生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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