一种牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明专利技术采用以耐热纳米颗粒为支架的方法，耦连两个抗原构建二价抗原，将以E0和E2基因为基础的重组表达基因所编码的特征性抗原定向装载于纳米颗粒蛋白表面，制备含两个BVDV血清型特征性抗原的新型二价亚单位疫苗抗原，显著提升疫苗免疫原性。本发明专利技术利用二价纳米颗粒抗原免疫产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的卵黄抗体，使得免疫制备的抗体滴度更高、亲和力更强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体为一种牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒及其制备方法和应用。

技术介绍

1、牛病毒性腹泻(bovineviraldiarrhoea/mucosaldisease)是由牛病毒性腹泻病毒(bvdv)引起的以粘膜发炎、糜烂、坏死和腹泻为特征的一种传染性疾病，各种年龄的牛都易感染、以幼龄牛易感性最高。然而，该病至今尚无有效治疗和免疫方法，只有加强护理和对症疗法，增强机体抵抗力，促使病牛康复。

2、直至目前，应用疫苗防控bvd仍然是重要的方法。1960年bvdv疫苗开始生产，随着生物技术的发展，现如今已研制出多种类型的bvdv疫苗，其中，亚单位疫苗，尤其是多表位疫苗的研发取得了飞跃的进展。然而，仍然有部分表位肽存在体内容易降解、免疫原性较低的问题，这使得免疫细胞上的受体难以识别表位肽并刺激相应的免疫反应，从而导致产生的抗体滴度较低，难以产生较好的预防效果。而在bvdv基因组中e2、e0基因所编码的蛋白是bvdv的2个主要保护性抗原，均可用于基因工程疫苗的研究。e2基因保守性低，变异率高，所编码的蛋白具有较强的免疫原性；而e0基因高度保守本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原，其特征在于，所述牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原包括E0重组蛋白、E2重组蛋白和耐热纳米颗粒AaLS；编码E0重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码E0重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；编码耐热纳米颗粒AaLS的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原，其特征在于，所述E0重组蛋白和/或E2重组蛋白的氨基端含有Spytag，所述E0重组蛋白和/或E2重组蛋白的羧基端含有组氨酸标签。

3.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原，其特征在于...

【技术特征摘要】

1.一种牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原，其特征在于，所述牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原包括e0重组蛋白、e2重组蛋白和耐热纳米颗粒aals；编码e0重组蛋白的核苷酸序列如seq id no.1所示；编码e0重组蛋白的核苷酸序列如seq id no.2所示；编码耐热纳米颗粒aals的核苷酸序列如seq id no.3所示。

2.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原，其特征在于，所述e0重组蛋白和/或e2重组蛋白的氨基端含有spytag，所述e0重组蛋白和/或e2重组蛋白的羧基端含有组氨酸标签。

3.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原，其特征在于，所述耐热纳米颗粒aals含有spycatcher。

4.根据权利要求1所述的牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原，其特征在于，所述e0重组蛋白和/或e2重组蛋白的制备方法包括如下步骤：以bvdv-1gs5株的e0和/或e2基因序列作为重组表达基因，将上述e0和/或e2基因序列连接至pet21b表达载体获得重组载体pet21b-e0和/或pet21b-e2，并通过体外重组表达和纯化获得e0重组蛋白和/或e2重组蛋白。

5.根据权利要求4所述的牛病毒性腹泻病毒纳米颗粒抗原，其特征在于，所述体外重组表达包括如下步骤：将重...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈泽良，范首东，张燚，张岩，来永豪，韩小虎，祈安东，
申请(专利权)人：东沃同泰凤城生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：