【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、在生物反应器中以超过一升的规模(例如，小规模、大规模或商业规模)生产常规治疗性多肽，随后对治疗性多肽进行下游纯化是一个昂贵且耗时的过程。在美国，旨在用于通过注射或输注进行施用的治疗性多肽必须符合美国fda现行的良好生产规范(cgmp)规定，以确定属性(identity)、强度、纯度和其它质量。此外，经纯化多肽(例如，治疗性多肽)众所周知是脆弱的，并且可能错误折叠、聚集或沉淀，这会导致功效丧失。因此，从生产到施用期间维持治疗性多肽的功效可能需要对易碎的纯化治疗性多肽的小心调配、温和处理和/或冷链分配。
2、例如，这些因素使得治疗性多肽的开发、生产和分配比同样用于治疗用途的小分子更加昂贵。另外，治疗性多肽通常由保健专业人员使用注射或静脉输注来施用，这需要患者前往保健机构接受治疗。这可能会降低患者依从性，并且导致不良的患者结果。
3、一些治疗性多肽包含例如单克隆抗体。一些实例包含但不限于阿达木单抗(adalimumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、苏金单抗(secukinumab)和依奇珠单抗(ixekizumab)，所述单抗中和促炎性细胞因子并且在治疗许多炎性疾病方面非常成功。然而，这些治疗性多肽需要针注射，并且由于抗药物抗体应答和全身免疫抑制，它们的长期使用伴随着效力的丧失和严重的副作用。另外，目前其它施用途径的替代方案有限，因为通过口服途径将治疗性多肽(例如，蛋白质、多肽、抗体或其功能性片段递送到胃肠(gi)道必须克服若干主要障碍：1)生产大量用于口服递送的治疗性多肽是昂贵的；
4、尽管在与例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻和其它炎性病状或炎症相关病状有关的研究方面取得了进展，但是仍然缺乏用于长期使用的有力且有效的治疗方法。此外，存在对治疗性多肽的确定的商业和医学需求，所述治疗性多肽是廉价的，并且可以在不需要下游多肽加工和经纯化情况下制备，没有免疫原性，避免了冷链分配和冷藏，并且对患者友好，例如，可以以口服剂型自行施用。
5、本公开满足了这些需求和其它需求。
技术实现思路
1、本公开提供了一种用于利用能够在肠道中合成治疗性多肽的工程化酵母属酵母进行此类治疗性多肽的口服递送途径的平台。本公开同样提供了利用所公开的平台的治疗方法，以及另外的相关方法和用途。
2、一方面，本公开提供了工程化酵母属酵母菌株，其包括：
3、编码治疗性多肽的核酸的至少一个位点特异性染色体插入，
4、其中所述治疗性多肽选自包括抗原结合结构域的结合蛋白、免疫球蛋白、抗体、细胞因子、激素和趋化因子或其组合。
5、在一些实施例中，所述酵母是布拉氏酵母菌(saccharomyces boulardii)。
6、在一些实施例中，所述酵母进一步包括ura3的完全或部分缺失。在一些实施例中，所述酵母进一步包括gap1的完全或部分缺失。在一些实施例中，所述酵母是ura3(-/-)和gap1(-/-)。
7、在一些实施例中，编码所述治疗性多肽的核酸被并入到所述酵母的基因组中的至少两个不同位置或所述酵母的基因组中的至少一个热点中。在一些实施例中，编码所述治疗性多肽的核酸被并入到至少两个不同染色体中。在一些实施例中，所述至少两个不同染色体包括染色体vii和xvi。
8、在一些实施例中，所述酵母可以进一步包括并入到所述酵母的基因组中的编码二氢叶酸还原酶(dhfr)的核酸序列，其中所述dhfr任选地是哺乳动物dfhr。另外地或可替代地，在一些实施例中，所述酵母可以进一步包括编码酵母dfr1的一种或多种外源核酸。
9、在一些实施例中，所述治疗性多肽是包括选自以下的结构的结合蛋白：vhh、fc-vhh、vhh-fc、vhh-vhh、vhh-vhh-vhh-vhh、fc-vhh-vhh、vhh-fc-vhh和vhh-vhh-fc，其中vhh或fc结构域中的每个或任何一个结构域通过任选的接头序列与另一个vhh或fc结构域连接。
10、在一些实施例中，所述治疗性多肽是与tcda、tcdb或其组合结合的结合蛋白。在一些实施例中，所述治疗性多肽包括seq id no:5的氨基酸序列。
11、在一些实施例中，所述治疗性多肽是与tnf-α结合的结合蛋白。在一些实施例中，所述结合蛋白是igg或包括至少一个vhh结构域。在一些实施例中，所述治疗性蛋白包括选自seq id no:6、7、19和20中的任一个的氨基酸序列。
12、在一些实施例中，所述治疗性多肽是与il-17a结合的结合蛋白。在一些实施例中，所述结合蛋白是igg或包括至少一个vhh结构域。在一些实施例中，所述治疗性蛋白包括seqid no:25的氨基酸序列。
13、在一些实施例中，所述治疗性多肽是与tnf-α和il-17a结合的双特异性结合蛋白。在一些实施例中，所述结合蛋白是igg或包括至少两个vhh结构域。在一些实施例中，所述治疗性蛋白包括选自seq id no:8、9和10中的任一个的氨基酸序列。
14、在一些实施例中，所述治疗性多肽是与诺如病毒或轮状病毒结合的结合蛋白。在一些实施例中，所述结合蛋白是igg或包括至少一个vhh结构域。在一些实施例中，所述治疗性蛋白包括选自seq id no:13、14、15和16中的任一个的氨基酸序列。
15、在一些实施例中，所述治疗性多肽是与cwp84结合并且与裂解素结构域融合的vhh。在一些实施例中，所述治疗性蛋白包括选自seq id no:21和22中的任一个的氨基酸序列。
16、在一些实施例中，所述治疗性多肽是细胞因子或趋化因子。在一些实施例中，所述细胞因子是il-22或il-10。在一些实施例中，所述细胞因子或所述趋化因子与fc结构域融合。在一些实施例中，所述治疗性蛋白包括选自seq id no:11、12和27中的任一个的氨基酸序列。
17、在一些实施例中，所述治疗性多肽是glp1。在一些实施例中，所述治疗性蛋白包括选自seq id no:17、23和24中的任一个的氨基酸序列。
18、在一些实施例中，所述治疗性多肽是瘦蛋白。在一些实施例中，所述治疗性蛋白包括seq id no:18的氨基酸序列。
19、在一些实施例中，所述酵母包括并入到其基因组中的所述编码所述治疗性多肽的核酸的至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个或更多个拷贝。
20、在一些实施例中，所述酵母可以进一步包括编码第二治疗性多肽的第二核酸的至少一个位点特异性染色体插入，其中所述第二治疗性多肽选自包括vhh结构域的结合蛋白、免疫球蛋白、细胞因子和趋化因子或其组合。
21、另一方面，本公开提供了在体内与抗原结合的方法，所述方法包括向受试者施用如本文所公本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种工程化酵母属酵母(Saccharomyces yeast)菌株，其包括：
2.根据权利要求1所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述酵母是布拉氏酵母菌(Saccharomyces boulardii)。
3.根据权利要求1或2所述的工程化酵母属酵母菌株，其进一步包括URA3的完全或部分缺失。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其进一步包括GAP1的完全或部分缺失。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述酵母是ura3(-/-)和gap1(-/-)。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中编码所述治疗性多肽的核酸被并入到所述酵母的基因组中的至少两个不同位置或所述酵母的基因组中的至少一个热点中。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中编码所述治疗性多肽的核酸被并入到至少两个不同染色体中。
8.根据权利要求7所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述至少两个不同染色体包括染色体VII和XVI。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其进一步包括编码酵母DFR1的一种或多种外源核酸。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是包括选自以下的结构的结合蛋白：VHH、Fc-VHH、VHH-Fc、VHH-VHH、VHH-VHH-VHH-VHH、Fc-VHH-VHH、VHH-Fc-VHH和VHH-VHH-Fc，其中VHH或Fc结构域中的每个或任何一个结构域通过任选的接头序列与另一个VHH或Fc结构域连接。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与TcdA、TcdB或其组合结合的结合蛋白。
13.根据权利要求12所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽包括SEQ IDNO:5的氨基酸序列。
14.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与TNF-α结合的结合蛋白。
15.根据权利要求14所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述结合蛋白是IgG或包括至少一个VHH结构域。
16.根据权利要求14或15所述的工程化酵母属酵母菌株，其中治疗性蛋白包括选自SEQID NO:6、7、19和20中的任一个的氨基酸序列。
17.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与IL-17A结合的结合蛋白。
18.根据权利要求17所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述结合蛋白是IgG或包括至少一个VHH结构域。
19.根据权利要求17或18所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性蛋白包括SEQID NO:25的氨基酸序列。
20.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与TNF-α和IL-17A结合的双特异性结合蛋白。
21.根据权利要求20所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述结合蛋白是IgG或包括至少两个VHH结构域。
22.根据权利要求20或21所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性蛋白包括选自SEQ ID NO:8、9和10中的任一个的氨基酸序列。
23.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与诺如病毒或轮状病毒结合的结合蛋白。
24.根据权利要求23所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述结合蛋白是IgG或包括至少一个VHH结构域。
25.根据权利要求23或24所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性蛋白包括选自SEQ ID NO:13、14、15和16中的任一个的氨基酸序列。
26.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与cwp84结合并且与裂解素结构域融合的VHH。
27.根据权利要求26所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性蛋白包括选自SEQID NO:21和22中的任一个的氨基酸序列。
28.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是细胞因子或趋化因子。
29.根据权利要求28所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述细胞...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种工程化酵母属酵母(saccharomyces yeast)菌株，其包括：
2.根据权利要求1所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述酵母是布拉氏酵母菌(saccharomyces boulardii)。
3.根据权利要求1或2所述的工程化酵母属酵母菌株，其进一步包括ura3的完全或部分缺失。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其进一步包括gap1的完全或部分缺失。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述酵母是ura3(-/-)和gap1(-/-)。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中编码所述治疗性多肽的核酸被并入到所述酵母的基因组中的至少两个不同位置或所述酵母的基因组中的至少一个热点中。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中编码所述治疗性多肽的核酸被并入到至少两个不同染色体中。
8.根据权利要求7所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述至少两个不同染色体包括染色体vii和xvi。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其进一步包括并入到所述酵母的基因组中的编码二氢叶酸还原酶(dhfr)的核酸序列，其中所述dhfr任选地是哺乳动物dfhr。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其进一步包括编码酵母dfr1的一种或多种外源核酸。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是包括选自以下的结构的结合蛋白：vhh、fc-vhh、vhh-fc、vhh-vhh、vhh-vhh-vhh-vhh、fc-vhh-vhh、vhh-fc-vhh和vhh-vhh-fc，其中vhh或fc结构域中的每个或任何一个结构域通过任选的接头序列与另一个vhh或fc结构域连接。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与tcda、tcdb或其组合结合的结合蛋白。
13.根据权利要求12所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽包括seq idno:5的氨基酸序列。
14.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与tnf-α结合的结合蛋白。
15.根据权利要求14所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述结合蛋白是igg或包括至少一个vhh结构域。
16.根据权利要求14或15所述的工程化酵母属酵母菌株，其中治疗性蛋白包括选自seqid no:6、7、19和20中的任一个的氨基酸序列。
17.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与il-17a结合的结合蛋白。
18.根据权利要求17所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述结合蛋白是igg或包括至少一个vhh结构域。
19.根据权利要求17或18所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性蛋白包括seqid no:25的氨基酸序列。
20.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与tnf-α和il-17a结合的双特异性结合蛋白。
21.根据权利要求20所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述结合蛋白是igg或包括至少两个vhh结构域。
22.根据权利要求20或21所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性蛋白包括选自seq id no:8、9和10中的任一个的氨基酸序列。
23.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与诺如病毒或轮状病毒结合的结合蛋白。
24.根据权利要求23所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述结合蛋白是igg或包括至少一个vhh结构域。
25.根据权利要求23或24所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性蛋白包括选自seq id no:13、14、15和16中的任一个的氨基酸序列。
26.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是与cwp84结合并且与裂解素结构域融合的vhh。
27.根据权利要求26所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性蛋白包括选自seqid no:21和22中的任一个的氨基酸序列。
28.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述治疗性多肽是细胞因子或趋化因子。
29.根据权利要求28所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述细胞因子是il-22或il-10。
30.根据权利要求28或29所述的工程化酵母属酵母菌株，其中所述细胞因子或所述趋化因...
【专利技术属性】
技术研发人员：余华，L·尼亚萨伊，K·霍本，杨智勇，
申请(专利权)人：弗扎图赫股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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