【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞冻存，具体涉及一种无血清无dmso的人间充质干细胞冻存液。
技术介绍
1、间充质干细胞(mesenchymal stem cells,mscs)是来源于发育早期的中胚层和外胚层的成体干细胞，具有高度自我更新能力和多向分化潜能，是造血微环境中的一种重要的细胞成分。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞。间充质干细胞连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，且免疫原性弱，具有广阔的临床应用前景，是细胞替代治疗和组织工程的首选种子细胞，是有移植和自身免疫系统疾病治疗领域的研究热点。
2、间充质干细胞来源广泛，骨髓是mscs的主要来源，但骨髓中的mscs含量极少，仅占骨髓单个核细胞的0.002～0.005％。近年来，研究人员陆续从其他组织如脐血、脐带、胎盘、脂肪、乳牙等中分离得到mscs。其中脐带、胎盘间充质干细胞表达多种胚胎干细胞特有分子标志，更具有分化潜能大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、无道德伦理问题限制、易于工业化制备等特征，逐渐成为骨髓间充干细胞的理想替代物，因此有可能成为最具有临床应用前景的多能干细胞。
3、但原代mscs细胞纯度不高，且数量不能满足临床治疗需求，必须经过体外培养扩增的过程。因此，为了在最佳的治疗时间获得足够数量mscs，需将大量的间充质干细胞传代培养增殖后冻存起来，合理保存特定代次的mscs，不仅能够保证有足够数量的细胞可以及时满足临床治疗需要，而且可以避免连续多次传代造成的细胞老化
4、现有的细胞冷冻保护剂基本都是添加有10～20％胎牛血清(fbs)和10％二甲基亚砜的细胞基础培养基(如dmem、rpmi1640等)。其中dmso属于渗透性保护剂，它能快速渗入细胞内，减少细胞暴露在有害环境的时间，但是它在常温下对细胞有毒性作用，常温下操作会导致细胞活性降低。而fbs会增加动物病原污染的机率，这都会给细胞以后的使用增加不确定因素，并且现有技术中的细胞冻存液除了安全问题外，很难长时间维持细胞活率，复苏后细胞贴壁率低也是急需解决的。因此，寻找一种可以替代动物血清和dmso冻存细胞，并可维持高细胞复苏活率和细胞贴壁率的冻存液具有非常重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种无血清无dmso的人间充质干细胞冻存液，从而能够有效解决现有技术中存在的问题。
2、所述的人间充质干细胞冻存液，是添加有5～30％的血小板裂解液，50～500mg/l藻蛋白多糖，1～5g/l明胶，10～200g/l海藻糖的基础培养基。
3、更进一步，所述的人间充质干细胞冻存液，其组成为
4、
5、
6、优选的，所述基础培养基为α-mem。
7、所述的藻蛋白多糖，是将螺旋藻用水进行提取，调节提取液的ph值至3-5，放置后进行离心，上清液再调节ph至7.0，然后喷雾干燥，得到藻蛋白多糖提取物。
8、所述的调节提取液的ph值至3-5，是使用盐酸进行调节；上清液调节ph至7.0，是使用na2co3溶液调节；
9、所述的离心，是在4000rpm，离心15min。
10、本专利技术所提供的冻存液用于冻存人间充质干细胞；
11、本专利技术还提供一种冻存人间充质干细胞的方法，是使用上述的冻存液来冻存人间充质干细胞；
12、更进一步的，所冻存的人脐带间充质干细胞的浓度为5×105～1×108个/ml。
13、本专利技术所提供的冻存液没有添加动物来源的血清，所以可以控制感染动物病毒的风险；不含dmso，减少了常温下对细胞的毒性作用以及残留造成对神经系统的毒性作用。本专利技术的冻存液保存的细胞复苏后存活率高(＞95％)，细胞活率维持时间长(＞2年)；复苏后细胞贴壁率高(＞90％)，复苏后的细胞干细胞特性保持佳。
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1.一种人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的人间充质干细胞冻存液是添加有5～30％的血小板裂解液，50～500mg/L藻蛋白多糖，1～5g/L明胶和10～200g/L海藻糖的基础培养基。
2.如权利要求1所述的人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的人间充质干细胞是添加有20％的血小板裂解液，200mg/L藻蛋白多糖，3g/L明胶和100g/L海藻糖的基础培养基。
3.如权利要求1所述的人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的基础培养基为α-MEM。
4.如权利要求1或2所述的人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的藻蛋白多糖，是将螺旋藻用水进行提取，调节提取液的pH值至3-5，放置后进行离心，上清液再调节pH至7.0，然后喷雾干燥，得到藻蛋白多糖提取物。
5.如权利要求4所述的人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的调节提取液的pH值至3-5，是使用盐酸进行调节。
6.如权利要求4所述的人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的上清液调节pH至7.0，是使用Na2CO3溶液调节。
7.如权利要求4所述的人
8.权利要求1所述人间充质干细胞冻存液在冻存人间充质干细胞中的应用。
9.一种冻存人间充质干细胞的方法，其特征在于，所述的方法是使用权利要求1所述人间充质干细胞冻存液来冻存人间充质干细胞。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的方法中所冻存的人脐带间充质干细胞的浓度为5×105～1×108个/ml。
...【技术特征摘要】
1.一种人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的人间充质干细胞冻存液是添加有5～30％的血小板裂解液，50～500mg/l藻蛋白多糖，1～5g/l明胶和10～200g/l海藻糖的基础培养基。
2.如权利要求1所述的人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的人间充质干细胞是添加有20％的血小板裂解液，200mg/l藻蛋白多糖，3g/l明胶和100g/l海藻糖的基础培养基。
3.如权利要求1所述的人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的基础培养基为α-mem。
4.如权利要求1或2所述的人间充质干细胞冻存液，其特征在于，所述的藻蛋白多糖，是将螺旋藻用水进行提取，调节提取液的ph值至3-5，放置后进行离心，上清液再调节ph至7.0，然后喷雾干燥，得到藻蛋白多糖提取物。
...【专利技术属性】
技术研发人员：王玉娟，丛海波，刘传杰，丛璐，
申请(专利权)人：青岛麦迪赛斯医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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