一种β-呋喃果糖苷酶突变体及其在制备低聚乳果糖中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种β‑呋喃果糖苷酶突变体及其在制备低聚乳果糖中的应用，属于酶工程技术领域。本发明专利技术对β‑呋喃果糖苷酶ArFF的氨基酸序列进行定点突变，获得一系列制备低聚乳果糖转化率提高的单突变体S165A、N244Q、T360F、Y422F、Y425F，最终获得组合突变体S165A/N244Q/Y422F/Y425F，可以将350g/L乳糖和350g/L蔗糖转化为转化成268.6g/L的低聚乳果糖，转化率达到38.37％，提高了9.4％，拓宽了其在食品领域的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种β-呋喃果糖苷酶突变体及其在制备低聚乳果糖中的应用，属于酶工程。

技术介绍

1、低聚乳果糖是双歧杆菌的有效增殖因子，可以改变肠道微生态环境，调节肠道的免疫功能，改善结肠炎等，同时因为其难以消化的特性具有降血脂、降低胆固醇等功效，受到广大消费者和日化、医药等众多行业的青睐，市场需求量逐年增加。

2、低聚乳果糖是由半乳糖、葡萄糖和果糖组成的非还原性三糖。目前低聚乳果糖主要由酶法合成，一种是通过β-半乳糖苷酶(ec 3.2.1.23)的催化，但使用β-半乳糖苷酶生产低聚乳果糖可能会形成其他寡糖副产物，转化率较低，且纯化过程更加困难。另一种是通过β-呋喃果糖苷酶(ec 3.2.1.26)或果聚糖蔗糖酶(ec 2.4.1.10)的催化，使用果聚糖蔗糖酶制备低聚乳果糖时易形成不同聚合度的低聚糖，β-呋喃果糖苷酶因其受体特异性高，产物组分较为单一，成为低聚乳果糖制备用酶的更优选择。近年来，工业上主要是利用节杆菌产的β-呋喃果糖苷酶生产低聚乳果糖，但目前该酶制备低聚乳果糖时转化率较低。

3、β-呋喃果糖苷酶属于糖苷水解酶gh68家本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种β-呋喃果糖苷酶，其特征在于，所述β-呋喃果糖苷酶以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列作为出发序列，对出发序列进行了包括以下(a)-(e)所示至少一种的突变：

2.根据权利要求1所述的β-呋喃果糖苷酶，其特征在于，所述β-呋喃果糖苷酶以SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列作为出发序列，对出发序列进行了如下所示的突变：将第165位丝氨酸突变成丙氨酸，将第244位天冬酰胺突变成谷氨酰胺，将422位酪氨酸突变成苯丙氨酸，将425位酪氨酸突变成苯丙氨酸。

3.编码权利要求1或2所述的β-呋喃果糖苷酶的多核苷酸。

4.携带权利要求3所述的多核苷酸的载...

【技术特征摘要】

1.一种β-呋喃果糖苷酶，其特征在于，所述β-呋喃果糖苷酶以seq id no.1所示的氨基酸序列作为出发序列，对出发序列进行了包括以下(a)-(e)所示至少一种的突变：

2.根据权利要求1所述的β-呋喃果糖苷酶，其特征在于，所述β-呋喃果糖苷酶以seq idno.1所示的氨基酸序列作为出发序列，对出发序列进行了如下所示的突变：将第165位丝氨酸突变成丙氨酸，将第244位天冬酰胺突变成谷氨酰胺，将422位酪氨酸突变成苯丙氨酸，将425位酪氨酸突变成苯丙氨酸。

3.编码权利要求1或2所述的β-呋喃果糖苷酶的多核苷酸。

4.携带权利要求3所述的多核苷酸的载体。

5.携带权利要求3所述的多核苷酸或权利要求4所述载体的重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏伟，吴敬，霍润甜，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：