一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性的方法及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明专利技术提供了一系列褐藻胶裂解酶突变体，其最适反应温度均提高10℃，单一突变体表观熔融温度提高了1.01‑11.24℃，相对酶活为野生酶的96.09％‑112.32％，半衰期为野生酶的1.01‑1.66倍。最佳组合突变体表观熔融温度提高17.05℃，相对酶活为野生酶的123.93％，半衰期为野生酶的8.21倍，45℃下孵育6h后仍能保留79.69％原始酶活，而野生酶在相同条件下孵育3h后失活。突变体与野生酶相比显示出优越的耐热性，能在较高温度下进行工业化生产，从而提高褐藻胶的利用率，具有良好的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性的方法及其应用，属于基因工程和酶工程。

技术介绍

1、褐藻胶主要是从褐藻类植物的细胞壁及细胞间质中提取出来的具有一定粘性的线性多糖，由两个同分异构单体β-d-甘露糖醛酸(m)和α-l-古洛糖醛酸(g)通过α,β-(1,4)-糖苷键随机排列形成，主要产物种类有均聚甘露糖醛酸(poly-m)、均聚古洛糖醛酸(poly-g)以及m和g随机组合的杂聚物(poly-mg、poly-gm)。褐藻胶低聚糖为褐藻胶水解后形成的聚合度为2-25的低聚物，与褐藻胶相比褐藻胶低聚糖平均分子量小、粘度低、水溶性好，克服了褐藻胶应用时的诸多不足。有研究表明褐藻胶低聚糖是一种益生元，具备多种生理活性，如抗氧化、抗菌、免疫调节以及促进植物生长等活性功能，在医药、食品、农业等领域具有极大的应用潜力。褐藻胶低聚糖是一种海洋来源的功能性低聚糖，是目前的研究热点，值得深入研究和开发。

2、目前褐藻胶的降解方法有3种，分别为物理降解法、化学降解法和生物降解法。在这些方法中，物理法通常操作简单，环境污染小，反应速度快，但无法将褐藻胶完全降解，原本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种褐藻胶裂解酶突变体，其特征在于，所述褐藻胶裂解酶突变体对氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的序列进行了如下至少一处氨基酸的取代：

2.编码权利要求1所述褐藻胶裂解酶突变体的基因。

3.表达权利要求1所述褐藻胶裂解酶突变体或权利要求2所述基因的重组载体。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述表达载体为pET系列、Duet系列、pGEX系列、pHY300、pHY300PLK、pPIC3K或pPIC9K系列载体。

5.表达权利要求1所述褐藻胶裂解酶突变体，或含有权利要求2所述基因，或含有权利要求3或4所述的重组载体的重组...

【技术特征摘要】

1.一种褐藻胶裂解酶突变体，其特征在于，所述褐藻胶裂解酶突变体对氨基酸序列如seq id no.4所示的序列进行了如下至少一处氨基酸的取代：

2.编码权利要求1所述褐藻胶裂解酶突变体的基因。

3.表达权利要求1所述褐藻胶裂解酶突变体或权利要求2所述基因的重组载体。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述表达载体为pet系列、duet系列、pgex系列、phy300、phy300plk、ppic3k或ppic9k系列载体。

5.表达权利要求1所述褐藻胶裂解酶突变体，或含有权利要求2所述基因，或含有权利要求3或4所述的重组载体的重组细胞。

6.根据权利要求5所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞以原核细胞或真核细胞为表达宿主。

7.一种提高褐藻胶裂解酶热稳定性的方法，其特征在于，所述方法为，将氨基酸序列如seq id no.4所示的褐藻胶裂解酶的第18位苏氨酸突变为脯氨酸；或将氨基酸序列如seqid no.4所示的褐藻胶裂解酶的第34位丙氨酸突变为脯氨酸；或将氨基酸序列如seq idno.4所示的褐藻胶裂解酶的第73位天冬酰胺突变为甘氨酸；...

【专利技术属性】
技术研发人员：龙杰，陈晨，李兴飞，田耀旗，周星，陈龙，邱超，焦爱权，金征宇，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：