一种能生产单磷酸类脂A疫苗佐剂的重组大肠杆菌制造技术

本发明专利技术公开了一种能生产单磷酸类脂A疫苗佐剂的重组大肠杆菌，属于基因工程和合成生物学领域。本发明专利技术敲除了大肠杆菌MG1655基因组上磷脂转运系统的mlaE和pldA基因，调控PagP表达的hns基因，并通过缺失替换其他与磷脂转运相关的基因簇ybgC‑cpoB和letAB依次整合来自弗朗西斯菌的FnlpxE和来自沙门氏菌的SepagL基因，获得重组菌WZM012。通过简单的发酵，WZM012菌株能高效合成单磷酸六酰化类脂A(MPL)，发酵24h即可产生32.76mg/L的MPL，MPL在全部类脂A中的比例高达到70％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种能生产单磷酸类脂a疫苗佐剂的重组大肠杆菌，属于基因工程和合成生物学领域。

技术介绍

1、lps是大肠杆菌外膜的主要组成成分，起到对细菌的保护作用。其由类脂a、核心多糖和o-抗原三部分组成；类脂a结构是lps的生物活性中心和宿主免疫细胞的识别位点，不同结构的类脂a可在体内产生不同种类的细胞因子，引起不同的免疫反应。当一些致病菌侵入宿主细胞，会被宿主体内的病原体识别受体tlr4(toll-like receptor 4)识别，一些结构的类脂a会宿主产生大量的细胞因子，导致过度免疫，引发内毒素休克，而一些结构的类脂a会使宿主产生适量的细胞因子，增强宿主细胞的免疫效果。因而，特定结构的类脂a衍生物可作为免疫系统激活剂而被开发成疫苗或疫苗佐剂。铝佐剂是当前最广泛的疫苗佐剂，但其存在不能诱导较强t细胞免疫的弊端，迫切需要开发能激活t细胞免疫应答的疫苗佐剂以应对那些需要依靠t细胞预防治疗的疾病，如肺结核和疟疾等。

2、单磷酸类脂a(mpla)是一种被临床认证可用作疫苗佐剂类脂a衍生物，mpla存在着不同的结构，例如七酰基化单磷酸类脂a(p-本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌以大肠杆菌为出发菌株，敲除了出发菌株基因组中的mlaE基因、pldA基因、hns基因、ybgC-cpoB基因簇和letAB基因簇；整合表达了脱磷酸酶LpxE和脱酰基酶PagL。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述mlaE、pldA和hns基因的Gene ID分别为947732、948307、945829；

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述大肠杆菌包括大肠杆菌MG1655。

4.一种生产单磷酸类脂A的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1-3任一所述重组菌接种于发酵培养基中，发酵生产...

【技术特征摘要】

1.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌以大肠杆菌为出发菌株，敲除了出发菌株基因组中的mlae基因、plda基因、hns基因、ybgc-cpob基因簇和letab基因簇；整合表达了脱磷酸酶lpxe和脱酰基酶pagl。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述mlae、plda和hns基因的gene id分别为947732、948307、945829；

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述大肠杆菌包括大肠杆菌mg1655。

4.一种生产单磷酸类脂a的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1-3任一所述重组菌接种于发酵培养基中，发酵生产单磷酸类...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小元，赵爱珍，王震，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：