工程化DNA聚合酶变体制造技术

本公开内容涉及工程化DNA聚合酶多肽及其组合物、以及编码该工程化DNA聚合酶多肽的多核苷酸。本公开内容还提供了将该工程化DNA聚合酶多肽或其组合物用于诊断和其他目的的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本公开内容提供了工程化dna聚合酶多肽及其组合物、以及编码该工程化dna聚合酶多肽的多核苷酸。本公开内容还提供了将重组dna聚合酶或其组合物用于诊断、分子生物学工具和其他目的的方法。

技术介绍

0、背景

1、dna聚合酶是从脱氧核糖核苷酸合成dna的酶。这些酶是dna复制必需的。存在显示出不同特性并存在于不同类型的生物体中的各种类型的dna聚合酶。发现从嗜热生物体获得的聚合酶在各种体外方法中的宽范围重要用途，包括但不限于聚合酶链式反应(pcr)、核酸测序和其他诊断、分子生物学和法医学应用。虽然存在许多商购可得的热稳定dna聚合酶，诸如taq和pfu dna聚合酶，但本领域对于具有改进的特性诸如增强的进行性(processivity)和/或保真度的热稳定酶仍然存在需求。

技术实现思路

0、概述

1、本公开内容涉及工程化dna聚合酶多肽及其组合物、以及编码该工程化dna聚合酶多肽的多核苷酸。本公开内容还提供了将工程化dna聚合酶多肽及其组合物用于诊断和其他目的的方法。</p>

2、在一本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种工程化DNA聚合酶或其功能片段，包含与对应于SEQ ID NO:2、8、332、462或606的残基12至850的参考序列或与对应于SEQ ID NO:2、8、332、462或606的参考序列具有至少75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列，其中所述多肽序列相对于对应于SEQ ID NO:2、8、332、462或606的残基12至850的参考序列或相对于对应于SEQ IDNO:2、8、332、462或606的参考序列包含一个或更多...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种工程化dna聚合酶或其功能片段，包含与对应于seq id no:2、8、332、462或606的残基12至850的参考序列或与对应于seq id no:2、8、332、462或606的参考序列具有至少75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列，其中所述多肽序列相对于对应于seq id no:2、8、332、462或606的残基12至850的参考序列或相对于对应于seq idno:2、8、332、462或606的参考序列包含一个或更多个取代。

2.根据权利要求1所述的工程化dna聚合酶，包含与对应于seq id no:2的残基12至850的参考序列或与对应于seq id no:2的参考序列具有至少75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列，其中所述多肽序列相对于对应于seq id no:2的残基12至850的参考序列或相对于对应于seq id no:2的参考序列包含一个或更多个取代。

3.根据权利要求1所述的工程化dna聚合酶，包含与对应于seq id no:8、332、462或606的残基12至850的参考序列或与对应于seq id no:8、332、462或606的参考序列具有至少75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的多肽序列，其中所述多肽序列相对于对应于seq id no:2的残基12至850的参考序列或相对于对应于seq id no:2的参考序列包含一个或更多个取代。

4.根据权利要求2或3所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代：15、16、20、21、22、40、41、52、57、58、73、85、87、88、91、102、109、132、157、177、186、200、213、217、231、232、242、243、262、263、264、265、273、299、321、322、328、384、386、401、402、403、404、406、407、440、476、480、491、495、498、503、504、506、507、508、511、514、520、521、523、524、525、526、527、528、529、530、533、534、535、536、537、538、539、540、542、553、554、555、556、557、558、559、560、562、563、566、570、572、581、582、584、585、586、587、589、592、593、594、595、596、597、599、601、602、603、605、607、616、665、671、674、675、677、684、688、696、704、705、706、728、735、747、748、749、750、751、753、755、756、762、763、764、766、772、773、779、793、803、814、820或849或其组合，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列包含以下至少一个取代：15a/g/k/n、16r、20a/c、21k/q/s、22k、40a、41f、52r、57t、58n、73a、85e/p/r/s、87n、88t、91k、102v/m/s、109p、132y、157g、177t、186e、200v、213p、217e、231e、232c、242q、243l/s、262l、263a、264t、265i、273m、299n、321g、322n/s、328i、384y、386v、401a/g/i、402g/r、403l/r、404s/t、406k/q、407r/w、440g、476i/n、480e/v/w、491g、495e/m/s、498d、503i/v、504m、506p、507k、508h、511m、514f、520p、521g/w/y、523a/k/v、524g/k/q、525l/v、526t、527v/w、528a/q/r/w、529s、530g/p/r/w、533l/p/q/v、534h/w、535k、536r、537g/l/w、538a、539l/r、540h/v、542g/m/t/w、553f/k/n/r、554e、555h/k/m/w、556f/m/p/w、557g/h、558r/s/v/q、559d/g/p、560g/m、562s、563l、566a、570r、572i、581a、582f、584n、585kr、586m、587q/s、589g/l/r/s/w、592g/t/v、593n、594c/q/t/v/w、595a/p/r、596l/r/w、597e、599g/s/t、601m/p、602v、603g/v/w、605e/a、607n、616a、665v、671e/r、674t、675l、677m、684v、688i、696h/v、704p、705w、706e、728k、735g/l、747t、748y、749l/r/t、750s/p、751h、753k/v、755p、756n/t、762m/q/v、763g/y、764a/i/v、766y、772i、773r、779i、793g、803c/r、814e、820a或849t或其组合，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2。

6.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代：40、85、102、132、157、177、262、263、503、521、748或750或其组合，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

7.根据权利要求6所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列包含以下至少一个取代：40a、85e、102s、132y、157g、177t、262l、263a、521g、748y或750s或其组合，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

8.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代或取代集：213/503/508/584/748、40/132/748、40/132/157/262/263/748、132、40/132/503/748、40/132/157/503/562、40/132/213/748/814、132/157/562/584、132/584/748、40/132/231/684/748、40/132、40/41/132/562/684/748、41/213/231/503/650/674/748、132/231/503/748、40/132/157/503、503/748/814、40/132/231/503/674/748、40/88/132/503/684/748、132/157/213/674/748/814、157/263/748、40/748、41/157/231/262/748/814、40/213/503/562/584/748、523/524、40/132/503/514/650/674、40/132/157/213/231、41/213/520/814、40/41/157/231/503、40/157/503、40/132/562/748、132/748、40/41/132/562/748、88/213/503/584/684/748、57/58/523/616/677、40/213/231/503/514/562/748、132/562、213/503/650、40/41/88/231/748/814、41/213/262/562、41/88/231/748、213/263/748、40/157/213、157/520、40/132/263/503/674/814、40/41、524/665/756、58/186/217/523/524/677、40/41/748、132/514、520、41/213/503/562、231/503/748/772、503/562、73/232/514/584/814、58/507/616、132/262/520/562/684/748、88/562/814、41/88/157/814、88/157/213/674/684、57/58/523/779、40/132/157/514/520/684、40/41/213/684/772、40/41/231/503/814、88/213/503/584/814、40/41/132/562/584、41/88/213/231/503/650/748、40/503、40/132/213/231/520/562/650/814、40/41/132/231/262/503/562/584/748/814、57/58/264/265/524/688、88/132/157/262/263/520/562、88/132/157/262/503/514/562/650、40/584/674/748、40/41/132/263/503、584/748、40/213/674、40/41/88t/132/503/562/584/748、88/213/514/562/748/814、263/520/814、40/41/88/157，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

9.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代或取代集：22/407、328、401、402、403、404、406、407、503、504、506、521、523、524、525、526、527、528、529、530、531、533、534、535、536、537、538、539、540、542、553、554、555、556、557、558、559、560、563、581、582、585、586、587、589、592、592、592、593、594、595、596、597、598、599、601、602、603、605、607、696、747、749、751、762、763、764、766、773或803，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

10.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代或取代集：15、20、21、52、85、87、91、102、243、321、322、384、404、476、480、480、495、542、570、671、675、704、728、735、753、755、762、764、793、820、16/735、750/849、524/581、403/404/524/542/555/762/764、404/524/542/589/762/764、524/542/581/762/764、542/762/764，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

11.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代或取代集：750/820、21/52、20/21/85/322/476/495、20/85/200/322/476/495/750、476/750、20c/476、20/322/386、85/322/476、52/322/498/750、20/322/476/820、85/476/495/820、21/85/322/820、20/299/322/386/476/495/820、20/322、21/820/849、476、322/820、21/322/386/820、322/386/495、85/386/495/750、20/85/476/750、20/386/476、85/322/386/476/495、20/495/820、750、21/322/495、52/386/495/820、21/322、85/322/750/820、20/52/85、21/52/572、20/85/495/849、85/750、21/495/820、273/322/849、495、322/750/820、52/476/495/566/750/849、386/495、495/820、21/322/495/750/820、21/85/322/386/495/820/849、476/495/750、386/849、476/495、85/476/849、21/322/750、20/85/566/820或386/750/849，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

12.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含取代或取代集：299/386/566/820、476/820/849、21/322/476/495/820、177、21/495、476/820、20/52/299、52/299、322/820、20/820、20/299/386/476、386/476/820、476/495/820、386/476/495、20/21/299/322/386、322/386/495、21/299/322/476/495/820、21/299/386/820、299/476/820、20/21、21/85/102/750、705、21/386/476/820、820、21/299/322、20/21/322/386/820、299、21/299/386/476、109、322/495、491、52/820、21/386/820、20/21/495、21/299/322/495/566/820、20/21/299/495、756、386/820、495、511、21/52/242/386/495/820、299/476/495、706、21/299/386/476/495、21/299/322/495、21/476/849、299/322/476/820、21/52/299/322/820、20/21/566、20/52、322/386/495/566/820、21/299、21/299/386、386/849、52/476、52/299/322/386/495或440，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

13.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代或取代集：22/40/132/157/262/263/407/748、40/132/157/262/263/328/748、40/132/157/262/263/401/748、40/132/157/262/263/402/748、40/132/157/262/263/403/748、40/132/157/262/263/404/748、40/132/157/262/263/406/748、40/132/157/262/263/407/748、40/132/157/262/263/503/748、40/132/157/262/263/504/748、40/132/157/262/263/506/748、40/132/157/262/263/521/748、40/132/157/262/263/523/748、40/132/157/262/263/524/748、40/132/157/262/263/525/748、40/132/157/262/263/526/748、40/132/157/262/263/527/748、40/132/157/262/263/528/748、40/132/157/262/263/529/748、40/132/157/262/263/530/748、40/132/157/262/263/531/748、40/132/157/262/263/533/748、40/132/157/262/263/534/748、40/132/157/262/263/535/748、40/132/157/262/263/536/748、40/132/157/262/263/537/748、40/132/157/262/263/538/748、40/132/157/262/263/539/748、40/132/157/262/263/540/748、40/132/157/262/263/542/748、40/132/157/262/263/54g/748、40/132/157/262/263/553/748、40/132/157/262/263/554/748、40/132/157/262/263/555/748、40/132/157/262/263/556/748、40/132/157/262/263/557/748、40/132/157/262/263/558/748、40/132/157/262/263/559/748、40/132/157/262/263/560/748、40/132/157/262/263/563/748、40/132/157/262/263/581/748、40/132/157/262/263/582/748、40/132/157/262/263/585/748、40/132/157/262/263/586/748、40/132/157/262/263/587/748、40/132/157/262/263/589/748、40/132/157/262/263/592/748、40/132/157/262/263/593/748、40/132/157/262/263/594/748、40/132/157/262/263/595/748、40/132/157/262/263/596/748、40/132/157/262/263/597/748、40/132/157/262/263/598/748、40/132/157/262/263/599/748、40/132/157/262/263/601/748、40/132/157/262/263/602/748、40/132/157/262/263/603/748、40/132/157/262/263/605/748、40/132/157/262/263/607/748、40/132/157/262/263/696/748、40/132/157/262/263/747/748、40/132/157/262/263/748、40/132/157/262/263/748/749、40/132/157/262/263/748/751、40/132/157/262/263/748/762、40/132/157/262/263/748/763、40/132/157/262/263/748/764、40/132/157/262/263/748/766、40/132/157/262/263/748/773、40/132/157/262/263/748/803、40/132/157/605/262/263/748、40/132/157/262/263/403/521/748或40/132/157/262/263/403/553/748，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

14.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代或取代集：40/132/157/262/263/403/404/521/524/542/555/748/762/764、40/132/157/262/263/404/521/524/542/589/748/762/764、40/132/157/262/263/521/524/542/581/748/762/764、40/132/157/262/263/521/542/748/762/764、40/132/157/262/263/404/521/542/748/762、40/132/157/262/263/521/748/750/849、40/132/157/262/263/521/524/581/748、16/40/132/157/262/263/521/735/748、40/132/157/262/263/521/748/820、40/132/157/262/263/521/748/793、40/132/157/262/263/521/748/764、40/132/157/262/263/521/748/755、40/132/157/262/263/521/748/753、40/132/157/262/263/521/735/748、40/132/157/262/263/521/748/728、40/132/157/262/263/521/704/748、40/132/157/262/263/521/675/748、40/132/157/262/263/521/671/748、40/132/157/262/263/521/570/748、40/132/157/262/263/495/521/748、40/132/157/262/263/480/521/748、40/132/157/262/263/476/521/748、40/132/157/262/263/384/521/748、40/132/157/262/263/322/521/748、40/132/157/262/263/321/521/748、40/132/157/243/262/263/521/748、15/40/132/157/262/263/521/748、40/102/132/157/262/263/521/748、40/91/132/157/262/263/521/748、40/87/132/157/262/263/521/748、40/85/132/157/262/263/521/748、20/40/132/157/262/263/521/748、21/40/132/157/262/263/521/748或40/52/132/157/262/263/521/748，其中所述氨基酸位置是相对于seq idno:2的参考序列。

15.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代或取代集：40/102/132/157/262/263/476/521/748、40/102/132/157/262/263/495/521/748、40/102/132/157/262/263/521/748/750、21/40/52/102/132/157/262/263/521/748、21/40/102/132/157/262/263/322/521/748、20/40/102/132/157/262/263/322/521/748、20/40/102/132/157/262/263/476/521/748、40/85/102/132/157/262/263/521/748/750、40/102/132/157/262/263/386/495/521/748、40/102/132/157/262/263/476/495/521/748、40/102/132/157/262/263/322/521/748/820、40/102/132/157/262/263/386/521/748/849、20/40/52/85/102/132/157/262/263/521/748、40/102/132/157/262/263/476/521/748/750、40/102/132/157/262/263/495/521/748/820、40/102/132/157/262/263/521/748/750/820、21/40/52/102/132/157/262/263/521/572/748、20/40/102/132/157/262/263/322/386/521/748、21/40/102/132/157/262/263/322/495/521/748、40/85/102/132/157/262/263/322/476/521/748、20/40/102/132/157/262/263/386/476/521/748、21/40/102/132/157/262/263/322/521/748/750、21/40/102/132/157/262/263/495/521/748/820、20/40/102/132/157/262/263/495/521/748/820、40/85/102/132/157/262/263/476/521/748/849、21/40/102/132/157/262/263/521/748/820/849、40/102/132/157/262/263/322/386/495/521/748、40/102/132/157/262/263/273/322/521/748/849、40/102/132/157/262/263/476/495/521/748/750、40/102/132/157/262/263/322/521/748/750/820、40/102/132/157/262/263/386/521/748/750/849、21/40/85/102/132/157/262/263/322/521/748/820、20/40/85/102/132/157/262/263/476/521/748/750、20/40/85/102/132/157/262/263/495/521/748/849、20/40/85/102/132/157/262/263/521/566/748/820、40/52/102/132/157/262/263/322/498/521/748/750、21/40/102/132/157/262/263/322/386/521/748/820、40/52/102/132/157/262/263/386/495/521/748/820、20/40/102/132/157/262/263/322/476/521/748/820、40/85/102/132/157/262/263/386/495/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/476/495/521/748/820、40/85/102/132/157/262/263/322/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/322/386/476/495/521/748、21/40/102/132/157/262/263/322/495/521/748/750/820、20/21/40/85/102/132/157/262/263/322/476/495/521/748、20/40/102/132/157/262/263/299/322/386/476/495/521/748、40/52/102/132/157/262/263/476/495/521/566/748/750/849、20/40/85/102/132/157/262/200/263/322/476/495/521/748/750或21/40/85/102/132/157/262/263/322/386/495/521/748/820/849，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

16.根据权利要求2-4中任一项所述的工程化dna聚合酶，其中所述多肽序列在以下氨基酸位置处包含至少一个取代或取代集：40/85/102/132/157/262/263/299/386/521/566/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/476/521/748/750/820/849、21/40/85/102/132/157/262/263/322/476/495/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/177/263/521/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/495/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/476/521/748/750/820、20/40/52/85/102/132/157/262/263/299/521/748/750、52/40/85/102/132/157/262/263/299/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/322/521/748/750/820、20/40/85/102/132/157/262/263/521/748/750/820、20/40/85/102/132/157/262/263/299/386/476/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/386/476/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/476/495/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/386/476/495/521/748/750、20/21/40/85/102/132/157/262/263/299/322/386/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/322/386/495/521/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/299/322/476/495/521/748/750/820、21/40/85/102/132/157/262/263/299/386/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/299/476/521/748/750/820、20/21/40/85/102/132/157/262/263/521/748/750、21/40/102/132/157/262/263/521/748、40/85/102/132/157/262/263/521/705/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/386/476/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/521/748/750/820、21/40/85/102/132/157/262/263/299/322/521/748/750、20/40/85/102/132/157/262/263/322/386/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/299/521/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/299/386/476/521/748/750、40/85/102/109/132/157/262/263/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/322/495/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/491/521/748/750、40/52/85/102/132/157/262/263/521/748/750/820、21/40/85/102/132/157/262/263/386/521/748/750/820、20/21/40/85/102/132/157/262/263/495/521/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/299/322/495/521/566/748/750/820、20/21/40/85/102/132/157/262/263/299/495/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/521/748/750/756、40/85/102/132/157/262/263/386/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/495/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/511/521/748/750、21/40/52/85/102/132/157/262/263/242/386/495/521/748/750/820、40/85/102/132/157/262/263/299/476/495/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/521/706/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/299/386/476/495/521/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/299/322/495/521/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/476/521/748/750/849、40/85/102/132/157/262/263/299/322/476/521/748/750/820、21/40/52/85/102/132/157/262/263/299/322/521/748/750/820、20/21/40/85/102/132/157/262/263/521/566/748/750、20/40/52//85/102/132/157/262/263/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/322/386/495/521/566/748/750/820、21/40/85/102/132/157/262/263/299/521/748/750、21/40/85/102/132/157/262/263/299/386/521/748/750、40/85/102/132/157/262/263/386/521/748/750/849、40/52/85/102/132/157/262/263/476/521/748/750、40/52/85/102/132/157/262/263/299/322/386/495/521/748/750或40/85/102/132/157/262/263/440/521/748/750，其中所述氨基酸位置是相对于seq id no:2的参考序列。

17.根据权利要求1所述的工程化dna聚合酶，包含与对应于seq id no:8、332、462或606的残基12至850的参考序列或与对应于...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里卡·贝穆德斯，大卫·艾尔加特，尼基·D·克鲁斯，马修·G·米勒，韦丝娜·米切尔，约瓦娜·纳佐尔，南希塔·苏布兰马尼安，
申请(专利权)人：科德克希思公司，
类型：发明
国别省市：