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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外检测用试剂,尤其涉及一种唾液酸苷酶底物,包含该唾液酸苷酶底物的试剂盒,及采用该唾液酸苷酶底物在制备检测唾液酸苷酶活性试剂方面的应用。
技术介绍
1、细菌性阴道病(简称bv)是成年妇女产生异常阴道分泌物的主要原因之一。在正常情况下阴道内的菌群由合成过氧化氢的乳酸杆菌占主导,但在bv病人中,过度生长的加特纳菌(也称嗜血杆菌)、人形支原体,以及拟杆菌属和普雷奥菌属等厌氧菌群占优势,其结果是人体的正常代谢受到干扰(hill,g.b.the microbiology of bacterial vaginosis.am.j.obstet.gynecol.1993,169:450)。如不及时治疗,bv还会引起子宫内膜炎、盆腔炎、性病,hiv感染及其他妇科疾病(a.faro,s.;et al.vaginal flora and pelvicinflammatory disease.am.j.obstet.gynecol.1993,169:47;b.taha,t.e.;et al.hivinfection and disturbances of vaginal flora during pregnancy.j.acquiredimm.def.syndr.1999,20:52)。然而如能及时使用对症的抗菌素,bv完全可以治愈,因此快速准确地诊断是治疗bv,防止发生其他妇科综合症的关键。
2、bv诊断过去通常采取amsel金标法和nugent评分法(nugent,r.p.;etal.reliability of diag
3、许多研究结果表明一些细菌产生的酶,特别是唾液酸苷酶,是bv发病的重要指标(briselden,a.n.;et al.sialidases(neuraminidases)in bacterial vaginosis andbacterial vaginosis-associated microfluora.j.clin.microbiol.1992,30:663)。唾液酸苷酶可切断α-酮糖键而使唾液酸残基从糖蛋白和糖脂中水解下来(lee y,youn hs,leejg,an jy,park kr,kang jy,ryu yb,jin ms,park kh,eom sh.“crystal structure ofthe catalytic domain of clostridium perfringens neuraminidase in complex witha non-carbohydrate-based inhibitor,2-(cyclohexylamino)ethanesulfonic acid”,biochem biophys res commun.2017,486(2):470-475)。阴道分泌物中的唾液酸苷酶水平升高与bv的发病密切相关。不少研究团队报道了根据唾液酸苷酶活性来诊断bv具有灵敏度高、特异性高、以及正、负相关度高的优点。测定唾液酸苷酶的活性来达到快速、准确地诊断bv已被本领域科研机构及医院普遍接受。
4、测定唾液酸苷酶活性,可使用唾液酸苷酶底物。唾液酸苷酶底物在酶促水解反应后会产生荧光或颜色,因此根据酶促水解反应后的荧光强度、颜色强度、以及荧光和颜色的产生速度,就可以测定唾液酸苷酶的活性(a.fujii i,iwabuchi y,teshima t,shiba t,kikuchi m.“x-neu5ac:a novel substrate for chromogenic assay of neuraminidaseactivity in bacterial expression systems”,bioorganic&medicinal chemistry,1993,1(2):147-9;b.johnson sc,saeed a,luo m.us6512100b1)。
5、bv蓝(bvblue)试剂盒,最早由格里福斯诊断试剂公司(gryphus diagnostic,llc)于1999年根据上述原理研制成功并投入市场的新型生化诊断试剂。试剂盒中含有一种唾液酸苷酶底物,称作ibx-4041(a.osom bvblue kit使用说明书,美国sekisui diagnostics,llc;b.bradshaw c,morton a,garland s,horvath l,kuzevska i,fairley c.“evaluation of a point-of-care test,bvblue,and clinical and laboratorycriteria for diagnosis of bacterial vaginosis”,j.clinical microbiology,2005,43(3):1304-8.),酶促水解后在碱性条件下会生成蓝色,用这种底物制成的bv蓝试剂盒是临床上诊断细菌性阴道病的可靠工具,因而近年来已在世界各国普遍使用(myziuk l,romanowski b,johnson s.c.“bvblue test for diagnosis of bacterial vaginosis”,j.clinical microbiology,2003,41,5,1925)。
6、然而,bv蓝是一种手工操作的试剂盒,检测耗时较长,样本用量较大,而且操作较繁琐。随着临床诊断自动化的发展,实行bv检测自动化已成趋势。自动化诊断bv的实质是使用自动化分析仪同时测定上述多项指标,即,在检测唾液酸苷酶的同时,测定过氧化氢、脯氨酸氨基肽酶、白细胞酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、ph值等,由于自动化白带常规分析仪检测项目多,采样量相对固定,单个项目可用样本量减少,因而灵敏度的要求比手工试剂盒更高。因此,对于唾液酸苷酶这项关键指标,自动化测定方法不仅要求比手工bv蓝法灵敏显著提高而且要求保持其良好特异性。为达此目的,自动化检测所用底物必须比bv蓝试剂盒中的ibx-4041更加快速地被唾液酸苷酶水解而产生特殊的颜色,比本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.式(II)化合物或其盐:
2.权利要求1所述的式(II)化合物或其盐在制备检测唾液酸苷酶试剂盒方面的应用。
3.权利要求1所述的式(II)化合物或其盐在制备检测细菌性阴道病试剂方面的应用。
4.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括干化学反应装置、稀释液和显色剂;所述干化学反应装置为含有多个干化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入唾液酸苷酶底物试剂垫,所述唾液酸苷酶底物试剂垫是用含有权利要求1所述的式(II)化合物或其盐的试剂浸泡以后,经过减压干燥而制成。
5.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括干化学反应装置、稀释液和显色剂,所述干化学反应装置为含有多个干化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入含有权利要求1所述的式(II)化合物或其盐的试剂,经过减压干燥而制成。
6.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括化学反应装置、稀释液和显色剂,所述化学反应装置为含有多个化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入含有权利要求1所述的式(II)化合物或其盐的试剂。
7.式(II
8.如权利要求7所述的式(III)化合物或其盐,式(III)的结构式为:
9.权利要求7-8任一项所述的式(III)化合物或其盐在制备检测唾液酸苷酶试剂盒方面的应用。
10.权利要求7-8任一项所述的式(III)化合物或其盐在制备检测细菌性阴道病试剂方面的应用。
11.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括干化学反应装置、稀释液和显色剂;所述干化学反应装置为含有多个干化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入唾液酸苷酶底物试剂垫,所述唾液酸苷酶底物试剂垫为用含有权利要求7-8任一项所述的式(III)化合物或其盐的试剂中浸泡以后,经过减压干燥而制成。
12.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括干化学反应装置、稀释液和显色剂,所述干化学反应装置为含有多个干化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入含有权利要求7-8任一项所述的式(III)化合物或其盐的试剂,经过减压干燥而制成。
13.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括化学反应装置、稀释液和显色剂,所述化学反应装置为含有多个化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入含有权利要求7-8任一项所述的式(III)化合物或其盐的试剂。
14.中间体式(I)化合物或其盐:
15.如权利要求14所述的中间体式(I)化合物或其盐,其中式(I)选择:
...【技术特征摘要】
1.式(ii)化合物或其盐:
2.权利要求1所述的式(ii)化合物或其盐在制备检测唾液酸苷酶试剂盒方面的应用。
3.权利要求1所述的式(ii)化合物或其盐在制备检测细菌性阴道病试剂方面的应用。
4.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括干化学反应装置、稀释液和显色剂;所述干化学反应装置为含有多个干化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入唾液酸苷酶底物试剂垫,所述唾液酸苷酶底物试剂垫是用含有权利要求1所述的式(ii)化合物或其盐的试剂浸泡以后,经过减压干燥而制成。
5.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括干化学反应装置、稀释液和显色剂,所述干化学反应装置为含有多个干化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入含有权利要求1所述的式(ii)化合物或其盐的试剂,经过减压干燥而制成。
6.一种细菌性阴道病测定试剂盒,其特征在于,包括化学反应装置、稀释液和显色剂,所述化学反应装置为含有多个化学反应盲孔的反应装置,其中至少一个盲孔内放入含有权利要求1所述的式(ii)化合物或其盐的试剂。
7.式(iii)化合物或其盐:
8.如权利要求7所述的式(iii)化合物或其盐,式(iii)的结构式为:
9.权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员:万士林,梁锋,何芳,李彩凤,
申请(专利权)人:合肥华今生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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