【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于湖羊分子标记辅助育种，具体涉及分子标记g.15255 t＞c在湖羊分子标记辅助育种中的应用。
技术介绍
1、湖羊是我国珍稀的绵羊品种，原产于太湖流，所产羔皮花纹美观而著称，是我国特有的羔皮用绵羊品种，也是目前世界上少有的白色羔皮品种，在国际市场上享有很高的声誉，有“软宝石”之称。湖羊肉质鲜美湖羊体型大产肉量高，且肉质鲜美，营养丰富。湖羊肉与其他肉类相比,具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇的优点,多汁、膻味小。但湖羊产在肉性能方面与杜泊羊、德国美利奴羊等国外肉用绵羊品种还存在较大差异。因此，非常有必要对湖羊生长性能进行选育，提高湖羊的产肉性能。
2、本申请人已有授权中国专利技术专利(公开号：cn109251986a、cn109182553a、cn109251987a、cn109251985a、cn109182554a和cn109055579a)公开了利用gwas技术筛选的湖羊体尺性状候选功能基因及snps，并通过snps的群体验证，获得了可用于分子标记辅助育种的snps，可用于湖羊肉用性状分子标记辅助育种和湖羊肉用系核心群个体的早期选育。
3、另外，本申请人还申请了中国专利技术专利申请(cn114381531a、cn114438232a、cn114574596a、cn114480676a)公开了在arhgap24基因内含子1部分区内有15个snps,其中与湖羊体重、体尺性状显著相关的snps位点有4个：1.g.43756g＞a与湖羊体长显著相关，aa型个体的体长显著高于ga型个体(p＜0.05)，g
4、钙蛋白酶(calpains,capns)家族是一类钙依赖的半胱氨酸蛋白酶。根据钙蛋白酶家族内成员c末端结构域的差异，钙蛋白酶分为两类，经典(典型)和非经典(非典型)。前期，本申请人还申请了中国专利技术专利申请(cn116064847a、cn116479144a、cn116121403a)公开了以capn3基因为候选基因，采用pcr扩增，产物直接测序以及序列分析技术，探讨试验湖羊群体的遗传结构，遗传多样性，并将snps与湖羊的生长性状进行关联分析，以期筛选出显著影响湖羊生长性状的snps，并与其生长性状进行关联分析，以期为湖羊的选育提供有效的分子标记，为今后绵羊育种提供理论依据。
5、capn6是非经典钙蛋白酶的成员之一，在胚胎发生过程中表达，其活性在出生后迅速下调。有文献(tonami k,kurihara y,aburatani h et al.calpain 6is involved inmicrotubule stabilization and cytoskeletal organization.mol cell biol 2007；27:2548-2561.)表明capn6是一种在胚胎组织中表达的微管稳定蛋白，可能参与微管动力学和细胞骨架组织的调节，并通过抑制细胞凋亡和促进血管生成来支持肿瘤发生。有文献(hong jm,teitelbaum sl,kim th et al.calpain-6,a target molecule ofglucocorticoids,regulates osteoclastic bone resorption via cytoskeletalorganization and microtubule acetylation.j bone miner res 2011；26:657-665.)表明capn6是一种非蛋白水解酶，具有微管结合和稳定活性的钙依赖性细胞内非溶酶体蛋白酶，可促进破骨细胞中的细胞骨架结构和微管稳定性。文献(tonami k,kurihara y,arimas et al.calpain-6,a microtubule-stabilizing protein,regulates rac1 activityand cell motility through interaction with gef-h1.j cell sci 2011；124:1214-1223.)表明capn6是一种微管稳定蛋白，它通过与gef-h1相互作用来调节rac1的活性和细胞运动。目前有研究(cao y,song x,shan h et al.genome-wide association study ofbody weights in hu sheep and population verification of related single-nucleotide polymorphisms.front genet 2020；11:588.)表明capn6基因与湖羊的初生重显著相关，且断奶羊与六月龄羊的背最长肌与股二头肌mrna的表达差异显著。但未有capn6基因snp与湖羊的六月龄到周岁日增重和周岁重相关的公开报道。
技术实现思路
1、为了研究钙蛋白酶6(calpain6)基因多态性与湖羊生长性状相关性，获得与生长性状相关的遗传标记。本专利技术以湖羊为研究对象，采用pcr扩增，产物直接测序，序列分析的方法，分析capn6基因多态性，并综合分析多态性位点的不同基因型与不同生长性状间的相关性。
2、本专利技术的一个目的是提供一种检测与湖羊的六月龄到周岁日增重和周岁重显著相关的分子标记的试剂，该分子标记定位为g.15255 t＞c，位于seq id no:1的第348位点，其为t或c；其中：cc基因型个体的六月龄到周岁日增重与周岁重显著高于tc与tt基因型。
3、作为优选，该试剂包括引物对。再优选，所述引物对的核苷酸序列如seq id no:2和seq id no:3所示。
4、进一步，本专利技术的一个目的是提供一种扩增产物，该扩增产物的采用所述的试剂扩增获得，核苷酸序列如seq id no:1所示。
5、进一步，本专利技术的一个目的是提供一种包含所述试剂的试剂盒。
6、进一步，本专利技术的一个目的是提供所述的试剂或所述的扩增产物或所述的试剂盒在筛选湖羊六月龄到周岁日增重和周岁重辅助育种中的应用。
7、进一步，本专利技术的一个目的是提供一种筛选六月龄到周岁日增重和周岁重性状的方法，该方法包括如下步骤：提取湖羊基因组dna，利用引物对进行pcr扩增，对扩增产物中的分子标记进行检测，从而筛选湖羊体重性状；分本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测与湖羊的六月龄到周岁日增重和周岁重显著相关的分子标记的试剂，其特征在于，该分子标记定位为g.15255 T＞C，位于SEQ ID NO:1的第348位点，其为T或C；其中：CC基因型个体的六月龄到周岁日增重与周岁重显著高于TC与TT基因型。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，该试剂包括引物对。
3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQID NO:3所示。
4.一种扩增产物，该扩增产物的采用权利要求3所述的试剂扩增获得，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
5.一种包含权利要求1-3任意一项权利要求所述试剂的试剂盒。
6.权利要求1-3任意一项权利要求所述的试剂或权利要求4所述的扩增产物或权利要求5所述的试剂盒在筛选湖羊六月龄到周岁日增重和周岁重辅助育种中的应用。
7.一种筛选六月龄到周岁日增重和周岁重性状的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：提取湖羊基因组DNA，利用引物对进行PCR扩增，对扩增产物中的分子标记进行检测，从而筛选湖羊
8.权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
9.权利要求7所述的方法，其特征在于， PCR 反应体系为25 μL，KOD OneTM PCRMaster Mix12.5 μL，上下游引物各0.2 μL，ddH2O 11.1 μL。
10.权利要求8或9所述的方法，其特征在于，PCR反应程序为：98 ℃变性10 s， 59°C退火30 s，68 ℃延伸30 s，进行34 个循环，PCR 结束后4 ℃保存。
...【技术特征摘要】
1.一种检测与湖羊的六月龄到周岁日增重和周岁重显著相关的分子标记的试剂，其特征在于，该分子标记定位为g.15255 t＞c，位于seq id no:1的第348位点，其为t或c；其中：cc基因型个体的六月龄到周岁日增重与周岁重显著高于tc与tt基因型。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，该试剂包括引物对。
3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，引物对的核苷酸序列如seq id no:2和seqid no:3所示。
4.一种扩增产物，该扩增产物的采用权利要求3所述的试剂扩增获得，核苷酸序列如seq id no:1所示。
5.一种包含权利要求1-3任意一项权利要求所述试剂的试剂盒。
6.权利要求1-3任意一项权利要求所述的试剂或权利要求4所述的扩增产物或权利要求5所述的试剂盒在筛选湖羊六月龄到周岁日增重和周岁重辅助育种中的应用。
7.一种筛选六月龄到周岁...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭良勇，李玉峰，彭彩娥，高宁，姜俊芳，
申请(专利权)人：湖州市农业科学研究院湖州市农业科技发展中心，
类型：发明
国别省市：
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