【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及材料领域，具体涉及修复牙槽突裂的水凝胶材料，还涉及该材料在修复兔唇腭裂材料中的应用。
技术介绍
1、唇腭裂(cleft lip and palate，clp)是最常见的一种先天的唇畸形，多患于新生婴儿。是由于胚胎时期向腭部融合的突起发育受阻，腭胚突上担运动迟缓，腭间充质细胞和基质发育不足，造成口腔与鼻腔的相通，导致腭部中央形成裂隙。根据唇腭裂的发生程度，唇腭裂的修复主要分为唇裂修复、腭裂修复，以及牙槽突裂修复。近百年来，腭裂的整复治疗主要是采用手术的方法，利用裂隙邻近的黏骨膜组织瓣封闭裂隙，达到隔离口鼻腔的目的。但是，有时难以克服手术后创口裂开和瘢痕影响腭骨的生长发育等并发症。为促进唇腭裂术后组织的修复重建，预防术后上颌骨生长发育所致的继发畸形，在临床治疗中主要采用自体骨移植，骨诱导活性生物膜，口腔粘膜以及具有自分泌干扰素α功能的组织工程化口腔粘膜移植等方法进行干预。由此可见，术后对修复组织施以组织工程材料以促进伤口愈合与组织重塑对于唇腭裂的治疗效果十分重要，具有巨大的应用潜力和市场前景。tgf-β1的成熟肽含有122个氨基酸，约12.5kd，是一种在组织愈合过程各个阶段发挥重要功能的细胞因子。tgf-β1也是一种促纤维化细胞因子，是在伤口愈合过程中必需的介质，能刺激成纤维细胞的合成和细胞外基质的收缩，加速伤口的愈合。同时，tgf-β1作为炎症过程中的强免疫调节剂，帮助召集巨噬细胞、嗜中性粒细胞等炎性细胞，控制炎性反应的平衡。因此，推测tgf-β1在唇腭裂修复中将发挥重要作用。然而，tgf-β1的来源少，成本高，安
2、蚕的丝腺是合成、分泌蚕丝蛋白的器官，是整个蚕丝业的生物学基础。经过数千年的人工驯化，家蚕的丝腺具备了超强的蛋白质合成与分泌能力，一头体重5g左右家蚕能合成分泌约0.5g蚕丝蛋白，为目前已知昆虫之最，这一特征使其成为理想的生物反应器模型，备受各国研究人员关注并竞相开发利用。近年来，国内外研究人员建立了基于piggybac转座子的蚕丝素表达体系和丝胶表达体系，并先后对数十种外源蛋白进行了表达研究。其中，利用丝素表达体系融合表达了：egfp(shimizu et al.2007；zhao et al.2010)，猫干扰素(kurihara etal.2007)，蜘蛛丝牵引蛋白(zhu et al.2010)，人ⅲ型胶原蛋白的部分肽段(tomita et al.2003；adachi et al.2006；yanagisawa et al.,2007)，fgf2(hino etal.2006)，以及rfp(royer et al.2005)等；利用丝胶体系重组表达了：egfp(tomita etal.2007)、鼠单克隆抗体(iizuka et al.2009)，人胶原蛋白α链基因(adachi etal.2010)，gm-csf受体α(urano et al.2010)，fgf1(feng wang et al.,2015)，pdgf-bb(wenjing chen et al.,2018)，lactoferrin(sheng xu et al.,2019)，ctgf(yuanchengwang et al.,2020)，人超氧化物歧化酶3(feng wang et al.,2023)，以及人血清白蛋白(ogawa et al.2007；huanhuan tan et al.,2023)等。综上表明，利用家蚕丝腺作为生物反应器，生产具有高附加值的外源蛋白，不仅具有广阔的市场前景，同时也能打破家蚕只能作为传统产业的壁垒，为家蚕新型产业的开发提供基础技术体系保障。
3、与此同时，蚕丝本身也是一种力学性能和生物相容性优异的生物基材料。首先，蚕丝中的丝素蛋白较其他天然纤维机械特性好，可加工成膜支架或其他形式，如电纺丝，电纺膜，凝胶，生物膜，微球以及支架等，表面易化学共价修饰粘附位点和细胞因子，可被生物降解，且其降解速率可控，降解产物不仅对周围组织无毒副作用，而且对周围组织有营养和修复作用，可模拟细胞外基质，为细胞黏附、增殖以及分化成组织提供良好的环境和支撑。其次，蚕丝中丝胶蛋白因其亲水性、生物相容性和生物降解性，近来被认为是一种有潜力的生物应用生物材料，可以被制成与组织工程和再生有关的特性的水凝胶，薄膜或3d支架。目前丝胶材料的医学应用主要有伤口敷料，药物输送，修复神经损伤。因此，通过家蚕丝腺生物合成技术，对蚕丝进行定向设计和功能化遗传改良，将进一步拓展蚕丝以及合成的各类外源蛋白在组织医学领域的应用。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种修复牙槽突裂的水凝胶材料；本专利技术的目的之二在于提供所述水凝胶材料在制备修复兔唇腭裂材料中的应用；本专利技术的目的之三在于提供所述水凝胶材料在制备骨损伤修复材料中的应用。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1、修复牙槽突裂的水凝胶材料，所述水凝胶材料由etgf-β1转基因蚕丝在碱性条件下提取含有etgf-β1的丝胶蛋白溶液，然后离心收集蛋白上清液溶液，然后低温诱导形成凝胶，透析去除碱性离子，得到修复牙槽突裂的水凝胶材料。
4、本专利技术优选的，所述碱性条件是在含4-8m尿素，0.5-5mm dtt，20-200mm tris-cl，ph6.8-7.3的条件下。
5、本专利技术优选的，所述提取的条件是在60℃-80℃水浴下提取30-60min。
6、本专利技术优选的，所述离心是在8000-12000rpm条件下离心。
7、本专利技术优选的，所述低温诱导是在温度为2℃-16℃下诱导。
8、本专利技术优选的，所述透析是在2℃-16℃环境透析2-3天，期间置换水6-9次。
9、本专利技术优选的，所述etgf-β1转基因蚕丝由etgf-β1转基因家蚕结茧获得。
10、本专利技术优选的，所述etgf-β1转基因家蚕为在家蚕中转入etgf-β1基因，所述etgf-β1基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
11、2、所述水凝胶材料在制备修复兔唇腭裂材料中的应用。
12、3、所述水凝胶材料在制备骨损伤修复材料中的应用。
13、本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了修复牙槽突裂的水凝胶材料，该材料由种质创制生物合成tgf-β1蚕丝，再利用获得的tgf-β1功能性蚕丝，开发tgf-β1丝胶水凝胶材料。结果发现开发的tgf-β1丝胶水凝胶材料可用于修复兔唇腭裂，并对其促进唇腭裂损伤的治疗效果。
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1.修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述水凝胶材料由eTGF-β1转基因蚕丝在碱性条件下提取含有eTGF-β1的丝胶蛋白溶液，然后离心收集蛋白上清液溶液，然后低温诱导形成凝胶，透析去除碱性离子，得到修复牙槽突裂的水凝胶材料。
2.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述碱性条件是在含4-8M尿素，0.5-5mM DTT，20-200mM Tris-cl，pH 6.8-7.3的条件下。
3.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述提取的条件是在60℃-80℃水浴下提取30-60min。
4.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述离心是在8000-12000rpm条件下离心。
5.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述低温诱导是在温度为2℃-16℃下诱导。
6.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述透析是在2℃-16℃环境透析2-3天，期间置换水6-9次。
7.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料
8.根据权利要求7所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述eTGF-β1转基因家蚕为在家蚕中转入eTGF-β1基因，所述eTGF-β1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
9.权利要求1～8任一项所述水凝胶材料在制备修复兔唇腭裂材料中的应用。
10.权利要求1～8任一项所述水凝胶材料在制备骨损伤修复材料中的应用。
...【技术特征摘要】
1.修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述水凝胶材料由etgf-β1转基因蚕丝在碱性条件下提取含有etgf-β1的丝胶蛋白溶液，然后离心收集蛋白上清液溶液，然后低温诱导形成凝胶，透析去除碱性离子，得到修复牙槽突裂的水凝胶材料。
2.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述碱性条件是在含4-8m尿素，0.5-5mm dtt，20-200mm tris-cl，ph 6.8-7.3的条件下。
3.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述提取的条件是在60℃-80℃水浴下提取30-60min。
4.根据权利要求1所述修复牙槽突裂的水凝胶材料，其特征在于：所述离心是在8000-12000rpm条件下离心。
5.根据权利要求1所述修...
【专利技术属性】
技术研发人员：王峰，夏庆友，赵萍，
申请(专利权)人：西部重庆科学城种质创制大科学中心，
类型：发明
国别省市：
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