【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及基因编辑家蚕bmrpa2在制备丝胶茧品系中的应用。
技术介绍
1、蚕茧主要由丝素和丝胶构成，丝胶占比约20%-30%，丝素占比约70%-80%。丝胶作为一种天然材料，具有优良的性能，如生物相容性、可降解性和独特的生物学特性。通过在家蚕丝胶中特异性表达高附加值的外援蛋白，应用于组织修复、再生医学、手术粘合等多个生物医学领域。
2、蚕丝蛋白主要是由内层丝素蛋白和外层丝胶蛋白构成。为了去除丝素获取丝胶蛋白，缫丝行业的传统做法是，先通过碱法对蚕丝进行脱胶处理，然后通过酸析法回收丝胶。该过程不但程序复杂、对设备的要求高，而且存在回收效率低、回收产物质量差等问题。创制生产丝胶同时不生产丝素（即丝胶茧）的新型家蚕素材，可以有效解决以上问题，将为丝胶蛋白及丝胶中表达外源蛋白的提取和纯化带来革命性变化。复制蛋白a2（rpa2）是rpa的一个重要组成部分，在维持基因组稳定性和细胞正常生理功能中发挥重要作用，我们通过基因编辑技术，靶向rpa2制备生产丝胶茧的家蚕品系，可为开发新型生物医学材料提供理论基础和技术支持。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种敲除bmrpa2基因在制备丝胶茧品系中的应用；本专利技术的目的之二在于提供一种制备丝胶茧品系的方法。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1、敲除bmrpa2基因在制备丝胶茧品系中的应用，所述bmrpa2基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。>
4、本专利技术优选的，所述敲除bmrpa2基因的方法是使用crispr/cas9技术。
5、本专利技术优选的，所述敲除bmrpa2基因的方法是构建bmrpa2的sgrna转基因载体，得到的sgrna品系分别与中部丝腺特异性表达cas9的家蚕品系msg-cas9或后部丝腺特异性表达cas9品系psg-cas9杂交，筛选双光敲除个体。
6、本专利技术优选的，所述bmrpa2的sgrna转基因载体由以下方法制得将seq id no.2和seq id no.3所示序列退火后连入sgrna表达载体。
7、2、一种制备丝胶茧品系的方法，在家蚕后部丝腺特异编辑bmrpa2基因，获得的家蚕品系为丝胶茧品系。
8、本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了敲除bmrpa2基因在制备丝胶茧品系中的应用，针对传统丝胶生产中的低效、高成本、品质不稳等老大难问题。通过基因编辑bmrpa2，创制只产生丝胶蚕茧的家蚕品系，该蚕茧不需要用繁琐的方法去除丝素蛋白，可以直接用于丝胶蛋白的提取纯化。通过本专利技术的实施，我们可为丝胶蛋白的提取纯化带来革命性变化，不但可以简化生产工序、降低成本、显著提高生产效率，而且能确保产品质量的稳定性。后续在该品系中增量表达高附加值外源蛋白，也可极大简化纯化过程。这一突破将有助于推动丝胶蛋白在化妆品、生物、医学等多个领域的应用。
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1.基因编辑家蚕BmRPA2在制备丝胶茧品系中的应用，其特征在于：所述BmRPA2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述对BmRPA2基因编辑的方法是使用CRISPR/Cas9技术。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述对BmRPA2基因编辑的方法是构建BmRPA2的sgRNA转基因载体，得到的sgRNA品系与后部丝腺特异性表达Cas9品系PSG-Cas9杂交，筛选双光敲除个体。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述BmRPA2的sgRNA转基因载体由以下方法制得将SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示序列退火后连入sgRNA表达载体。
5.一种制备丝胶茧品系的方法，其特征在于：在家蚕后部丝腺特异编辑BmRPA2基因，获得的家蚕品系为丝胶茧品系。
【技术特征摘要】
1.基因编辑家蚕bmrpa2在制备丝胶茧品系中的应用，其特征在于：所述bmrpa2基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述对bmrpa2基因编辑的方法是使用crispr/cas9技术。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述对bmrpa2基因编辑的方法是构建bmrpa2的sgrna转基因载体，得到的sgrna...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋亮，鞠聂旺，夏庆友，郭慧珍，
申请(专利权)人：西部重庆科学城种质创制大科学中心，
类型：发明
国别省市：
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