一种提高甘氨酰胺核苷酸合成酶表达水平的启动子及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种提高甘氨酰胺核苷酸合成酶表达水平的启动子及其应用，属于合成生物学领域。本发明专利技术以Corynebacterium stationis ATCC 6872中甘氨酰胺核苷酸合成酶基因的原始启动子PpurD为模板构建启动子文库，以sfGFP为报告蛋白，在sfGFP前通过GGGGS linker加上甘氨酰胺核苷酸合成酶基因5’端180bp的序列，筛选出显著增加甘氨酰胺核苷酸合成酶基因的表达的启动子PpurDmut，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。与原始启动子PpurD和已知强效启动子Psod相比，本发明专利技术提供的启动子PpurDmut能够强化甘氨酰胺核苷酸合成酶的转录水平，从而促进甘氨酰胺核苷酸合成酶在停滞棒杆菌的表达，进而可提高核苷酸类产品的代谢通量，此外，该启动子还能提高异源基因在停滞棒杆菌中的表达，可作为通用启动子，具有较强的工业应用性。

【技术实现步骤摘要】

本公开属于合成生物学领域，涉及一种启动子及其应用，具体涉及一种用于在停滞棒杆菌中提高甘氨酰胺核苷酸合成酶基因转录水平的启动子及其应用。

技术介绍

1、核苷酸(nucleotide)是dna和rna合成的前体物质，在细胞的构成、能量的产生与消耗、机体代谢、功能调节等方面都发挥着举足轻重的作用；由于核苷酸的许多独特、重要的性质及功能，使得核苷酸的应用范围很广，广泛用于食品、农业、医疗、动物饲料和精细化工等行业。微生物菌株发酵生产核苷酸的途径是利用磷酸核糖、氨基酸、一碳单位等简单物质为原料合成核苷酸的过程，即核苷酸的从头合成途径，该途径包括imp(次黄嘌呤核苷酸)的合成；由imp生成amp(腺嘌呤核苷酸)和gmp(鸟嘌呤核苷酸)；一磷酸核苷磷酸化生成二磷酸核苷和三磷酸核苷。参阅图1，图1为核苷酸从头合成途径中imp的合成途径，包括11步反应：(1)5-磷酸核糖的活化；(2)获得嘌呤的n9原子；(3)获得嘌呤c4、c5和n7原子；(4)获得嘌呤c8原子；(5)获得嘌呤的n3原子；(6)嘌呤咪唑环的形成；(7)获得嘌呤c6原子；(8)获得n1原子；(9)去除延胡索酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种启动子，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种基因表达盒，其特征在于，包含如权利要求1所述启动子，以及与所述启动子可操作地连接的目的基因。

3.一种重组载体，其特征在于，包含如权利要求1所述启动子，或如权利要求2所述基因表达盒。

4.一种重组菌株，其特征在于，包含如权利要求2所述基因表达盒，或如权利要求3所述重组载体。

5.如权利要求4所述重组菌株，其特征在于，所述重组菌株的宿主细胞为停滞棒杆菌。

6.如权利要求5所述重组菌株，其特征在于，所述停滞棒杆菌为停滞棒杆菌ATCC 6872或...

【技术特征摘要】

1.一种启动子，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列如seq id no:1所示。

2.一种基因表达盒，其特征在于，包含如权利要求1所述启动子，以及与所述启动子可操作地连接的目的基因。

3.一种重组载体，其特征在于，包含如权利要求1所述启动子，或如权利要求2所述基因表达盒。

4.一种重组菌株，其特征在于，包含如权利要求2所述基因表达盒，或如权利要求3所述重组载体。

5.如权利要求4所述重组菌株，其特征在于，所述重组菌株的宿主细胞为停滞棒杆菌。

6.如权利要求5所述重组菌株...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑穗平，欧阳智林，吴琳，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：