【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，涉及一种募集骨髓间充质干细胞的特异性肽、编码基因及应用。
技术介绍
1、大段骨缺损由于难以自愈和治疗，一直是困扰患者和临床医生的难题。骨组织工程被认为是治疗骨缺损最有前景的治疗方式之一。其中间充质干细胞(mesenchymal stemcells,mscs)作为骨组织修复中的重要角色，对其增殖、迁移和成骨分化进行调控一直是以mscs为基础的骨组织工程研究的重点。但单纯将mscs作为外源种子细胞植入组织工程支架存在着诸如来源限制、植入效率低、植入后干细胞流失严重等问题，故越来越多的研究开始转向通过负载生化因子来主动募集内源性mscs。目前已有相关研究表明，一些趋化因子如白介素8、基质细胞衍生因子1等能够作用于mscs细胞表面相关受体从而调控mscs定向迁移。然而，这些趋化因子缺乏对mscs的特异性，在募集mscs的同时，也可能造成炎性细胞的聚集。同时，成本高昂、易失活等特点也限制了趋化因子在骨组织工程中的使用。受趋化因子与细胞表面特异性受体相互作用机制的启发，利用具有相似功能的多肽可实现募集mscs的同时可以避免生长因子成本高、容易失活的问题。此外，通过对肽序列的筛选，可寻找到能特异性作用于mscs的多肽，有望实现对mscs的特异性募集。
2、噬菌体展示文库淘选技术是一种高通量筛选技术，可以将大量外源编码基因序列插入噬菌体衣壳蛋白基因中，使得目标多肽或蛋白展示在噬菌体颗粒表面，形成噬菌体展示文库。通过对靶标物质多轮淘选，可以在靶标信息未知的情况下得到与靶标物质高亲和力结合的配体。发展至今，噬菌体
技术实现思路
1、为了解决mscs在骨缺损部位的特异性募集问题，本专利技术提供了一种对mscs具有高亲和力和特异性结合能力的多肽配体，可以有效促进mscs的定向迁移，具备替代趋化因子特异性募集mscs的可行性，具体氨基酸序列为：levfplw。
2、本专利技术还提供了一种募集mscs的特异性肽的编码基因及其应用，具体核苷酸序列为：ctggaggtttttccgttgtgg。
3、进一步的，本专利技术所述多肽或噬菌体可负载于多种骨修复材料上，以实现对mscs的有效募集。
4、本专利技术通过以下技术方案实现：
5、首先，使用噬菌体展示七肽库对mscs进行三轮体外淘选，提取第三轮筛选后的噬菌体单克隆dna并测序，应用生物信息学分析筛选得到的多肽序列。使用酶联免疫吸附实验用于分析候选噬菌体单克隆对mscs的亲和力，进一步挑选亲和力最高的噬菌体单克隆分析对不同细胞的结合能力以验证对mscs的结合特异性。使用transwell小室迁移实验验证所挑选噬菌体单克隆及表面多肽序列对mscs的募集能力。
6、本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
7、1.本专利技术中短肽是一条全新的序列，未发现有与此多肽序列完全一致的已知蛋白质；
8、2.本专利技术中短肽对mscs具有高亲和力，对bend.3和l929细胞系结合能力弱，表现出对mscs的特异性结合能力；
9、3.本专利技术中短肽表现出对mscs的促迁移能力，可实现对mscs的特异性募集。
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1.一种募集骨髓间充质干细胞的特异性肽，其特征在于，所述短肽的氨基酸序列为LEVFPLW。
2.一种如权利要求1所述的募集骨髓间充质干细胞的特异性肽的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列为CTGGAGGTTTTTCCGTTGTGG。
3.一种募集骨髓间充质干细胞的噬菌体单克隆，其特征在于，所述噬菌体单克隆表面展示有如权利要求1所述的特异性肽。
4.一种如权利要求1所述的募集骨髓间充质干细胞的特异性肽在制备骨修复用生物材料中的应用。
5.一种如权利要求2所述的募集骨髓间充质干细胞的特异性肽的编码基因在制备骨修复用生物材料中的应用。
6.一种如权利要求3所述的募集骨髓间充质干细胞的噬菌体单克隆在制备骨修复用生物材料中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种募集骨髓间充质干细胞的特异性肽，其特征在于，所述短肽的氨基酸序列为levfplw。
2.一种如权利要求1所述的募集骨髓间充质干细胞的特异性肽的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列为ctggaggtttttccgttgtgg。
3.一种募集骨髓间充质干细胞的噬菌体单克隆，其特征在于，所述噬菌体单克隆表面展示有...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒲曦鸣，汪兴明，尹光福，黄忠兵，王丹妮，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：
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