【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物技术及生物医疗领域，涉及用于筛查高原头痛易感者的microrna分子标志物的应用和试剂盒。
技术介绍
1、高原头痛(high-altitude headache，hah)，又称高原性头痛或高海拔性头痛，根据国际头痛病学会(international headache society，ihs)定义，该病发生在长期生活于低海拔地区的平原人，在未适应新环境的情况下快速进入海拔2500m以上的高原后24小时内，表现为双侧额颞部轻度至中度的钝痛或压迫痛。地理学上把海拔高于500m，地势相对平坦或者有一定起伏的广阔地区叫高原，医学上将海拔高于2500m的地方叫高原。hah发病率较高，根据进入高原速度和海拔高度的不同，发病率高达25％至90％(luks，a.m.andp.h.hackett，medical conditions and high-altitude travel.《the new englandjournal of medicine》，2022.386(4):p.364-373)；该病危害性很大，轻者会严重影响急进高原人群的日常生活质量和降低其工作劳动能力，更严重的是，如果hah没有得到有效的控制与治疗，可进展成为具有高致死率的高原肺水肿(high-altitude pulmonary edema，hape)和高原脑水肿(high-altitude cerebraledema，hace)(pham k.，k.parikh ande.c.heinrich，hypoxia and inflammation：in
2、hah有明显的遗传倾向性及个体易感性，高原低氧的环境因素和遗传因素均可以影响hah的发生。多年以来，hah的遗传倾向性及个体易感性一直是国内外学者关注的热点，尽管已有人已经提出使用低氧相关基因epas1、ppara、vegfa及nrf2等基因单核苷酸位点对hah易感人群进行筛选，但是目前看来这些标记物在准确性和特异性等方面都不尽如人意(yu j.et al.，analysis of high-altitude syndrome and the underlying genepolymorphisms associated with acute mountain sickness after a rapid ascent tohigh-altitude.《scientific reports》，2016.6:p.38323；shen,y.et al.，associationof epas1 and ppara gene polymorphisms with high-altitude headache in chinesehan population.《biomed research international》，2020.2020：p.1593068；guo y.etal.，can acute high-altitude sickness be predicted in advance？《reviews onenvironmental health》，2022)。亟待寻找到在平原对hah的发病易感性进行预测的有效方法。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于筛查高原头痛易感者的microrna分子标志物，还提供其应用和试剂盒。本专利技术所要解决的技术问题是，找到一种或几种平原唾液microrna标志物可以筛选区别出hah易感者和健康人。通过检测人平原唾液中的相关microrna标志物的含量，通过表达量高低来区分hah易感者和健康人，进而筛查个体进入高原后hah的发病风险，避免疾病的发生而导致更多健康风险。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、1、一种microrna分子标志物表达水平的检测试剂在制备筛查高原头痛易感者试剂盒中的应用，所述microrna为hsa-mir-330-3p、hsa-mir-1-3p、hsa-mir-4712-3p、hsa-mir-4476中两种及两种以上的组合。
4、优选的，所述microrna为hsa-mir-1-3p、hsa-mir-4476和hsa-mir-4712-3p的组合。
5、优选的，所述hsa-mir-1-3p的序列如seq id no.5所示，所述hsa-mir-330-3p的序列如seq id no.6所示，所述hsa-mir-4476的序列如seq id no.7所示，所述hsa-mir-4712-3p的序列如seq id no.8所示。
6、优选的，所述样本为唾液上清或外周血。
7、优选的，所述检测试剂通过rt-pcr、实时荧光定量聚合酶链式反应、northernblotting、原位杂交、微阵列技术、芯片、高通量测序平台检测样本中所述microrna分子标志物的表达水平。
8、优选的，所述检测试剂为茎环rt引物，所述茎环rt引物的序列如seq id no.1-seqid no.4所示。
9、2、一种筛查试剂盒，所述试剂盒包括检测样本中microrna分子的表达水平的检测试剂，所述microrna为hsa-mir-330-3p、hsa-mir-1-3p、hsa-mir-4712-3p、hsa-mir-4476中两种及两种以上。
10、优选的，所述试剂盒包含能够与microrna分子结合进行rt反应的茎环rt引物。
11、优选的，所述试剂盒还包括5x reverse transcription buffer，rtase mix和rnase-free h2o。
12、优选的，所述试剂盒包含能够分别与microrna分子rt产物特异性结合并进行qpcr扩增的引物。
13、优选的，所述试剂盒还包括microrna rt反应体系，所述micrornart反应体系按每10μl计，包括：茎环rt引物1μl，5x reverse transcription buffer 2μl，rtase mix 2μl，rnase-free h2o 3μl，其余2μl为测试rna。
14、进一步，所述试剂盒中，所述试剂盒还包括micrornaqpcr反应体系，所述micrornaqpcr反应体系按每20μl计包括：sybr green mix 10μl，micrornaqpcr正向引物0.8μl，micrornaqpcr反向引物0.8μl，ddh2o 6.4μl，其余为rt反应产物2μl。
15、本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过平原世居者平原血浆循环microrna的芯片谱筛查，待人群进入高原后，根据hah国际通用诊断标准诊断系统区分hah和健康人群，结合其高原缺氧暴露后的hah发病情况，进一步发现平本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种microRNA分子标志物表达水平的检测试剂在制备筛查高原头痛易感者试剂盒中的应用，其特征在于，所述microRNA为hsa-miR-330-3p、hsa-miR-1-3p、hsa-miR-4712-3p、hsa-miR-4476中两种及两种以上的组合。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述microRNA为hsa-miR-1-3p、hsa-miR-4476和hsa-miR-4712-3p的组合。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述hsa-miR-1-3p的序列如SEQ ID NO.5所示，所述hsa-miR-330-3p的序列如SEQ ID NO.6所示，所述hsa-miR-4476的序列如SEQIDNO.7所示，所述hsa-miR-4712-3p的序列如SEQ ID NO.8所示。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样本为唾液上清或外周血。
5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述检测试剂通过RT-PCR、实时荧光定量聚合酶链式反应、Northern Blotting、原
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述检测试剂为茎环RT引物，所述茎环RT引物的序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所示。
7.一种筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测样本中microRNA分子的表达水平的检测试剂，所述microRNA为hsa-miR-330-3p、hsa-miR-1-3p、hsa-miR-4712-3p、hsa-miR-4476中两种及两种以上。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含能够与microRNA分子结合进行RT反应的茎环RT引物。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括5x reversetranscriptionBuffer，RTase Mix和RNase-free H2O。
10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含能够分别与microRNA分子RT产物特异性结合并进行qPCR扩增的引物。
...【技术特征摘要】
1.一种microrna分子标志物表达水平的检测试剂在制备筛查高原头痛易感者试剂盒中的应用，其特征在于，所述microrna为hsa-mir-330-3p、hsa-mir-1-3p、hsa-mir-4712-3p、hsa-mir-4476中两种及两种以上的组合。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述microrna为hsa-mir-1-3p、hsa-mir-4476和hsa-mir-4712-3p的组合。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述hsa-mir-1-3p的序列如seq id no.5所示，所述hsa-mir-330-3p的序列如seq id no.6所示，所述hsa-mir-4476的序列如seqidno.7所示，所述hsa-mir-4712-3p的序列如seq id no.8所示。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样本为唾液上清或外周血。
5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述检测试剂通过rt-pcr、实时荧光定量聚合酶链式反应、northern blotti...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄河，郭艳，苏琳涵，刘冬梅，李健学，万东君，谢慎威，黄沛，黄建平，陈鹏德，曹玖见，旦珍，何丹，康迅，潘菁，刘艳，张冬梅，张英菊，
申请(专利权)人：中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院，
类型：发明
国别省市：
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