【技术实现步骤摘要】
本专利技术系涉及一种调控细胞定量摄取线粒体的方法，尤其是指一种通过氧糖剥夺的方法来调控细胞摄取线粒体的方法。
技术介绍
1、线粒体是细胞主要产生atp的地方，当线粒体因为老化或是其他因素导致功能退化或是异常，产生atp的能力便会降低。线粒体会随着细胞内能量需求或细胞压力的不同,而进行动态变化,并非一直处于单一线粒体状态,当细胞能量需求增加时线粒体会持续地分裂(fission),以快速地产生三磷酸腺者相反地,当细胞处于机饿状态时,线粒体会进行融合(fusion),以降低能量的生产及利用,维持细胞正常生理功能。
2、线粒体通过协调各种代谢和应激反应途径，包括atp合成，钙信号传导，细胞死亡的启动和生物分子的合成，在调节细胞稳态中起着关键作用[1,2]。此外，线粒体在细胞中表现出显着的功能可塑性，以满足局部代谢需求[3]。在间充质干细胞(mscs)中观察到细胞间功能性线粒体转移[4]，最近的研究发现，神经元，小胶质细胞和内皮细胞之间可以发生线粒体内化，促进内源性细胞活力和活性[5,6]。
3、线粒体被称为“能量工厂”，是细胞质中必不可少的细胞器，在产生三磷酸腺苷(atp)和维持细胞稳态方面发挥着至关重要的作用。最近，研究人员发现，间充质干细胞(mscs)可以将功能性线粒体转移到附近受损的细胞，包括mscs[4]、心肌细胞[7]和神经细胞[8]。这些线粒体转移改善了受体细胞在经历应激(如缺血和再灌注)时的表现，并调节病理过程。
4、传统的线粒体转移发生在细胞间，依赖于直接细胞间隧道纳米管(tnt)、间
5、参考文献：
6、[1]pekkurnaz g,wang x.mitochondrial heterogeneity and homeostasisthrough the lens of a neuron
7、[j].nat metab,2022,4(7):802-12.
8、[2]nunnari j,suomalainen a.mitochondria:in sickness and in health[j].cell,2012,148(6):1145-59.[3]li s,xiong g j,huang n,et al.the cross-talk ofenergy sensing and mitochondrial anchoring sustainssynaptic efficacy bymaintaining presynaptic metabolism[j].nat metab,2020,2(10):1077-95.
9、[4]li c j,chen p k,sun l y,et al.enhancement of mitochondrialtransfer by antioxidants in humanmesenchymal stem cells[j].oxidative medicineand cellular longevity,2017,2017:8510805.
10、[5]huang p j,kuo c c,lee h c,et al.transferring xenogenicmitochondria provides neural protectionagainst ischemic stress in ischemicrat brains[j].cell transplantation,2016,25(5):913-27.
11、[6]hayakawa k,chan s j,mandeville e t,et al.protective effects ofendothelial progenitorcell-derived extracellular mitochondria in brainendothelium[j].stem cells,2018,36(9):1404-10.
12、[7]mori d,miyagawa s,kawamura t,et al.mitochondrial transfer inducedby adipose-derivedmesenchymal stem cell transplantation improves cardiacfunction in rat models of ischemiccardiomyopathy[j].cell transplantation,2023,32:9636897221148457.
13、[8]li h,wang c,he t,et al.mitochondrial transfer from bone marrowmesenchymal stem cells to motorneurons in spinal cord injury rats via gapjunction[j].theranostics,2019,9(7):2017-35.
14、[9]liu z,sun y,qi z,et al.mitochondrial transfer/transplantation:anemerging therapeutic approach formultiple diseases[j].cell&bioscience,2022,12(1):66.
15、[10]lin w,huang l,li y,et al.mesenchymal stem cells and cancer:clinical challenges and opportunities
16、[j].biomed research international,2019,2019:2820853.
17、[11]wada k i,hosokawa k,ito y,et al.quantitative control ofmitochondria transfer between live singlecells using a microfluidic device[j].biology open,2017本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种调控细胞定量摄取线粒体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的氧糖剥夺的时间为0小时至24小时。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的氧糖剥夺的时间为2小时至3小时。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，使用缺氧小室联合无氧无葡萄糖的溶液(氧糖剥夺溶液)对所述的受体细胞进行氧糖剥夺；和/或使用小分子化合物对所述的受体细胞进行处理，所述的小分子化合物包括H2O2，CCCP，Blebbistatin，HCl，Dynasore；
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的缺氧小室内的气体参数为N2浓度95％，CO2浓度为5％，氧气浓度为0.00～0.1％；
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的小分子化合物的处理体系为
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中加入线粒体前的复氧恢复时间为0小时至48小时。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，其中加入线粒体前的复氧恢复时间为0.5小时至18小时。
9.如权利要
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的细胞培养基包括：高糖培养基为含胎牛血清(FBS)之H-DMEM，和/或各受体细胞常规对应培养基，和/或包含FBS和NAC(acetylcysteine)之H-DMEM,和/或包含KnockOut血清替代物之DMEM/F-12,和/或包含FBS和CD38抑制剂之H-DMEM。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的NAC浓度为1.0mM至12mM
12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的CD38抑制剂浓度为0.1μM至2μM。
13.如权利要求1-12任意一项所述的方法，其特征在于，复氧恢复期结束后，加入线粒体和受体细胞共培养,即互相接触培养。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的线粒体从供体细胞中提取，提取得到的游离线粒体为结构和功能活性良好的健康线粒体。
15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中将线粒体投予所述的受体细胞，其比例为一个所述的受体细胞对应的线粒体来源于1个至500个供体细胞。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，其中将线粒体投予所述的受体细胞，其比例为一个所述的受体细胞对应的线粒体来源于5个至200个供体细胞。
17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中将线粒体投予所述的细胞后共培养3小时至60天。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，其中将线粒体投予所述的细胞后共培养4小时至48小时。
19.如权利要求9所述的方法，其特征在于，其中线粒体和受体细胞共培养时的细胞培养基为含胎牛血清(FBS)之H-DMEM，和/或各受体细胞常规对应培养基，和/或包含FBS和NAC(acetylcysteine)之H-DMEM,和/或包含KnockOut血清替代物之DMEM/F-12。
20.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述的受体细胞包含外周血单个核细胞、淋巴细胞、成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、神经元细胞、神经细胞，血管内皮细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞、胚胎干细胞、间充质干细胞。
21.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述的线粒体来自脐带间充质干细胞，成纤维细胞、胚胎干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞，神经干细胞、星形胶质细胞、平滑肌细胞。
22.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述的受体细胞来源于哺乳动物。
23.如权利要求14所述的方法，其特征在于，其中所述的线粒体为人源性线粒体。
24.如权利要求1-23任意一项所述的方法，其特征在于，所述的任一方法在促进受体细胞摄取外源线粒体中的应用；或所述的任一方法在修复细胞，组织，器官损伤或退化中的应用；或所述的任一方法在医学研究中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种调控细胞定量摄取线粒体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的氧糖剥夺的时间为0小时至24小时。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的氧糖剥夺的时间为2小时至3小时。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，使用缺氧小室联合无氧无葡萄糖的溶液(氧糖剥夺溶液)对所述的受体细胞进行氧糖剥夺；和/或使用小分子化合物对所述的受体细胞进行处理，所述的小分子化合物包括h2o2，cccp，blebbistatin，hcl，dynasore；
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的缺氧小室内的气体参数为n2浓度95％，co2浓度为5％，氧气浓度为0.00～0.1％；
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的小分子化合物的处理体系为
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中加入线粒体前的复氧恢复时间为0小时至48小时。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，其中加入线粒体前的复氧恢复时间为0.5小时至18小时。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中在加入线粒体前的复氧恢复期时更换培养基为细胞培养基。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的细胞培养基包括：高糖培养基为含胎牛血清(fbs)之h-dmem，和/或各受体细胞常规对应培养基，和/或包含fbs和nac(acetylcysteine)之h-dmem,和/或包含knockout血清替代物之dmem/f-12,和/或包含fbs和cd38抑制剂之h-dmem。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的nac浓度为1.0mm至12mm
12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的cd38抑制剂浓度为0.1μm至2μm。
13.如权利要求1-12任意一项所述的方法，其特征在于，复氧恢复期结束后，加入线粒体和受体细胞共培养,即互相接触培养。
14.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡敏，李燕皎，吴朕，王梦婷，王思涛，马代萍，锁继春，孙建秀，赵云会，陶慧仙，崔雯，吴明进，吴兴飞，曹丽，
申请(专利权)人：深圳臻德济慈药品研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。