System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 有效递送多聚核苷酸至细胞的成分与方法技术_技高网
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有效递送多聚核苷酸至细胞的成分与方法技术

技术编号:40878239 阅读:5 留言:0更新日期:2024-04-08 16:48
本披露提供了一种通过电转将多聚核苷酸有效递送至细胞核的成分与方法。同时,本披露提供了一种有助于递送、显著降低细胞毒性的新缓冲液系统。缓冲液包括琥珀酸盐、甘露醇、一种糖、谷氨酰胺或类似物以及抗氧化剂。此外,还提供了一种特别适用于电转递送DNA、RNA或蛋白质至胞内的方法,这种方法需在渗透压大于310mOsmol/kg的溶液条件下进行。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】


技术介绍


技术实现思路

【技术保护点】

1.一种水溶液,包括琥珀酸盐、甘露醇,和葡萄糖、蔗糖和肌醇中的一种糖,谷氨酰胺或其类似物,以及抗氧化剂。

2.权利要求1所述的水溶液,其中糖为D-葡萄糖。

3.权利要求1或2所述的水溶液,其中谷氨酰胺或其类似物从L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、L-谷氨酰胺和D-谷氨酰胺中选择。

4.前述任意权利要求所述的水溶液,其中琥珀酸盐为琥珀酸钠、琥珀酸钾或琥珀酸镁。

5.前述任意权利要求所述的水溶液,其中抗氧化剂为丙酮酸钠或乙酰半胱氨酸。

6.前述任意权利要求所述的水溶液,还包括Na2HPO4和NaH2PO4。

7.前述任意权利要求所述的水溶液,还包括血清。

8.前述任意权利要求所述的水溶液,其中包含浓度低于80mM的NaCl,或最好低于70mM、60mM或50mM NaCl。

9.权利要求8所述的水溶液,其中包括浓度为5mM至30mM的琥珀酸钠,浓度为1mM至30mM的甘露醇,浓度为3mM至30mM的葡萄糖,浓度为50mg/L至900mg/L的L-谷氨酰胺或L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,浓度为0.1mM至0.6mM的丙酮酸钠,并且包含低于60mM的NaCl。

10.一种将多聚核苷酸递送至细胞的方法,在权利要求1-9所述的任何一种水溶液中进行,包括将电脉冲施加于包含多聚核苷酸和细胞的样品上。

11.一种将多聚核苷酸递送至细胞的方法,包括将电脉冲施加于包含多聚核苷酸和细胞的样品中,所述样品置于包含浓度低于80mM NaCl的培养基中,或最好低于70mM、60mM或50mM NaCl的培养基中。

12.权利要求11所述方法中,培养基包括琥珀酸盐、甘露醇、一种糖、谷氨酰胺或其类似物,以及一种抗氧化剂。

13.权利要求10-12任意一条所述方法中,多聚核苷酸是DNA或RNA。

14.权利要求13所述方法中,DNA是单链DNA或双链DNA。

15.权利要求13所述方法中,RNA是siRNA、sgRNA、信使RNA或双链RNA、反义RNA、tRNA或RNA适配体。

16.权利要求15所述方法中,RNA以RNA蛋白复合物的形式提供。

17.权利要求10-16任意一条所述方法中,细胞是哺乳动物细胞。

18.权利要求17所述方法中,培养基中还包括抑制cGAS-STING通路的药剂。

19.权利要求18所述方法中,药剂为靶向cGAS或STING蛋白的siRNA或抗体。

20.利用权利要求10-19任意一条所述方法,使多聚核苷酸进入细胞核中。

21.一种将生物分子递送至细胞的方法,包括在渗透压高于310mOsmol/kg的水溶液中,将电脉冲施加于包含生物分子和细胞的样品中,其中生物分子可以是RNA分子、蛋白质或它们的组合。

22.权利要求21所述方法中,其中水溶液的渗透压高于320mOsmol/kg、330mOsmol/kg、340mOsmol/kg或350mOsmol/kg。

23.权利要求21或22所述方法中,渗透压低于600渗透压。

24.权利要求21-23任意一条所述方法中,水溶液符合权利要求1-9中的任何一项。

25.权利要求21-24任意一条所述方法中,水溶液包括用于调整水溶液渗透压的非电解质溶剂。

26.权利要求25所述方法中,非电解质溶剂组分从葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、海藻糖、甘油、PEG300、PEG400、PEG600、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸、甜菜碱和硼酸等中选择。

27.权利要求25或26所述方法中,非电解质溶液的浓度为10mM至300mM、20mM至300mM、30mM至300mM、40mM至300mM、50mM至300mM、10mM至200mM、20mM至200mM、30mM至200mM、40mM至200mM、50mM至200mM、10mM至100mM、20mM至100mM、30mM至100mM、40mM至100mM或50mM至100mM。

28.权利要求21-24任意一条所述方法中,水溶液包括用于调整水溶液渗透压的电解质溶剂。

29.权利要求28所述方法中,电解质溶剂组分从NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2、Ca(NO3)2、MgSO4和NaHCO3等中选择。

30.权利要求28或29所述方法中,其中非电解质溶液的浓度为3mM至90mM,4mM至90mM,5mM至90mM,6mM至90mM,7mM至90mM,8mM至90mM,9mM至90mM,10mM至90mM,15mM...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种水溶液,包括琥珀酸盐、甘露醇,和葡萄糖、蔗糖和肌醇中的一种糖,谷氨酰胺或其类似物,以及抗氧化剂。

2.权利要求1所述的水溶液,其中糖为d-葡萄糖。

3.权利要求1或2所述的水溶液,其中谷氨酰胺或其类似物从l-丙氨酰-l-谷氨酰胺、l-谷氨酰胺和d-谷氨酰胺中选择。

4.前述任意权利要求所述的水溶液,其中琥珀酸盐为琥珀酸钠、琥珀酸钾或琥珀酸镁。

5.前述任意权利要求所述的水溶液,其中抗氧化剂为丙酮酸钠或乙酰半胱氨酸。

6.前述任意权利要求所述的水溶液,还包括na2hpo4和nah2po4。

7.前述任意权利要求所述的水溶液,还包括血清。

8.前述任意权利要求所述的水溶液,其中包含浓度低于80mm的nacl,或最好低于70mm、60mm或50mm nacl。

9.权利要求8所述的水溶液,其中包括浓度为5mm至30mm的琥珀酸钠,浓度为1mm至30mm的甘露醇,浓度为3mm至30mm的葡萄糖,浓度为50mg/l至900mg/l的l-谷氨酰胺或l-丙氨酰-l-谷氨酰胺,浓度为0.1mm至0.6mm的丙酮酸钠,并且包含低于60mm的nacl。

10.一种将多聚核苷酸递送至细胞的方法,在权利要求1-9所述的任何一种水溶液中进行,包括将电脉冲施加于包含多聚核苷酸和细胞的样品上。

11.一种将多聚核苷酸递送至细胞的方法,包括将电脉冲施加于包含多聚核苷酸和细胞的样品中,所述样品置于包含浓度低于80mm nacl的培养基中,或最好低于70mm、60mm或50mm nacl的培养基中。

12.权利要求11所述方法中,培养基包括琥珀酸盐、甘露醇、一种糖、谷氨酰胺或其类似物,以及一种抗氧化剂。

13.权利要求10-12任意一条所述方法中,多聚核苷酸是dna或rna。

14.权利要求13所述方法中,dna是单链dna或双链dna。

15.权利要求13所述方法中,rna是sirna、sgrna、信使rna或双链rna、反义rna、trna或rna适配体。

16.权利要求15所述方法中,rna以rna蛋白复合物的形式提供。

17.权利要求10-16任意一条所述方法中,细胞是哺乳动物细胞。

18.权利要求17所述方法中,培养基中还包括抑制cgas-sting通路的药剂。

19.权利要求18所述方法中,药剂为靶向cgas或sting蛋白的sirna或抗体。

20.利用权利要求10-19任意一条所述方法,使多聚核苷酸进入细胞核中。

21.一种将生物分子递送至细胞的方法,包括在渗透压高于310mosmol/kg的水溶液中,将电脉冲施加于包含生物分子和细胞的样品中,其中生物分子可以是rna分子、蛋白质或它们的组合。

22.权利要求21所述方法中,其中水溶液的渗透压高于320mosmol/kg、330mosmol/kg、340mosmol/kg或350mosm...

【专利技术属性】
技术研发人员:张楹殷昊张川平安静
申请(专利权)人:武汉大学
类型:发明
国别省市:

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