一种用于实时监控细胞表观转录的融合蛋白制造技术

本申请实施例提供了用于实时监控细胞表观转录的融合蛋白、核酸、载体和试剂盒及其用途。该融合蛋白包含第一结构域、第二结构域和第三结构域，其中，所述第一结构域包含用于将所述融合蛋白定位至细胞核的定位多肽或与所述定位多肽的氨基酸序列具有至少85％同一性的变体；所述第二结构域包含m<supgt;6</supgt;A结合蛋白或与所述m<supgt;6</supgt;A结合蛋白的氨基酸序列具有至少85％同一性的变体；并且所述第三结构域包含荧光蛋白或与所述荧光蛋白的氨基酸序列具有至少85％同一性的变体。本申请实施例提供的融合蛋白能够实现被病毒侵染后宿主细胞中RNA的m<supgt;6</supgt;A水平变化的实时监测，成功为病毒侵染机制研究以及抗病毒药物的筛选提供了新的工具。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及分子检测领域，具体涉及用于实时监控细胞表观转录的融合蛋白、核酸、载体和试剂盒及其用途。

技术介绍

1、所有生命的rna分子都有各种转录后的化学修饰即表观转录组。n6-甲基腺苷(m6a)是发生在腺苷n6位置的甲基化，是真核信使rna和非编码rna中最普遍和最具代表性的rna修饰。细胞m6a修饰是一个动态过程，会受病毒(例如sars-cov-2)、细菌、真菌等病原体入侵的干扰。因此，实时监控受到病原体感染的细胞中的m6a修饰对于解析细胞免疫过程及抗病毒方法研究具有重要意义。

2、目前可以准确量化rna m6a的细胞表观转录组研究方法都依赖于液相色谱、层析色谱、质谱和毛细管电泳等大型实验室设备，因此难以动态监控病毒等外源病原体的入侵过程和宿主细胞中rna m6a甲基化的生物学动态特征，限制了对于病毒致病机制的研究和相应疫苗的开发。

3、由此，亟待提出一种能够实时监控细胞表观转录的成像方法，以提高对于病毒等外源病原体的致病机制研究和疫苗开发的效率。

技术实现思路

1、本申请至少从以下本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于实时监控细胞表观转录的融合蛋白，包含第一结构域、第二结构域和第三结构域，其中，

2.根据权利要求1所述融合蛋白，其中所述定位多肽包含1至4个，优选为2个核定位信号；优选地，所述核定位信号为病毒SV40的T抗原。

3.根据权利要求1所述融合蛋白，其中所述m6A结合蛋白为YTHDC2、YTHDF1、YTHDF2或YTHDF3。

4.根据权利要求1所述融合蛋白，其中所述荧光蛋白为mCherry荧光蛋白、GFP荧光蛋白、ECFP荧光蛋白或YPet荧光蛋白；优选地，所述GFP荧光蛋白为EGFP荧光蛋白。

5.根据权利要求1所述融合蛋白，编码所...

【技术特征摘要】

1.用于实时监控细胞表观转录的融合蛋白，包含第一结构域、第二结构域和第三结构域，其中，

2.根据权利要求1所述融合蛋白，其中所述定位多肽包含1至4个，优选为2个核定位信号；优选地，所述核定位信号为病毒sv40的t抗原。

3.根据权利要求1所述融合蛋白，其中所述m6a结合蛋白为ythdc2、ythdf1、ythdf2或ythdf3。

4.根据权利要求1所述融合蛋白，其中所述荧光蛋白为mcherry荧光蛋白、gfp荧光蛋白、ecfp荧光蛋白或ypet荧光蛋白；优选地，所述gfp荧光蛋白为egfp荧光蛋白。

5.根据权利要求1所述融合蛋白，编...

【专利技术属性】
技术研发人员：李景虹，滕续聪，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：