【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术在其一些实施方式中涉及适于扩大处于未分化状态的哺乳动物多能干细胞(如哺乳动物家畜多能干细胞)的确定成分培养基，更具体地，而非排他地，涉及包括其的细胞培养物和使用其扩大哺乳动物多能干细胞的方法。
技术介绍
1、近年来，对改善多能干细胞(psc)培养系统的广泛研究取得了三项主要进展：(1)在无血清条件下使细胞生长的能力[amit et al,2000]；(2)在不添加小鼠胚胎成纤维细胞(mef)条件培养基的无饲养层条件下，同时使用选定的生长因子，延长psc的培养[amit etal,2004；xu et al,2005；xu et al,2005b和ludwig et al 2006]，以及(3)在悬浮培养物中培养psc(amit et al,2010,2011)。
2、最近的几项研究讨论了几种细胞内转导途径在psc更新和维持“干性(stemness)”身份方面可能有所参与，但突显(underlining)胚胎干细胞(esc)自我维持的机制仍未被揭示。在一些培养方法中，如果培养基补充包括wnt3a、碱性成纤维细胞生长因...
【技术保护点】
1.确定成分无血清培养基，其包括基础培养基、血清替代物和有效浓度的至少一种分化抑制剂，其中确定成分培养基能够在培养时维持哺乳动物家畜多能干细胞处于未分化状态至少5代，其中所述基础培养基被选择适于维持多能干细胞处于未分化状态，其中所述血清替代物包括胰岛素和转铁蛋白，并且其中所述血清替代物缺乏硒。
2.根据权利要求1所述的限定无血清培养基，其中所述胰岛素以0.34X10-3 mM至1.88X10-3 mM范围内的浓度提供，并且其中所述转铁蛋白以0.137X10-4 mM至0.66X10-4 mM范围内的浓度提供。
3.确定成分无血清培养基，其包括基...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.确定成分无血清培养基，其包括基础培养基、血清替代物和有效浓度的至少一种分化抑制剂，其中确定成分培养基能够在培养时维持哺乳动物家畜多能干细胞处于未分化状态至少5代，其中所述基础培养基被选择适于维持多能干细胞处于未分化状态，其中所述血清替代物包括胰岛素和转铁蛋白，并且其中所述血清替代物缺乏硒。
2.根据权利要求1所述的限定无血清培养基，其中所述胰岛素以0.34x10-3 mm至1.88x10-3 mm范围内的浓度提供，并且其中所述转铁蛋白以0.137x10-4 mm至0.66x10-4 mm范围内的浓度提供。
3.确定成分无血清培养基，其包括基础培养基、血清替代物和有效浓度的至少一种分化抑制剂，其中确定成分培养基能够在培养时维持哺乳动物家畜多能干细胞处于未分化状态至少5代，其中所述基础培养基被选择适于维持多能干细胞处于未分化状态，其中所述血清替代物包括胰岛素和转铁蛋白，其中所述胰岛素以0.43x10-3 mm至1.57x10-3 mm范围内的浓度提供，并且其中所述转铁蛋白以0.172x10-4 mm至0.55x10-4 mm范围内的浓度提供。
4.根据权利要求1、2或3所述的确定成分培养基，前提是所述基础培养基不是rpmi1640。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的培养基，其中所述基础培养基选自ko-dmem、dmem/f12和dmem。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的确定成分培养基，其中所述基础培养基选自ko-dmem和dmem/f12。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的确定成分培养基，其中所述基础培养基以94-96％范围内的浓度提供。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的确定成分培养基，其中所述培养基缺乏冷冻保护剂。
9.根据权利要求3所述的确定成分培养基，其中所述培养基还包括硒。
10.根据权利要求3所述的确定成分培养基，其中所述培养基不包括硒。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的确定成分培养基，还包括浓度范围为0.5-1.2％(v/v)的脂质混合物。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的确定成分培养基，其中所述血清替代物还包括浓度在125-170mm范围内的抗坏血酸。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的确定成分培养基，其中所述血清替代物还包括浓度在0.4％至0.7％体积/体积(v/v)范围内的牛血清白蛋白。
14.根据权利要求3-8中任一项所述的确定成分培养基，其中所述血清替代物是以1-10％体积/体积(v/v)范围内的浓度提供的敲除(ko)-血清替代物。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的确定成分培养基，其中所述至少一种分化抑制剂是生长因子、细胞因子、小分子或其组合，其中所述有效浓度的所述至少一种分化抑制剂能够在培养时维持所述哺乳动物家畜多能干细胞处于未分化状态至少5代。
16.根据权利要求15所述的确定成分培养基，其中所述生长因子是碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)。
17.根据权利要求16所述的确定成分培养基，其中所述bfgf的所述有效浓度在4-110ng/ml的范围内。
18.根据权利要求16所述的确定成分培养基，其中所述bfgf的所述有效浓度为约50ng/ml。
19.根据权利要求15所述的确定成分培养基，其中所述至少一种分化抑制剂是il6ril6嵌合体。
20.根据权利要求19所述的确定成分培养基，其中所述il6ril6嵌合体的所述有效浓度为约100pg/ml。
21.根据权利要求15所述的确定成分培养基，其中所述至少一种分化抑制剂是gp130激动剂。
22.根据权利要求21所述的确定成分培养基，其中所述gp130激动剂选自白血病抑制因子(lif)、白细胞介素-6(il6)、白细胞介素-11(il11)和睫状神经营养因子(cntf)。
23.根据权利要求22所述的确定成分培养基，其中所述il11的所述有效浓度为约1ng/ml。
24.根据权利要求22或23所述的确定成分培养基，其中所述cntf的所述有效浓度为约1ng/ml。
25.根据权利要求15所述的确定成分培养基，其中所述至少一种分化抑制剂包括浓度为约3000u/ml的白血病抑制因子(lif)和浓度为约50ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)。
26.根据权利要求15所述的确定成分培养基，其中所述至少一种分化抑制剂包括浓度为约3000u/ml的白血病抑制因子(lif)和浓度为约10ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)。
27.根据权利要求15所述的确定成分培养基，其中所述至少一种分化抑制剂包括wnt3a多肽和碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)。
28.根据权利要求27所述的确...
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