【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于核酸提取，具体涉及一种核酸提取液、试剂盒及其应用。
技术介绍
1、核酸提取的方法主要包括酚抽提法、碱裂解法、ctab抽提法、煮沸法、离心柱提取法、玻璃珠吸附法及微纳米磁珠提取法。而相比较之下，磁珠法核酸提取技术由于自动化程度高、样本通量大，尤其是安全性高，已成为业内主流方法。国内核酸提取主流厂家拥有全自动核酸提取系统采用磁珠法原理，无需离心且操作自动化，可减少人员接触，并使用深孔板耗材，可避免交叉污染。
2、随着核酸检测的广泛应用，核酸提取技术也在飞速发展，但目前市面上现有的病原体核酸提取试剂盒中，试剂盒中具有以下弊端：灵敏度低等原因容易造成漏检；核酸提取不完全造成定量偏差，不能很好地反映样本的真实浓度；裂解结合分步进行，操作繁琐，这些弊端会影响临床样本的提取效率以及对结果的判读。以hbv(乙型肝炎病毒)检测为例，目前，我国《乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸测定试剂技术审查指导原则》将hbv的灵敏度要求提升到了30iu/ml和50iu/ml，这对核酸提取液具有较高的要求，需要更高的提取效率才能达到要求。
技术实现思路
1、为了解决上述现有技术问题，本专利技术的目的在于提供一种核酸提取液、试剂盒及其应用，该核酸提取液在核酸提取中，核酸提取得率高，从而提高检测灵敏度，降低漏检和核酸提取不完全造成定量偏差，从而很好地反映样本的真实浓度。
2、本专利技术提供一种核酸提取液，所述核酸提取液包括月桂基麦芽糖新戊二醇和tween-20，所述月桂基麦芽糖新戊二醇(lm
3、本专利技术所述月桂基麦芽糖新戊二醇(lmng)的浓度为1～5mg/ml，例如可以是1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml，但不限于所列举的数值，数值范围内其他未列举的数值同样适用。本专利技术所述tween-20的体积分数为4％～6％，例如可以是4％、4.5％、5％、5.5％、6％，但不限于所列举的数值，数值范围内其他未列举的数值同样适用。
4、本专利技术将月桂基麦芽糖新戊二醇引入核酸提取液，搭配tween-20，同时限定月桂基麦芽糖新戊二醇的浓度为1～5mg/ml，tween-20的体积分数为4％～6％，该核酸提取液在核酸提取中，核酸提取得率高，从而提高检测灵敏度，降低漏检和核酸提取不完全造成定量偏差，从而很好地反映样本的真实浓度。再者，裂解结合同时进行，减少操作步骤，从而提高提取效率。
5、优选地，所述核酸提取液还包括胍盐、缓冲液、钠盐、乙二胺四乙酸(edta)、异丙醇中的至少一种。
6、优选地，在所述核酸提取液中，所述胍盐包括盐酸胍、异硫氰酸胍中的至少一种，和/或，所述缓冲液包括tris-hcl缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种，和/或，所述钠盐包括氯化钠、醋酸钠中的至少一种。
7、优选地，在所述核酸提取液中，所述胍盐的浓度为2-4m，和/或，所述缓冲液的浓度为50mm-100mm，和/或，所述钠盐的浓度为50mm-100mm，和/或，所述乙二胺四乙酸的浓度为20-25mm，和/或，所述异丙醇的体积分数为35％-45％。
8、更优选地，所述胍盐为盐酸胍，所述缓冲液为tris-hcl缓冲液，所述钠盐为氯化钠。
9、本专利技术提供一种核酸提取试剂盒，包括所述核酸提取液。
10、本专利技术试剂盒操作简便，可以进行手工提取、半自动核酸提取仪器。本专利技术试剂盒还可以采用预分装好的核酸提取试剂，可搭配核酸提取设备，可通过半自动仪器提取方案在40分钟之内提取48例样本，极大程度提高了核酸提取效率和报告发送时间，有单人份试剂，根据需求进行选择，减少试剂浪费，进一步降低了成本且简单高效。
11、优选地，所述核酸提取试剂盒还包括洗涤液、洗脱液中的至少一种。
12、优选地，所述洗涤液包括洗涤液1和洗涤液2，所述洗涤液1包括异丙醇、np40(乙基苯基聚乙二醇)、胍盐、乙二胺四乙酸、二硫苏糖醇中的至少一种，所述洗涤液2包括缓冲液、乙醇中的至少一种。
13、优选地，在所述洗涤液1中，所述胍盐包括盐酸胍、硫氰酸胍中的至少一种。
14、优选地，在所述洗涤液2中，所述缓冲液包括tris-hcl缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种。
15、优选地，所述洗脱液包括缓冲液、乙二胺四乙酸中的至少一种。
16、优选地，在所述洗脱液中，所述缓冲液包括tris-hcl缓冲液、hepes缓冲液中的至少一种。
17、优选地，所述核酸提取试剂盒还包括磁珠和/或蛋白酶k。
18、本专利技术还提供所述核酸提取试剂盒在核酸提取中的应用，所述核酸提取包括手工提取、核酸提取仪器提取中的至少一种。
19、优选地，手工提取的方法，包括如下步骤：
20、s1.向样本中加入磁珠，再加入蛋白酶k，震荡；
21、s2.加入所述核酸提取液，震荡、离心、加热静置；
22、s3.室温静置，进行磁性分离，去掉液体；
23、s4.加入所述洗涤液1，震荡，磁性分离，去掉液体；
24、s5.加入所述洗涤液2，震荡，磁性分离，去掉液体；
25、s6.离心后，磁性分离，去掉液体，静置；
26、s7.加入洗脱液，震荡，静置，提取得到核酸。
27、优选地，在所述s6中，所述静置的时间为4～5min。
28、本方案限定步骤s6中静置的时间为4～5min，在该静置时间范围，磁珠上的中的乙醇充分挥发，避免残留的乙醇对后续实验造成不良影响；同时避免静置干燥的时间较长导致磁珠挂壁难以洗脱。
29、优选地，在所述s7中，所述静置包括室温静置或55～58℃条件下静置。
30、本方案限定步骤s7中静置包在55～58℃条件下静置，可提高样本的核酸洗脱效率。
31、优选地，在所述s7中，所述静置包括室温条件下静置10min。
32、更优选地，在所述s7中，所述静置包括56℃条件下静置5min。
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1.一种核酸提取液，其特征在于，所述核酸提取液包括月桂基麦芽糖新戊二醇和Tween-20，所述月桂基麦芽糖新戊二醇的浓度为1～5mg/mL，所述Tween-20的体积分数为4％～6％。
2.根据权利要求1所述核酸提取液，其特征在于，所述核酸提取液所述提取液还包括胍盐、缓冲液、钠盐、乙二胺四乙酸、异丙醇中的至少一种。
3.根据权利要求2所述核酸提取液，其特征在于，在所述核酸提取液中，所述胍盐的浓度为2-4M，和/或，所述缓冲液的浓度为50mM-100mM，和/或，所述钠盐的浓度为50mM-100mM，和/或，所述乙二胺四乙酸的浓度为20-25mM，和/或，所述异丙醇的体积分数为35％-45％。
4.一种核酸提取试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述核酸提取液。
5.根据权利要求4所述核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒还包括洗涤液、洗脱液中的至少一种。
6.根据权利要求5所述核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括洗涤液1和洗涤液2，所述洗涤液1包括异丙醇、乙基苯基聚乙二醇、胍盐、乙二胺四乙酸、二硫苏
7.根据权利要求5所述核酸提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括缓冲液、乙二胺四乙酸中的至少一种。
8.根据权利要求4所述核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒还包括磁珠和/或蛋白酶K。
9.一种如权利要求4-8任一项所述核酸提取试剂盒在核酸提取中的应用，其特征在于，所述核酸提取包括手工提取、核酸提取仪器提取中的至少一种。
10.根据权利要求9所述核酸提取试剂盒在核酸提取中的应用，其特征在于，所述手工提取的方法，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种核酸提取液，其特征在于，所述核酸提取液包括月桂基麦芽糖新戊二醇和tween-20，所述月桂基麦芽糖新戊二醇的浓度为1～5mg/ml，所述tween-20的体积分数为4％～6％。
2.根据权利要求1所述核酸提取液，其特征在于，所述核酸提取液所述提取液还包括胍盐、缓冲液、钠盐、乙二胺四乙酸、异丙醇中的至少一种。
3.根据权利要求2所述核酸提取液，其特征在于，在所述核酸提取液中，所述胍盐的浓度为2-4m，和/或，所述缓冲液的浓度为50mm-100mm，和/或，所述钠盐的浓度为50mm-100mm，和/或，所述乙二胺四乙酸的浓度为20-25mm，和/或，所述异丙醇的体积分数为35％-45％。
4.一种核酸提取试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述核酸提取液。
5.根据权利要求4所述核酸提取试剂盒，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺婷，蒋志杰，田雨苏，戴立忠，吴康，龙凤英，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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