【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种提取dsrna的试剂组合及其应用。
技术介绍
1、rna干扰(rnai)是指一种分子生物学上由双链rna(dsrna)诱发的序列特异性基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。如今已在哺乳动物、真菌、植物、节肢动物和线虫等几乎所有的真核生物种观察到该机制。rnai在农业防治害虫中具有广阔的应用前景。
2、dsrna的主要生产途径有：一、体外合成，通常借助试剂盒体外合成dsrna，但由于试剂盒成本较高、使用次数有限，在大规模生产中使用不切实际；二、通过转基因植物表达dsrna，可在其生长发育阶段在体内自动合成dsrna，但转基因作物培育周期长，经济效益不高，且转基因植物的安全性还需要进一步研究；三、原核生物发酵生产dsrna，虽然该方法生产成本低且不存在生态安全评价问题，但由于原核表达dsrnaz中参杂部分核糖体rna，使得无法对诱导产生的dsrna进行定量分析，同时不能很好的保证dsrna的纯度，现有技术中通常使用trizol法进行提取，但是该方法提取的dsrna质量差，且该方法操作繁琐不适用与生产中。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术中提取dsrna成本高、操作复杂、提取到的dsrna质量低的缺陷，提供一种提取dsrna的试剂组合及其应用。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案进行。
3、本专利技术的第一方面提供一种提取dsrna的试剂组合，所述试
4、本专利技术的一些实施方式中，所述edta浓度为3-6mm，ph为6-8；所述nh4(so4)2的浓度为40-60mm；所述sds的质量浓度为1-5％；所述氯化钠的浓度为3-6m。
5、本专利技术的一些具体实施方式中，所述edta浓度为5mm，ph为6-8；所述nh4(so4)2的浓度为50mm；所述sds的质量浓度为1-5％；所述氯化钠的浓度为5m。
6、本专利技术的第二方面提供一种提取dsrna的试剂盒，所述试剂盒包括如本专利技术第一方面所述的试剂组合。
7、本专利技术的第三面提供一种dsrna的提取方法，使用如本专利技术第一方面所述的试剂盒提取dsrna；
8、其中，所述提取方法包括：将样本进行离心，收集沉淀，重悬后室温静置；加入nh4(so4)2，室温静置；加入sds，室温静置；加入氯化钠震荡混合后离心，收集上清；取上清液与液态二氧化硅混合，离心，吸取上清液，加入等体积异丙醇震荡、室温静置、离心收集沉淀，得到高纯度dsrna沉淀。
9、本专利技术的一些实施方式中，所述重悬使用浓度为3-6mm，ph为6-8的edta；所述nh4(so4)2的浓度为40-60mm；所述sds的质量浓度为1-5％；所述氯化钠的浓度为3-6m；所述上清液与所述液态二氧化硅混合的体积比为3:1。
10、本专利技术的一些实施方式中，所述室温静置的时间为5-30min。
11、本专利技术的一些具体地实施方式中，所述重悬后室温静置的时间为10min；nh4(so4)2，室温静置的时间为20min；加入sds，室温静置的时间为30min；加入等体积异丙醇震荡、室温静置的时间为10min。
12、本专利技术的一些实施方式中，所述样本为含有dsrna的大肠杆菌工程菌菌体。
13、本专利技术的一些实施方式中，所述大肠杆菌工程菌菌体是以含如seq id no:1所示的gfp基因的质粒为模板，使用上游引物如seq id no:2所示，下游引物如seq id no:3所示的引物组进行pcr扩增，获得扩增产物；利用所述扩增产物获得重组质粒，将重组质粒转入受体细胞得到的。
14、本专利技术的一些实施方式中，所述质粒为pegfp-n3；所述重组质粒是通过连接酶将载体与所述扩增产物进行连接，转化大肠杆菌trans-1感受态细胞得到的；所述受体细胞为大肠杆菌ht115感受态细胞。
15、本专利技术的一些具体地实施方式中，所述连接酶为t4连接酶，所述载体为pet-2p载体。
16、本专利技术的一些具体地实施方式中，所述pet-2p载体与所述gfp扩增产物的浓度比为1:5。
17、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：使用本专利技术提供的试剂盒提取dsrna操作简单、且得到的dsrna纯度较高，a260/a230的比值为2.1917，a260/a280的比值为1.8942。
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1.一种提取dsRNA的试剂组合，其特征在于，所述试剂组合由以下试剂组成：EDTA、NH4(SO4)2、SDS、氯化钠、液态二氧化硅。
2.一种提取dsRNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的试剂组合。
3.一种dsRNA的提取方法，其特征在于，使用如权利要求1所述的试剂组合或权利要求2所述的试剂盒提取dsRNA；
4.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述重悬使用浓度为3-6mM，pH为6-8的EDTA；所述NH4(SO4)2的浓度为40-60mM；所述SDS的质量浓度为1-5％；所述氯化钠的浓度为3-6M；所述上清液与所述液态二氧化硅混合的体积比为3:1。
5.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述室温静置的时间为5-30min。
6.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述样本为含有dsRNA的大肠杆菌工程菌菌体。
7.如权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述大肠杆菌工程菌菌体是以含如SEQID NO:1所示的GFP基因的质粒为模板，使用上游引物如SEQ ID N
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述质粒为pEGFP-N3；所述载体为PET-2P载体。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述扩增产物与载体通过T4连接酶连接。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述PET-2P载体与所述GFP扩增产物的浓度比为1:5。
...【技术特征摘要】
1.一种提取dsrna的试剂组合，其特征在于，所述试剂组合由以下试剂组成：edta、nh4(so4)2、sds、氯化钠、液态二氧化硅。
2.一种提取dsrna的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的试剂组合。
3.一种dsrna的提取方法，其特征在于，使用如权利要求1所述的试剂组合或权利要求2所述的试剂盒提取dsrna；
4.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述重悬使用浓度为3-6mm，ph为6-8的edta；所述nh4(so4)2的浓度为40-60mm；所述sds的质量浓度为1-5％；所述氯化钠的浓度为3-6m；所述上清液与所述液态二氧化硅混合的体积比为3:1。
5.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述室温静置的时间为5-30min。
...【专利技术属性】
技术研发人员：张亚楠，朱秀云，李建俏，马赛，黄建荣，
申请(专利权)人：淮北师范大学，
类型：发明
国别省市：
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