用于治疗缺血性脑血管疾病的制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种治疗缺血性脑血管疾病的制剂及其制备方法，该制剂的制备方法是通过诱导单核细胞获得血管内皮祖细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ?ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ?ｃｅｌｌｓ，ＥＰＣ），进而在低血清及低氧条件培养上述ＥＰＣ细胞，最后分离ＥＰＣ细胞获得无细胞培养基，并对该无细胞培养基进行相应后处理，即可获得所述制剂。体外和体内实验表明，本发明专利技术所述的治疗缺血性脑血管疾病的制剂能够显著的促进由脑缺血导致坏死的脑组织的修复。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种可以治疗缺血性脑血管疾病的制剂及其制备方法。
技术介绍
心脑血管疾病是世界上致死率和发病率最高的疾病。根据2010年美国心脏学会 的统计报告指出，2005年全世界大约有1750万人死于各类心脑血管疾病，大约占死亡总人 数的30%。预计到2020年，全球因心脑血管疾病死亡人数将达2500万人。另据WHO的报 告指出，在2006年到2015年的10年之间，中国在因心血管病及糖尿病而导致的收入损失 将高达5580亿美元。在2004年欧洲有430万人死于各类心脑血管疾病，高达总死亡人数 的48%。在各类心脑血管疾病中，动脉粥样硬化所导致的血栓及血管堵塞是最常见和最重 要的发病机理。在疾病初期，由活性氧激发的对低密度脂蛋白的修饰会逐渐导致血管内皮 机能障碍。机体的免疫系统对此产生慢性炎症并持续分泌富含T细胞，巨噬细胞，肥大细胞 的白血球细胞群，并形成脂纹，纤维斑块，粥样斑块，使血管腔狭窄并导致血流量减少。当最 终粥样斑块破碎后，脱落的碎斑会导致血小板聚集并产生大规模的闭合性血栓及其他继发 性改变，包括由该动脉所供应养份的组织或器官的缺血或坏死。由动脉粥样硬化所导致的 缺血本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗缺血性脑血管疾病的制剂的制备方法，其特征在于，该制剂的制备方法包括如下步骤：步骤１）．从健康人血液中通过密度梯度离心的方法或白细胞置换（ｌｅｕｋａｐｈｅｒｅｓｉｓ）获取外周血单核细胞，或从骨髓中通过密度梯度离心的方法获取骨髓单核细胞；步骤２）．培养单核细胞以获得ＥＰＣ细胞；步骤３）．在特定条件下培养ＥＰＣ细胞使其分泌促血管生成的生长因子和细胞活素，分离ＥＰＣ细胞和培养基，获得富含促血管生成因子和细胞活素的无细胞培养基；步骤４）．对步骤３）中所获得的无细胞培养基进行后处理，该后处理步骤包括：过滤细胞碎片、纯化该无细胞培养基、检测各有效生长因子成分及含量、对该培养基进行冻干处理或冷冻保存，...

【技术特征摘要】
一种治疗缺血性脑血管疾病的制剂的制备方法，其特征在于，该制剂的制备方法包括如下步骤步骤1).从健康人血液中通过密度梯度离心的方法或白细胞置换(leukapheresis)获取外周血单核细胞，或从骨髓中通过密度梯度离心的方法获取骨髓单核细胞；步骤2).培养单核细胞以获得EPC细胞；步骤3).在特定条件下培养EPC细胞使其分泌促血管生成的生长因子和细胞活素，分离EPC细胞和培养基，获得富含促血管生成因子和细胞活素的无细胞培养基；步骤4).对步骤3)中所获得的无细胞培养基进行后处理，该后处理步骤包括过滤细胞碎片、纯化该无细胞培养基、检测各有效生长因子成分及含量、对该培养基进行冻干处理或冷冻保存，即获得治疗缺血性脑血管疾病的制剂。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的健康人血液的来源可 以是自体来源，或异体来源，或通过血库购买的健康人白细胞悬液样本，或通过临床白细胞 置换。3.根据权利要求1-2任一所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的从血液中 或骨髓中通过密度梯度离心获取外周血单细胞的方法为使用梯度剂为Ficoll-Paque、 Histopaque-1077或其他同类产品，温度为15 25°C，离心力为200g_500g，时间20-40分 钟，离心完成后，吸取当中不透明层，即为单核细胞悬液。4.根据权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中的培养单核细胞以 获得EPC细胞时，所用的培养基为Ml 19、DMEM、RPMI-1640, EBM、EBM-2中的一种，并添加有 0. 5-1 %的生长因子添加剂EGM、EGM-MV, EGM-2或EGM2-MV中的一种(可由瑞士 Lonza公 司购买，其中含血管内皮生长因子VEGF-1、碱性成纤维细胞生长因子FGF-2、表皮生长因子 EGF，和胰岛素样生长因子IGF-1)；或添加有内皮细胞生长因子ECGF(IO-IOOygAil)；或添 加有内皮细胞生长因子ECGF(10-100 μ g/ml)；培养基中另含有质量比为5%至20%...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨肖泱，杨子江，顾丽娅，
申请(专利权)人：上海士腾生物技术有限公司，杨子江，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]