一种化脓链球菌MCDA扩增引物组及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种化脓链球菌MCDA扩增引物组，包括F1、F2、CP1、CP2、C1、C2、D1、D2、R1、R2；为了构建后续LFB可视化检测产物，在引物D1的5’端标记荧光素命名为D1*，在引物R1的5’端标记生物素命名为R1*；交叉引物CP1和CP2是介导MCDA扩增的主要引物；置换引物F1和F2置换在MCDA反应中发挥置换作用，置换交叉引物CP1和CP2；六条扩增引物D1*，C1，R1*，D2，C2和R2能够加速MCDA反应及增加MCDA产物量。本发明专利技术建立的化脓链球菌MCDA‑LFB检测体系的检测范围为2ng～200fg，且特异性强，能实现对化脓链球菌病原体的快速、敏感和特异性检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物快速检测，更具体地，涉及一种化脓链球菌mcda扩增引物组及其应用和mcda-lfb检测化脓链球菌中的方法。

技术介绍

1、化脓链球菌(streptococcus pyogenes，s.pyogenes)是一种β溶血的链球菌，广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，引起各种化脓性炎症，猩红热，丹毒，新生儿败血症，脑膜炎，产褥热以及链球菌变态反应性疾病等。

2、目前对于化脓链球菌的检测主要依赖于传统的分离培养和生化鉴定。该方法耗时较长(2至7天)，包括二次增菌，选择培养及后续的生化鉴定，尽管生化鉴定可依靠全自动微生物鉴定仪进行结果判读，但该方法仍存在耗时耗力的缺点。随着分子诊断技术的快速发展，一些以pcr为基础的诊断技术(如普通pcr技术，荧光pcr技术)被用于化脓链球菌的快速检测，然而这些方法操作繁琐，需要昂贵的仪器设备和昂贵的探针合成，后续的电泳操作，以及熟练的操作人员。然而一些基层医院和现场检测无法满足上述条件，限制了这些技术的运用。

3、为了克服pcr扩增技术的劣势，实现便捷、快速、敏感及特异的扩增核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种化脓链球菌MCDA扩增引物组，其特征在于，包括：一对置换引物F1和F2，其序列依次如SEQ ID No.1～2所示；一对交叉引物CP1和CP2，其序列依次如SEQ ID No.3～4所示；6条扩增引物C1、C2、D1、D2、R1和R2，其序列依次如SEQ ID No.5～10所示，其中，扩增引物D1的5’端标记荧光素，扩增引物R1的5’端标记生物素。

2.权利要求1所述化脓链球菌MCDA扩增引物组在化脓链球菌检测或在制备化脓链球菌检测试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述检测为采用MCDA-LFB技术检测。>

4.一种非疾...

【技术特征摘要】

1.一种化脓链球菌mcda扩增引物组，其特征在于，包括：一对置换引物f1和f2，其序列依次如seq id no.1～2所示；一对交叉引物cp1和cp2，其序列依次如seq id no.3～4所示；6条扩增引物c1、c2、d1、d2、r1和r2，其序列依次如seq id no.5～10所示，其中，扩增引物d1的5’端标记荧光素，扩增引物r1的5’端标记生物素。

2.权利要求1所述化脓链球菌mcda扩增引物组在化脓链球菌检测或在制备化脓链球菌检测试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述检测为采用mcda-lfb技术检测。

4.一种非疾病诊断治疗目的检测化脓链球菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤s2中所述mcda恒温扩增反应的温度为60～66℃。

6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤s2中所述mcda恒温扩增反应恒温程序为63℃30min，85℃5min终止...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘得玺，窦志茜，蹇梦婵，路莹，孙宇阳，毕代蓉，毛敏，王锦星，刘毅力，郭冲，陈永吉，夏凌云，
申请(专利权)人：十堰市太和医院湖北医药学院附属医院，
类型：发明
国别省市：