基于红细胞数量梯度溶血素法用于血液/骨髓样本液基细胞制片术细胞形态及免疫标记观察制造技术

本发明专利技术公开一种基于血液/骨髓样本液基细胞制片术的红细胞数量梯度溶血素法用于细胞形态及免疫标记观察，步骤为：测试样本红细胞计算；根据红细胞数量范围确定溶血素用量；溶血后样本洗涤及液基细胞制片机制片和染色观察，取计算所得样本量加入流式细胞管中，加PBS补充容量，加免疫荧光探针，震荡混匀，室温孵育后，加入溶血素，沉淀免疫荧光探针标记的细胞及部分红细胞，并移除上清液；去除未结合免疫荧光探针及红细胞碎片，得到免疫荧光探针‑细胞偶联物；加PBS，通过离心力将免疫荧光探针‑细胞偶联物移至粘附型玻片上，于室温下晾干；滴用瑞氏/瑞‑姬氏染液复染，冲洗，室温晾干，可用于显微镜下细胞形态及标记观察和图像采集。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物学及医学领域，尤其涉及一种显微镜同时观察白血病细胞形态及基于稀土纳米材料免疫标记样本制作过程中红细胞处理操作技术。

技术介绍

1、液基细胞制片技术常用于浆膜腔积液、灌洗液、宫颈病变筛查样本等制片，染色后观察目的细胞形态。在《基于稀土纳米材料免疫标记技术联合细胞形态学技术准确诊断白血病细胞的工艺》所申请专利技术专利技术路线中，骨髓或血液样本我们采用了液基细胞制片术中的离心制片方法将免疫标记后的样本溶血，经洗涤后将白细胞转移至玻片，染色后经显微镜观察细胞形态，根据细胞形态特征选定靶细胞后切换980nm激光光源进一步观察靶细胞免疫标记情况。前述专利技术所用样本材料为血液或骨髓液，与液基细胞制片技术常用的浆膜腔等样本不同，血液或骨髓液样本当中存在大量的成熟红细胞，制片过程中大量红细胞与白细胞共同被转移至玻片，大量的红细胞会影响白细胞形态的展开，影响到染色后细胞类型的识别、靶细胞的判断，会造成误诊、误判。而适量成熟红细胞的存在一方面有助于“指示”实验操作过程，同时可做为观察白细胞免疫标记信号的阴性背景，有助于结果判断，适量红细胞与白细胞共存可提升染本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于血液/骨髓样本液基细胞制片术的红细胞数量梯度溶血素法用于细胞形态及免疫标记观察，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于血液/骨髓样本液基细胞制片术的红细胞数量梯度溶血素法用于细胞形态及免疫标记观察，其特征在于所述计算所得样本量按如下步骤进行：白细胞/有核细胞浓度单位：以103/uL表示，红细胞以106/uL表示，以取2.0×105个白细胞/有核细胞数为例，其操作过程为：1）计算样本用量：假设白细胞浓度为A×103/uL，式中A为白细胞浓度单位前系数，以血液常规报告单中白细胞为4.0×109/L为例，或用4.0×103/uL表示，则A=4，则样本用量为：2...

【技术特征摘要】

1.一种基于血液/骨髓样本液基细胞制片术的红细胞数量梯度溶血素法用于细胞形态及免疫标记观察，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于血液/骨髓样本液基细胞制片术的红细胞数量梯度溶血素法用于细胞形态及免疫标记观察，其特征在于所述计算所得样本量按如下步骤进行：白细胞/有核细胞浓度单位：以103/ul表示，红细胞以106/ul表示，以取2.0×105个白细胞/有核细胞数为例，其操作过程为：1）计算样本用量：假设白细胞浓度为a×103/ul，式中a为白细胞浓度单位前系数，以血液常规报告单中白细胞为4.0×109/l为例，或用4.0×103/ul表示，则a=4，则样本用量为：2.0×105/a×103（ul）；2）样本含红细胞数量计算及红细胞裂解液用量确定：当样本中红细胞浓度为b×106/ ul时，式中b为红细胞浓度单位前系数，以血液常规报告单中红细胞为4.5×1012/l为例，或用4.5×106/ul表示，则b=4.5，则红细胞数量＝2.0×105/a×103（ul）乘以b×106/ ul；对照红细胞溶血素用量表确定裂解液用量，当红细胞数量低于1.1×107时，无需再进一步溶血。

3.免疫荧光探针在基于血液/骨髓样本液基细胞制片术的红细胞数量梯度溶血素法用于细胞形态及免疫标记观察中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于血液样...

【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，陈璐，李永生，
申请(专利权)人：福建医科大学附属协和医院，
类型：发明
国别省市：