【技术实现步骤摘要】
本申请涉及免疫诊断，具体涉及一种幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、幽门螺杆菌是一种革兰氏阴性菌，菌体呈螺旋形弯曲状。幽门螺杆菌常生存于胃部及十二指肠的各区域内，它会引起胃黏膜轻微的慢性发炎，甚或导致胃及十二指肠溃疡与胃癌。可致癌的幽门螺杆菌主要含有两种细胞毒素：一种是细胞毒素相关蛋白caga，一种是空泡细胞毒素vaca。根据是否表达caga和vaca能够将幽门螺杆菌分为两种类型：i型和ii型，i型为致病性较强的产毒菌株(caga和vaca均表达，或表达其中一种)，ii型为毒性较弱的不产毒菌株(caga和vaca均不表达)。
2、目前，针对幽门螺杆菌检测的诊断方法从标本采集角度可以分为侵入性和非侵入性两大类。侵入性方法主要指必须通过胃镜取活检标本检查的方法，包括细菌的分离培养和直接涂片、快速尿素酶试验、荧光pcr(taqman探针)等。非侵入性方法主要指不通过胃镜取活检标本诊断hp的方法，包括同位素示踪法、免疫学方法(抗原、抗体检测)等。检测方法虽然多种，但能够简单、快速得检测幽门螺杆菌分型的方法却少之又少。相关技术中利用荧光量子点微球制备出一种能够检测幽门螺杆菌分型的检测试纸卡，但是该方法的灵敏度偏低、检测效率低，检测范围窄。因此，本领域急需提供一种在保证检测灵敏度高、特异性强的同时，能够借助分析仪器实现检测过程全自动化的幽门螺杆菌抗体分型检测盒。
技术实现思路
1、为了提高幽门螺杆菌抗体分型检测的灵敏度与准确性，同时实现全自动化检测，本申
2、第一方面，本申请提供一种幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，采用如下的技术方案：
3、一种幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，所述检测试剂盒包括：磁性微球试剂、吖啶酯试剂、校准品1和校准品2；
4、所述磁性微球试剂包括：包被有caga抗原的磁性微球、包被有vaca抗原的磁性微球、包被有urease抗原的磁性微球；
5、所述吖啶酯试剂包含抗人igg抗体与吖啶酯。
6、本申请提供一种幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，该检测试剂盒采用了磁微粒均相反应技术和第四代吖啶酯直接化学发光技术，能够全自动定性检测人血清、血浆和全血样本中的多种幽门螺杆菌(hp)igg抗体。与相关技术中的检测方法相比，本申请提供的试剂盒以磁性微球作为固相载体，由于磁性微球具有较小的体积及较大的表面积，因此反应面积较大，检测的灵敏度更高。此外，本提供的试剂盒中包含配套试剂(吖啶酯试剂与校准品)，并且该检测是由全自动仪器完成，因此检测过程中的人为因素影响较小，批内样本与批间样本检测结果的差异小，检测结果的稳定性与重复性好。
7、利用本申请提供的幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒对待测样本进行检测时，待测样本中含有的caga抗体、vaca抗体和urease抗体分别能够与包被有caga抗原的磁性微球、包被有vaca抗原的磁性微球、包被有urease抗原的磁性微球以及吖啶酯复合物进行免疫结合，形成磁珠-待测物质-吖啶酯复合物，通过检测上述复合物的相对发光强度，并与校准品1和校准品2确认的cutoff(co)进行比较，判断待测样本中caga抗体、vaca抗体和urease抗体的阴阳性，从而判断幽门螺杆菌igg抗体分型。
8、本申请中，当caga抗体、vaca抗体和urease抗体结果均呈现阴性时，待测样品为幽门螺杆菌阴性；当caga抗体、vaca抗体结果中至少一种呈现阳性时，则待测样品为i型幽门螺杆菌抗体阳性；当仅urease抗体结果呈现阳性时，则待测样品为ii型幽门螺杆菌抗体阳性；
9、本申请中，磁性微球为fe2o3或fe3o4磁性纳米粒子通过加入适当的表面活性剂和高分子骨架材料制备而成；磁性微球的粒径为2.2μm。高分子骨架材料选自氨基酸聚合物、多糖和其他高温分子聚合物；其中，氨基酸聚合物如蛋白质、肽类和酶类等，多糖如阿拉伯胶、淀粉、右旋糖酐、琼脂糖等，其他高分子聚合物如聚丙烯、聚乙烯、硅酮等。
10、优选地，所述caga抗原、vaca抗原与urease抗原分别与磁性微球的重量比为1：(25-35)。
11、在一个具体的实施方案中，所述caga抗原、vaca抗原与urease抗原分别与磁性微球的重量比为1：30。
12、本申请中，所述吖啶酯可以为nsp-dmae-nhs、nsp-dmae-heg-nhs、nsp-sa-nhs、me-dmae-nhs和nsp-sa中的一种或多种。
13、优选地，所述吖啶酯选自nsp-dmae-nhs、nsp-dmae-heg-nhs和nsp-sa-nhs。
14、本申请中，通过实验探究发现，nsp-dmae-nhs、nsp-dmae-heg-nhs和nsp-sa-nhs较其他化学发光标记物(me-dmae-nhs和nsp-s)，具有信噪比高，干扰因素少，发光效率高、强度大，易于蛋白交联等优点，因此利用上述吖啶酯标记获得的检测结果的准确度更高。
15、优选地，所述吖啶酯试剂中，所述吖啶酯与抗人igg抗体的摩尔比为(10-20)：1。
16、进一步地，所述校准品2包括caga抗体、vaca抗体及urease抗体和蛋白保护液。蛋白保护液在校准品2中的质量浓度为5.5-7％。
17、本申请中，校准品2主要用于测定仪其内储存主曲线的校正，校准品2中添加有蛋白保护剂，蛋白保护剂能够提供良好的反应环境，使得抗体保持天然构象。本申请将校准品2中蛋白保护剂的浓度控制在上述范围内，能够降低校准品2的极性，为抗体提供长期稳定保存的疏水环境。
18、在一个具体的实施方案中，所述蛋白保护液在校准品2中的质量浓度为6.1％。
19、本申请中，所述蛋白保护液包括酪蛋白、海藻糖和防腐剂，所述防腐剂选自硫柳汞、叠氮钠和抗生素。
20、进一步地，所述防腐剂为抗生素；所述蛋白保护剂中，所述酪蛋白、海藻糖和抗生素的重量比为1：(4-6)：(0.05-0.2)。
21、在一个具体的实施方案中，所述酪蛋白、海藻糖和庆大霉素的重量比为1：5：0.1。
22、进一步地，所述磁性微球试剂、吖啶酯试剂、校准品1中还包括：含1％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。
23、可选地，所述抗生素为庆大霉素。
24、第二方面，本申请提供一种幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒的制备方法；
25、一种幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒的制备方法，包括制备吖啶酯试剂：向抗人igg抗体中加入磷酸盐缓冲液，再加入吖啶酯，于20-28℃下反应10-20min；然后加入赖氨酸猝灭液，反应20-30min；用ph为7.2-7.5的10mm pbs透析，获得吖啶酯试剂。
26、进一步地，所述制备方法还包括制备包被抗原的磁性微球，具体为：将磁性微球与抗原混合，在20-28℃本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括：磁性微球试剂、吖啶酯试剂、校准品1和校准品2；
2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯选自NSP-DMAE-NHS、NSP-DMAE-HEG-NHS、NSP-SA-NHS、Me-DMAE-NHS和NSP-SA中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯试剂中，所述吖啶酯与抗人IgG抗体的摩尔比为（10-20）：1。
4.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒，其特征在于，所述校准品2包括CagA抗体、VacA抗体及Urease抗体和蛋白保护液。
5.根据权利要求4所述的幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒，其特征在于，所述蛋白保护液包括酪蛋白、海藻糖和防腐剂；所述防腐剂选自硫柳汞、叠氮钠和抗生素。
6.根据权利要求5所述的幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为抗生素；所述蛋白保护剂中，所述酪蛋白、海藻糖和抗生素的
7.根据权利要求1-6中任一项所述的幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒，其特征在于，所述磁性微球试剂、吖啶酯试剂、校准品1中还包括：含1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。
8.如权利要求1-7中任一项所述的幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括制备吖啶酯试剂：向抗人IgG抗体中加入磷酸盐缓冲液，再加入吖啶酯，于20-28℃下反应10-20min；然后加入赖氨酸猝灭液，反应20-30min；用pH为7.2-7.5的10mMPBS透析，获得吖啶酯试剂。
9.根据权利要求8所述的幽门螺杆菌抗体I或II型检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括制备包被抗原的磁性微球，具体为：将磁性微球与抗原混合，在20-28℃下静置30-100min；然后加入1.5-2.5%蔗糖封闭多余的位点，在20-28℃下反应20-30min，获得包被原的磁性微球。
...【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括：磁性微球试剂、吖啶酯试剂、校准品1和校准品2；
2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯选自nsp-dmae-nhs、nsp-dmae-heg-nhs、nsp-sa-nhs、me-dmae-nhs和nsp-sa中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯试剂中，所述吖啶酯与抗人igg抗体的摩尔比为（10-20）：1。
4.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，其特征在于，所述校准品2包括caga抗体、vaca抗体及urease抗体和蛋白保护液。
5.根据权利要求4所述的幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，其特征在于，所述蛋白保护液包括酪蛋白、海藻糖和防腐剂；所述防腐剂选自硫柳汞、叠氮钠和抗生素。
6.根据权利要求5所述的幽门螺杆菌抗体i或ii型检测试剂盒，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：伍波，银广悦，沈晨光，刘昱，徐翠玲，吴智广，李超辉，
申请(专利权)人：天津鸿宇泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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