一种链霉亲和素及其制备方法、以及链霉亲和素磁珠的标记方法技术

本申请涉及免疫检测的技术领域，具体公开了一种链霉亲和素及其制备方法、以及链霉亲和素磁珠的标记方法。该链霉亲和素的制备方法具体包括以下步骤：构建携带链霉亲和素核苷酸序列的重组质粒；将所述重组质粒转化至表达菌中培养；培养至OD

【技术实现步骤摘要】
一种链霉亲和素及其制备方法、以及链霉亲和素磁珠的标记方法


[0001]本申请涉及免疫检测的
，更具体地说，涉及一种链霉亲和素及其制备方法、以及链霉亲和素磁珠的标记方法。

技术介绍

[0002]链霉亲和素(Streptavidin，SA)以同源四聚体的形式存在，大小为65KDa，每摩尔的四聚体分子可高度特异性地与四摩尔的生物素分子结合，所以在免疫检测领域具有信号放大的作用。链霉亲和素
‑
生物素复合物的解离常数处于10
‑
14
mol/L数量级，这一性质常用于分子生物学用途。
[0003]SA
‑
biotin系统(链霉亲和素
‑
生物素放大系统)是二十世纪七十年代后期发展起来的一种生物反应放大系统，通过一分子链霉亲和素和四分子生物素之间特异结合实现信号放大，还可以通过多级级联放大来实现信号的多级放大，在生物学特别是免疫检测中有越来越广泛的用途。同时，由于链霉亲和素在检测中具有比亲和素低的背景而大大提高了检测的灵敏性。SA
‑
biotin系统可偶联抗原、抗体、酶、寡核苷酸分子以及PE等荧光物质。因此，SA
‑
biotin系统被广泛用于生物反应检测系统，用以检测抗原、抗体及核酸分子。目前，国内外大部分基于酶联免疫反应、荧光分子标记免疫反应和分子杂交为原理的各种检测试剂盒均采用SA
‑
biotin系统。
[0004]但目前，国内所用链霉亲和素均为价格昂贵的进口产品，因此，研制和生产国产化的链霉亲和素具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0005]为了提高链霉亲和素的活性和产量，本申请提供一种链霉亲和素及其制备方法、以及链霉亲和素磁珠的标记方法。
[0006]第一方面，本申请提供一种链霉亲和素的制备方法，采用如下的技术方案：一种链霉亲和素的制备方法，所述制备方法具体包括以下步骤：构建携带链霉亲和素核苷酸序列的重组质粒；将所述重组质粒转化至表达菌中培养；培养至OD
600
值为0.25
‑
0.6时，IPTG诱导表达，诱导条件为：IPTG浓度为0.1
‑
0.3mM，置于16
‑
37℃、60
‑
240rpm的条件下诱导4
‑
24h。
[0007]优选地，所述诱导条件为：IPTG浓度为0.1
‑
0.3mM，置于20
‑
25℃、60
‑
120rpm的条件下诱导9
‑
12h。
[0008]链霉亲和素由4条相同的肽链组成，其中一条完整的链霉亲和素肽链中有159个氨基酸残基，分子量为16450。氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性(pH6.0)的蛋白质，并且不带任何糖基。在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10
‑
12和C端19
‑
21间断裂，形成的核
心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示。
[0009]通过采用上述技术方案，本申请提供的链霉亲和素的制备方法，对制备过程中涉及到的OD
600
值、IPTG浓度以及诱导条件做了优化和改进，从而能够有效提高链霉亲和素的活性和产量。
[0010]优选地，培养至OD
600
值为0.3
‑
0.45时，IPTG诱导表达。
[0011]在一个具体的实施方式中，培养至OD
600
值为0.25、0.3、0.45、0.55、0.6时，IPTG诱导表达。
[0012]在一些具体的实施方式中，培养至OD
600
值为0.25
‑
0.3、0.25
‑
0.45、0.25
‑
0.55、0.3
‑
0.45、0.3
‑
0.55、0.3
‑
0.6、0.45
‑
0.55、0.45
‑
0.6、0.55
‑
0.6时，IPTG诱导表达。
[0013]通过采用上述技术方案，本申请将OD
600
值设置为0.25
‑
0.6，能够有效提高制备的链霉亲和素的活性和产量。尤其是将OD
600
值控制在0.3
‑
0.45时，能够进一步有效提高制备的链霉亲和素的活性和产量。
[0014]优选地，所述诱导条件中，所述IPTG浓度为0.15
‑
0.22mM。
[0015]在一个具体的实施方式中，所述IPTG浓度为0.1、0.15、0.22、0.25、0.3mM。
[0016]在一些具体的实施方式中，所述IPTG浓度为0.1
‑
0.15、0.1
‑
0.22、0.1
‑
0.25、0.15
‑
0.22、0.15
‑
0.25、0.15
‑
0.3、0.22
‑
0.25、0.22
‑
0.3、0.25
‑
0.3mM。
[0017]通过采用上述技术方案，本申请将IPTG浓度设置为0.1
‑
0.3mM，能够有效提高制备的链霉亲和素的活性和产量。尤其是将IPTG浓度设置为0.15
‑
0.22mM，能够进一步有效提高制备的链霉亲和素的活性和产量。
[0018]在一个具体的实施方式中，所述诱导条件中，诱导温度为16℃、20℃、22℃、25℃、37℃。
[0019]在一些具体的实施方式中，所述诱导条件中，诱导温度为16
‑
20℃、16
‑
22℃、16
‑
25℃、20
‑
22℃、22
‑
25℃、20
‑
37℃、22
‑
25℃、22
‑
37℃、25
‑
37℃。
[0020]优选地，所述诱导条件中，转速分为三个阶段：第一阶段的转速为60
‑
80rpm，诱导时间为3
‑
4h；第二阶段的转速为85
‑
100rpm，诱导时间为3
‑
4h；第三阶段的转速为105
‑
120rpm，诱导时间为3
‑
4h。
[0021]在一个具体的实施方式中，所述诱导条件中，转速分为三个阶段时，诱导时间可以是3h、3.5h、4h。
[0022]在一些具体的实施方式中，所述诱导条件中，转速分为三个阶段时，诱本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种链霉亲和素的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：构建携带链霉亲和素核苷酸序列的重组质粒；将所述重组质粒转化至表达菌中培养；培养至OD
600
值为0.25
‑
0.6时，IPTG诱导表达，诱导条件为：IPTG浓度为0.1
‑
0.3mM，置于16
‑
37℃、60
‑
240rpm的条件下诱导4
‑
24h。2.根据权利要求1所述的链霉亲和素的制备方法，其特征在于，所述诱导条件为：IPTG浓度为0.1
‑
0.3mM，置于20
‑
25℃、60
‑
120rpm的条件下诱导9
‑
12h。3.根据权利要求1所述的链霉亲和素的制备方法，其特征在于，培养至OD
600
值为0.3
‑
0.45时，IPTG诱导表达。4.根据权利要求1所述的链霉亲和素的制备方法，其特征在于，所述诱导条件中，所述IPTG浓度为0.15
‑
0.22mM。5.根据权利要求1所述的链霉亲和素的制备方法，其特征在于，所述诱导条件中，转速分为三个阶段：第一阶段的转速为60
‑
80rpm，诱导时间为3
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：董晓宁，伍波，沈晨光，孙志华，周妮娜，蒋宇珊，尹美移，吴智广，李超辉，朱瀛，
申请(专利权)人：天津鸿宇泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：