【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物的，更具体地说，涉及一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用。
技术介绍
1、枝状枝孢是一类常见的真菌，属于子囊菌门中的盘菌目。它们广泛存在于自然环境中，特别是在土壤、植物、害虫、腐烂的有机物和空气微粒中常见，枝状枝孢的菌丝通常为白色或浅色，并具有分枝的外观。它们可以产生孢子囊，内含成束的孢子；枝状枝孢的孢子是其繁殖和传播的主要形式。这些孢子通常为单一或多个排列在菌丝的特殊结构中。颜色可以从白色到绿色、黑色等不同；尽管大多数枝状枝孢是自然界的常见真菌，但某些物种也可以成为人类和动物的病原体。它们可以引起过敏反应和感染，特别是对于免疫系统功能受损的人群，如免疫抑制患者、呼吸系统疾病患者等。
2、对于过敏疾病的治疗方式多数是脱敏治疗，专利技术人认为，目前，还没有针对枝状枝孢过敏治疗药物，过敏反应只会用一些广谱的抗过敏药物，治标不治本。基于上述问题，我们提供了一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用。
3、本
技术介绍
所公开的上述信息仅仅用于增加对本专利技术
技术介绍
的理解，因此，其可能包括不构成本领域普通技术人员已知的现有技术。
技术实现思路
1、为了解决上述
技术介绍
中提出的问题，本专利技术提供一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用。
2、本专利技术提供的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法与应用采用如下的技术方案：
3、一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，包括以下步骤：p>
4、步骤一、菌种获得：通过空气曝皿，反复鉴定、纯化获得目标菌种，目标菌种放置于2～8℃冰箱避光保存备用；
5、步骤二、真菌培养：在超净工作台中将菌种接种到已灭菌的含有液体培养基的三角瓶中，在温度20～30℃，培养30～60天，随时观察培养温度和枝状枝孢的生长情况，及时弃除受到杂菌生长污染的培养瓶；
6、步骤三、真菌收集与灭活：打开培养完成的真菌瓶塞，收集菌苔，用2倍体积的95％乙醇浸泡灭活1～2h，倾去上层液体，取出菌苔，摊开，置于干燥室干燥；
7、步骤四、真菌脱脂：干燥的枝状枝孢用高速多功能粉碎机进行粉碎后，用脱脂溶剂反复浸洗进行脱脂处理至上层液体澄清；
8、步骤五、真菌干燥：将脱脂后的枝状枝孢干燥处理；
9、步骤六、真菌原材料保存，保存温度为-40℃；
10、步骤七、枝状枝孢过敏诊断与治疗用的浸提液制备：将枝状枝孢原材料与ph7.9～8.5缓冲盐水提取液按重量体积比1:50～1:10混合均匀，在2～8℃条件下浸提48～72h，浸提液离心后收取上清液；上清液先经滤纸过滤后，依次经不同孔径的滤膜多重过滤，然后在a级无菌洁净环境下，进行滤膜除菌过滤，分装保存。
11、优选的，在步骤一中，菌种收集为空气中曝皿收集，在四周没有建筑物阻挡的楼顶，离地面大约17米高，将装有曝皿培养基的培养皿打开皿盖，放置空气中，3分钟后盖好皿盖，带回实验室，25℃培养72小时；
12、然后鉴定菌落，把经鉴定后的枝状枝孢在无菌操作下接种到斜面内进行单菌落培养，培养温度25℃，培养时间48～72h，菌体成熟后光学显微镜下再鉴定，如此重复至不含其它杂菌后为合格，确定为目标菌种后放置于2～8℃冰箱避光保存备用。
13、优选的，在步骤一中，空气曝皿培养基与纯化用斜面培养基为蛋白胨-葡萄糖琼脂培养基，其组成为蛋白胨10克、葡萄糖40克、琼脂25克、水1000毫升。
14、优选的，在步骤二中，所述液体培养基，其组成为葡萄糖200克、牛肉膏50克、蛋白胨100克、酵母粉40克、氯化钠50克和水10000毫升；
15、所述液体培养基灭菌为湿热灭菌，灭菌条件为121℃，30分钟；
16、所述接种具体过程包括，在无菌的超净工作台中，用75％酒精擦拭手部、菌种的试管口和三角瓶口消毒，接种针在酒精灯上烧至通红，待冷却后挑取菌种，打开三角瓶盖，菌种转移三角瓶中，瓶盖在火焰上消毒后塞紧，重复以上操作完成真菌的接种工作，培养温度20～30℃，培养时间30～60天。
17、优选的，在步骤四中，用脱脂溶剂反复浸洗进行脱脂处理的过程包括，将经过粉碎的真菌置于容器中，按照1：1-1:5的质量体积比加入脱脂溶剂，使真菌被完全浸没，磁力搅拌，脱脂1-3小时后将容器静置，弃掉上层液，加入新的脱脂溶剂，重复脱脂至上层液体澄清，所述脱脂溶剂为丙酮、石油醚、乙醇、甲醇或环己烷中的至少一种。
18、优选的，在步骤五中，将脱脂后的真菌干燥处理包括，采用室温、真空或流化床进行干燥处理。
19、优选的，在步骤七中，离心机的离心速度为6000～12000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间设定为10～20分钟；依次经不同孔径的滤膜多重过滤为依次经过0.65μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，且为正压过滤；在a级无菌洁净环境下，进行滤膜除菌过滤为经过0.22μm的滤膜进行除菌过滤。
20、一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法制得的枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液在变态反应疾病的过敏原诊断及特异性免疫治疗中具有广阔的应用前景和临床应用价值。
21、综上所述，本专利技术包括以下有益技术效果：
22、本专利技术枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液，可以作为一种枝状枝孢过敏原原液，能够一定程度的引起对枝状枝孢过敏原过敏患者的过敏反应，具有极大的研究及临床应用价值。可有效用于变态反应疾病的过敏原诊断及特异性免疫治疗，可有效诊断由枝状枝孢诱发的变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗。
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1.一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤一中，菌种收集为空气中曝皿收集，在四周没有建筑物阻挡的楼顶，离地面大约17米高，将装有曝皿培养基的培养皿打开皿盖，放置空气中，3分钟后盖好皿盖，带回实验室，25℃培养72小时；
3.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤一中，空气曝皿培养基与纯化用斜面培养基为蛋白胨-葡萄糖琼脂培养基，其组成为蛋白胨10克、葡萄糖40克、琼脂25克、水1000毫升。
4.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤二中，所述液体培养基，其组成为葡萄糖200克、牛肉膏50克、蛋白胨100克、酵母粉40克、氯化钠50克和水10000毫升；
5.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤四中，用脱脂溶剂反复浸洗进行脱脂处理的过程包括，将经过粉碎的真菌置于容器中，按照1
6.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤五中，将脱脂后的真菌干燥处理包括，采用室温、真空或流化床进行干燥处理。
7.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤七中，离心机的离心速度为6000～12000rpm，离心温度为2～8℃，离心时间设定为10～20分钟；依次经不同孔径的滤膜多重过滤为依次经过0.65μm、0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，且为正压过滤；在A级无菌洁净环境下，进行滤膜除菌过滤为经过0.22μm的滤膜进行除菌过滤。
8.一种如权利要求1-7任意一项所述的制备方法制得的枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液在变态反应疾病的过敏原诊断及特异性免疫治疗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤一中，菌种收集为空气中曝皿收集，在四周没有建筑物阻挡的楼顶，离地面大约17米高，将装有曝皿培养基的培养皿打开皿盖，放置空气中，3分钟后盖好皿盖，带回实验室，25℃培养72小时；
3.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤一中，空气曝皿培养基与纯化用斜面培养基为蛋白胨-葡萄糖琼脂培养基，其组成为蛋白胨10克、葡萄糖40克、琼脂25克、水1000毫升。
4.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤二中，所述液体培养基，其组成为葡萄糖200克、牛肉膏50克、蛋白胨100克、酵母粉40克、氯化钠50克和水10000毫升；
5.根据权利要求1所述的一种枝状枝孢过敏诊断与治疗用浸提液的制备方法，其特征在于：在步骤四中，用脱脂溶剂反复浸洗进行脱脂处理的过程...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏继姣，王雅玲，朱杰麟，
申请(专利权)人：深圳市华仁医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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