【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程和纺织科学领域，特别是涉及一种碱性漆酶及其在苎麻脱胶中的应用。
技术介绍
1、苎麻是一种重要的工业纤维作物，种植历史悠久，苎麻单纤维的长度、细度和强度等一适应纺纱要求，但纤维在原麻中被胶质粘连在一起，需进行苎麻脱胶。苎麻脱胶是指将苎麻原麻脱去胶质制取苎麻纤维，是苎麻纤维加工的关键工序，脱胶效果直接影响麻纤维质量和制成率。传统的苎麻脱胶生产基本上是以烧碱为主的化学脱胶工艺，但其存在脱胶流程长、工序繁琐、劳动强度大、能耗大、环境污染等缺点。同时由于使用强酸、强碱、高温高压煮练等苛性条件，致使部分纤维素纤维分子链断裂、结晶度增高，造成精干麻制成率低、刚性强、织物手感粗糙等问题。
2、苎麻原料的主要组成为纤维素，其胶质主要包括果胶、半纤维素和木质素，因此可以采用采用酶法进行脱胶，而目前主要采用果胶酶、木聚糖酶或甘露聚糖酶进行酶法脱胶。由于果胶、半纤维素和木质素在无空间阻碍时，依靠游离的羟基、羧基进行物质结合、氢键连接或化学键结合，使胶质分子之间相互连接，形成更复杂的聚合体。当用单种酶进行脱胶时，由于胶质复合体形成的网络体系，酶分子很难渗透到胶质内部与其中的胶质作用，一部分胶质大分子虽被相应的酶所降解，但由于这些片断与其他大分子连接在一起而不能从胶质体系中游离出来。因此采用多种酶复配进行联合脱胶时，去除胶质的效果优于他们单独进行脱胶的总和。
3、碱性漆酶(laccase)是一类含铜的多酚氧化酶，木质素分子结构中含有的酚羟基可通过碱性漆酶催化氧化而形成自由基，进而引发木质素的降解。碱性漆酶可以高
技术实现思路
1、基于此，本专利技术通过酶挖掘与改造技术获得一种热稳定性强的碱性中温漆酶，并将其用于苎麻脱胶工业降解苎麻的木质素，为苎麻脱胶工业复配酶制剂需求提供一种选择。
2、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
3、一种碱性漆酶，其氨基酸序列如seq id no:2所示。
4、本专利技术提供的碱性漆酶的最适温度为65℃，最适ph为7.5，能够在ph 6.0～10.0范围内保持稳定，与对应的野生型碱性漆酶相比，本专利技术的碱性漆酶提升了近20％的热稳定性，并且具有更优的辅助苎麻脱胶作用，可通过与木聚糖酶和果胶酶复配，实现显著降低苎麻的残胶率，为苎麻脱胶工业复配酶制剂需求提供了一种新选择。
5、进一步，编码所述碱性漆酶的基因。
6、进一步，所述基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
7、进一步，包含所述基因的重组载体或重组菌株。
8、进一步，所述重组载体的表达载体包括pet28a。
9、进一步，所述重组菌株的宿主包括大肠杆菌bl21(ed3)。
10、进一步，所述碱性漆酶的制备方法包括如下步骤：构建权利要求4或5所述重组表达载体并转化至宿主细胞，获得重组表达菌株，对所述重组表达菌株进行培养、诱导表达、分离纯化，得到所述碱性漆酶。
11、进一步，构建所述重组表达载体包括如下步骤：
12、(1)筛选得到氨基酸序列如seq id no:1所示的碱性漆酶，合成对应的核苷酸序列并连接至表达载体，获得重组质粒，所述核苷酸序列如seq id no:3所示；
13、(2)以所述重组质粒为模板，设计突变引物，进行重叠延伸pcr扩增反应，获得所述重组表达载体。
14、本专利技术还提供所述碱性漆酶在苎麻脱胶中的应用。
15、进一步，所述碱性漆酶用于苎麻脱胶的温度为50℃～70℃，ph为6～10。
16、说明书附图
17、图1为本专利技术的野生型碱性漆酶及突变型碱性漆酶的sds-page分析；其中，泳道m为分子量marker，泳道1为纯化后的野生型碱性漆酶lacct，泳道2为纯化后的突变型碱性漆酶laccτ-g190p-q254y-g336m-d510f。
18、图2为本专利技术野生型碱性漆酶与突变型碱性漆酶的最适温度图。
19、图3为本专利技术野生型碱性漆酶与突变型碱性漆酶的最适ph图。
20、图4为本专利技术野生型碱性漆酶与突变型碱性漆酶的温度稳定性图。
21、图5为本专利技术野生型碱性漆酶与突变型碱性漆酶的ph稳定性图。
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1.一种碱性漆酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.编码权利要求1所述碱性漆酶的基因。
3.如权利要求2所述基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
4.一种包含如权利要求2所述基因的重组载体或重组菌株。
5.如权利要求4所述的重组载体或重组菌株，其特征在于，所述重组载体的表达载体包括pET28a。
6.如权利要求4所述的重组载体或重组菌株，其特征在于，所述重组菌株的宿主包括大肠杆菌BL21(ED3)。
7.如权利要求1所述碱性漆酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：构建权利要求4或5所述重组表达载体并转化至宿主细胞，获得重组表达菌株，对所述重组表达菌株进行培养、诱导表达、分离纯化，得到所述碱性漆酶。
8.如权利要求7所述制备方法，其特征在于，构建所述重组表达载体包括如下步骤：
9.如权利要求1～8所述碱性漆酶在苎麻脱胶中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述碱性漆酶用于苎麻脱胶的温度为50℃～70℃
...【技术特征摘要】
1.一种碱性漆酶，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no:2所示。
2.编码权利要求1所述碱性漆酶的基因。
3.如权利要求2所述基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no:4所示。
4.一种包含如权利要求2所述基因的重组载体或重组菌株。
5.如权利要求4所述的重组载体或重组菌株，其特征在于，所述重组载体的表达载体包括pet28a。
6.如权利要求4所述的重组载体或重组菌株，其特征在于，所述重组菌株的宿主包括大肠杆菌bl2...
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