【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种疱疹病毒八个型的两管四重荧光定量pcr分型检测试剂。
技术介绍
1、疱疹病毒(herpes viruses)是一类有包膜、基因组为双链dna的病毒。目前发现的能感染人的疱疹病毒有8种，包括：单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus-1，hsv-1)、单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus-2，hsv-2)、水痘-带状疱疹病毒(varicellazoster virus，vzv)、eb病毒(epstein-barr virus，ebv)、巨细胞病毒(cytomegalovirus，cmv)、人类疱疹病毒6型(hhv-6)、人类疱疹病毒7型(hhv-7)和卡波济肉瘤相关病毒(kaposi's sarcoma-associated herpesvirus，kshv)。疱疹病毒的生活周期分为典型的潜伏期复制和裂解期复制。疱疹病毒感染能够引起多种疾病，如疱疹、神经系统感染及肿瘤等重大疾病。疱疹病毒具有人群高携带性、易致病性及病症反复发作性等特点，严重影响人们的生命健康。目前，依然缺乏预防及治疗疱疹病毒感染的有效疫苗。临床治疗疱疹病毒相关疾病的药物主要为核苷类似物类抗病毒药物、免疫调节剂及抗病毒化疗药物。这些药物在一定程度上可以缓解相关疾病的病症，减轻患者的痛苦。
2、单纯疱疹病毒1型通过直接接触、唾液及损伤途径造成感染，攻击粘膜上皮细胞，造成齿龈炎、唇疹、生殖器疱疹、脑炎、眼部感染、新生儿感染和外伤性疱疹等；单纯疱疹病毒2型通过直接接触、唾液及损伤途径造成感
3、目前，治疗疱疹病毒感染的方法主要是抗病毒药物治疗。疱疹病毒复制机制的复杂性及致病机制的滞后性限制了抗病毒药物研发的进程；疱疹病毒感染的普遍性、潜伏性及致病性的多样性，更增加了疱疹病毒感染治疗的难度。因此在临床及时对疱疹病毒分型，了解疱疹病毒感染的特点及抗疱疹病毒药物的现状对于疱疹病毒相关疾病的临床治疗及药物研发具有重要的指导意义。
4、疱疹病毒分型诊断的金标准是病毒培养分型。传统的方法不仅耗时长，而且对人员及操作的生物安全等级较高。而抗原抗体等血清学检测方法灵敏度差，且无法进行型间的区分。荧光pcr技术具有简单快速，是当前的主流技术，根据种型特异性基因设计引物探针，可实现精准检测及分型，更好地为临床诊断和治疗提供有力依据。
技术实现思路
1、针对现有疱疹病毒分型检测的不足，本专利技术提供了一种两管四重荧光定量pcr检测疱疹病毒科八个种(单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、水痘-带状疱疹病毒、eb病毒、巨细胞病毒、人类疱疹病毒6型、人类疱疹病毒7型和卡波氏肉瘤相关病毒)的试剂，本专利技术针对单纯疱疹病毒1型us5基因、单纯疱疹病毒2型us4-5基因、水痘-带状疱疹病毒orf62基因、eb病毒bkrf1基因、巨细胞病毒ul123基因、人类疱疹病毒6型u31基因、人类疱疹病毒7型u39基因和卡波氏肉瘤相关病毒orf4基因设计特异性引物和探针。本专利技术的检测试剂不仅具有检测灵敏度高、特异性强、操作安全简单、时效性、所需时间短等优点，而且还能准确地对疱疹病毒属进行分性，对临床诊断和精准用药提供有利指导，具有较大的应用价值。
2、其中针对单纯疱疹病毒1型的特异性引物为ggcctggctatccggaga和gcgcagagacatcgcga，探针为cagcacacgacttggcgttctgtgt；
3、针对单纯疱疹病毒2型的特异性引物为agatatcctctttatcatcagcacca和ttgtgctgccaaggcga，探针为cagacaaacgaacgccgccg；
4、针对水痘-带状疱疹病毒的特异性引物为tcttgtcgaggaggcttctg和tgtgtgtccaccggatgat，探针为tctcgactggctgggacttgcg；
5、针对eb病毒的特异性引物为aggatgcgattaaggaccttgtt和ggaaaccagggaggcaaatct，探针为tgacaaagcccgctcctacctgca；
6、针对巨细胞病毒的特异性引物为tcatccacactaggagagcagact和gccaagcggcctctgat，探针为actgggcaaagaccttcatgcagatctc；
7、针对人类疱疹病毒6型的特异性引物为actctcacccgactgaacgag和agagcgacaaattggaggtttc，探针为agccacagcagccatctacatctgtcaa；
8、针对人类疱疹病毒7型的特异性引物为tttcctgtgacaaaagaagcagtta和atcccacacgctttacggg，探针为ttcctgcgcaataaagtgaaaactgttagcatt；
9、针对卡波氏肉瘤相关病毒的特异性引物为ctgatctacatatagcgtctacaccc和gccttcttcaatatggagagacg，探针为cccaagatgatgctacgccttcaatacc。
10、本试剂中还包括用于四重荧光定量pcr的其他常规试剂。
11、使用上述四重荧光定量pcr检测试剂的方法如下：
12、1、收集临床患者全血样本1ml于抗凝管中，采样时核对患者信息，并记录，登记入册，运输过程低温保藏，后置于-80℃保存；
13、2、用天根血液基因组dna提取试剂盒提取血液中疱疹病毒基因组dna；
14、3、以步骤2中提取的dna为模板，采用针对疱疹病毒八个型的特异性引物和探针，进行两管四重荧光定量pcr检测(组合1为：hsv-1、ebv、cmv、hhv-7，组合2为：hsv-2、vzv、hhv-6、kshv)，根据ct值进行结果判定；其中反应程序为95℃预变性30s；95℃变性15s，58℃退火并延伸30本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.疱疹病毒八个型的两管四重荧光定量PCR分型检测试剂，其特征在于：包括针对疱疹病毒八个亚型单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、水痘-带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人类疱疹病毒6型、人类疱疹病毒7型和卡波氏肉瘤相关病毒的特异性引物和探针；
【技术特征摘要】
1.疱疹病毒八个型的两管四重荧光定量pcr分型检测试剂，其特征在于：包括针对疱疹病毒八个亚型单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒...
【专利技术属性】
技术研发人员：夏雪山，黄怡，缪志江，冯悦，刘丽，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：
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