一种高致病性H5N8亚型禽流感假病毒的制备方法技术

一种高致病性H5N8亚型禽流感假病毒的制备方法，包括下列步骤：步骤1：序列号为EPI503933，其密码子优化后分别克隆至pcDNA3.1(+)载体上，并添加双酶切位点NheI和XhoI，获得以pcDNA3.1(+)为载体的H5N8‑HA质粒和以pcDNA3.1(+)为载体的H5N8‑NA质粒；步骤2：将以pcDNA3.1(+)为载体的H5N8‑HA质粒、以pcDNA3.1(+)为载体的H5N8‑NA质粒、pCAGGS‑TMPRSS2和pNL4‑3.Luc.R‑E‑转入细胞密度为65‑75%的HEK293T细胞中；同时，加入浓度为1mg/mL的PEI MAX‑Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride；转染完成后，使用Dulbecco’s Modified Eagle Medium维持于37℃、5%CO<subgt;2</subgt;温箱中15‑20h，随后换为添加10%胎牛血清的DMEM培养基维持24h后收取上清。本发明专利技术成功制备高致病性H5N8亚型禽流感假病毒，为未来的疫苗开发和中和抗体筛选提供了重要的实验平台。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种高致病性h5n8亚型禽流感假病毒的制备方法。

技术介绍

1、禽流感病毒(avian influenza viruses，aivs)属于正黏病毒科，基因组由8个分节段的单股负链rna片段基因组成。h5n8亚型禽流感病毒是一种高致病性的禽流感病毒，近年来在全球范围内引起了广泛关注。2009年-2010年间起在我国的家禽中检测到h5n8病毒，其血凝素(hemagglutinin，ha)基因来自亚洲h5n1谱系，但其神经氨酸酶(neuraminidase，na)、核蛋白(nucleoprotein，np)和聚合酶(polymerase basic，pb1)基因均来自未识别的非h5n1病毒，该病毒对禽类具有高致病性，对小鼠具有中度至高度的危险性。2014年，在韩国发现了一种新型重配高致病性h5n8亚型禽流感病毒，自此以后，h5n8亚型禽流感病毒已在亚洲、欧洲、非洲以及北美洲的多个国家和地区检出，对家禽业造成了严重的经济损失，并对野生鸟类的健康构成了威胁。虽然目前该病毒主要影响禽类，但其跨种传播的潜力和对公共卫生的潜在威胁不容忽视。...

【技术保护点】

1.一种高致病性H5N8亚型禽流感假病毒的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

【技术特征摘要】

1.一种高致病性h5n8亚型禽流感假病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：何军，高勇，李卫东，王玮，俞俊岭，胡敏昊，夏艺丹，
申请(专利权)人：安徽省疾病预防控制中心省健康教育所，省公共卫生研究院，
类型：发明
国别省市：