【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种高包载率多肽给药系统及其制备方法。
技术介绍
1、多肽具有优异的降解性、可控的拓扑结构、良好的生物相容性和各种侧链功能等重要特性，广泛应用于药物输送等领域。此外，天然和非天然氨基酸的多样性使得多肽的组成可以在大范围内变化，赋予它们阴离子、阳离子、中性、两亲性或疏水性以及不同的生物降解性。此外，与其他合成和天然聚合物类似，多肽可以表现出ph、酶、还原甚至温度敏感特性。与许多合成共聚物不同，合成多肽可以形成稳定的二级结构，例如α螺旋和β折叠；该特性影响自组装行为，是药物输送系统特性的基础，最后，改变侧链的官能团允许药物和载体缀合以进行靶向递送，而现有多肽给药系统的载药量以及包封率仍需进一步改进。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高包载率多肽给药系统及其制备方法，用于解决现有技术中的不足。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
3、本专利技术提供一种高包载率多肽给药系统的制备方法，包括以下步骤：
4、步骤（1）将甲氧基聚乙二醇溶于n,n-二甲基甲酰胺中得到混合液，将混合液加入惰性氛围反应体系中，反应，再加入谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液，搅拌，除杂，得到中间体a；
5、以上过程中，用甲氧基聚乙二醇增强纳米颗粒的表面亲水性和减少蛋白质吸附，甲氧基聚乙二醇修饰的纳米颗粒可以延长血液循环时间，提高药物的生物利用度。
6、步骤（2）将中间体a溶于三氟乙酸中，搅拌处
7、以上过程中，在酸性条件下，通过酰胺键或酯基断裂而引起的水解反应去除侧链上保护基团。
8、步骤（3）将中间体b溶于n,n-二甲基甲酰胺中，再加入双环己基碳酰亚胺和4-二甲氨基吡啶，反应，得到羧基活化中间体b；
9、步骤（4）将2-二异丙基氨基乙醇加入n,n-二甲基甲酰胺中得到稀释液，将稀释液加入羧基活化中间体b中，反应，除杂，真空干燥，得到中间体c；
10、步骤（5）将中间体c溶于n,n-二甲基甲酰胺中，再加入双环己基碳酰亚胺和n-羟基丁二酰亚胺，反应，再加入液晶化合物溶液，继续反应，过滤，除杂，真空干燥，得到高包载率多肽给药系统。
11、高包载率多肽给药系统的结构式如下：
12、
13、优选地，所述步骤（1）中，惰性氛围反应体系的制备方法，包括以下步骤：将6.1-12g n6-苄氧羰基-l-赖氨酸环内酸酐溶于100-200ml n,n-二甲基甲酰胺中，抽真空至真空度为0.09-0.1mpa后，更换2-4次氩气，得到惰性氛围反应体系。
14、优选地，所述步骤（1）中，甲氧基聚乙二醇、n,n-二甲基甲酰胺的用量比为(10-20)g:(200-400)ml；反应条件：反应温度为20-40℃、反应时间为60-84h；搅拌时间为60-84h；除杂方法：真空蒸馏浓缩溶液后，加入200-400ml冰乙醚以沉淀产物，过滤。
15、优选地，所述步骤（1）中，谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液的制备方法，包括以下步骤：将21-42.2g谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶于200-400mln,n-二甲基甲酰胺中得到谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液。
16、优选地，所述步骤（2）中，中间体a、三氟乙酸、氢溴酸乙酸溶液的用量比为(6-12)g:(100-200)ml:(50-100)ml；氢溴酸乙酸溶液的质量分数为33wt%；搅拌处理时间为40-60min；密封搅拌条件：密封搅拌温度为20-30℃、密封搅拌时间为1-3h；除杂方法：加入200-400ml冰乙醚以沉淀产物，过滤。
17、优选地，所述步骤（3）中，中间体b、n,n-二甲基甲酰胺、双环己基碳酰亚胺、4-二甲氨基吡啶用量比为(20-40)g:(150-300)ml:(17.2-34.1)g:(1.5-3)g；反应条件：反应时间为5-7h、反应温度为20-30℃。
18、优选地，所述步骤（4）中，2-二异丙基氨基乙醇、n,n-二甲基甲酰胺的用量比为(7-14)g:(50-100)ml；反应时间为36-54h；除杂方法：离心，离心液经真空蒸馏浓缩后，加入50-100ml冰乙醚以沉淀产物，过滤；真空干燥条件：真空干燥温度为30-35℃、真空干燥时间为6-8h。
19、优选地，所述步骤（5）中，中间体c、n,n-二甲基甲酰胺、双环己基碳酰亚胺、n-羟基丁二酰亚胺的用量比为(20-40)g:(100-200)ml:(7.1-14.2)g:(0.4-0.8)g；反应时间为4-6h；继续反应条件：继续反应温度为35-45℃、继续反应时间为36-54h；除杂方法：将滤液真空蒸馏浓缩后，加入100-200ml冰乙醚以沉淀产物，再过滤；真空干燥条件：真空干燥时间为12-36h、真空干燥温度为30-35℃。
20、优选地，所述步骤（5）中，液晶化合物溶液的制备方法，包括以下步骤：将16.2-32g液晶化合物溶于150-300ml n,n-二甲基甲酰胺中得到液晶化合物溶液。
21、优选地，所述步骤（5）中，液晶化合物的合成，包括以下步骤：
22、s1:将67.5-123.6g盐酸半胱氨酸溶于300-600ml二甲基亚砜中，再加入110.4-220g碳酸钾，在20-30℃下在黑暗环境中连续搅拌10-14h得到混合液；
23、s2:在氩气氛围下，将44.9-88g胆固醇甲酰氯溶于150-300ml n,n-二甲基甲酰胺中，在冰浴下加入混合液中，搅拌处理1-3h后，升温至35-45℃，反应8-12h，过滤，将滤液透析20-28h，过滤，滤渣在30-40℃下真空干燥7-9h，得到白色液晶化合物。
24、采用所述高包载率多肽给药系统的制备方法制备得到的高包载率多肽给药系统。
25、综上所述，由于采用了上述技术方案，本专利技术的有益效果是：
26、1.本专利技术通过大分子的化学键合和自组装，合成了具有不同特征官能团的多肽材料，构建了高包载率多肽给药系统；通过合成三嵌段多肽，并侧接胆固醇使聚合物获得液晶特性，其中引入的二硫键可以响应氧化还原刺激；叔胺基团接枝到多肽的侧链上，作为电荷反转和粒子膨胀的点；由于细胞膜主要由磷脂等带负电的基元组成，带正电的纳米粒子可以通过静电相互作用被吸附，使细胞摄取行为变得更加容易，同时能对温度、ph、氧化还原等不同刺激产生反应，在特定环境下显著提高释药速度。
27、2.本专利技术制备的多肽给药系统的尺寸大小适中，分散性好，不会被内皮网状系统非特异性识别和清除；构建的刺激响应型多肽纳米递送系统，可在肿瘤微环境中实现对各种刺激的响应，；通过取代胆固醇半胱胺制备了一种新型液晶单体，通过调节大分子的有序排列，促进聚合物实现空间构象的转变；疏水元素的引入极大地增强了多肽的自组装性能，从而有效地提高了多肽纳米系统的载药量和包封率；纳米颗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，惰性氛围反应体系的制备方法，包括以下步骤：将6.1-12g N6-苄氧羰基-L-赖氨酸环内酸酐溶于100-200mL N,N-二甲基甲酰胺中，抽真空至真空度为0.09-0.1MPa后，更换2-4次氩气，得到惰性氛围反应体系。
3.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，甲氧基聚乙二醇、N,N-二甲基甲酰胺的用量比为(10-20)g:(200-400)mL；反应条件：反应温度为20-40℃、反应时间为60-84h；搅拌时间为60-84h；除杂方法：真空蒸馏浓缩溶液后，加入200-400mL冰乙醚以沉淀产物，过滤。
4.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，谷氨酸5-苄酯N-羧基环内酸酐溶液的制备方法，包括以下步骤：将21-42.2g谷氨酸5-苄酯N-羧基环内酸酐溶于200-400mLN,N-二甲基甲酰胺中得到谷
5.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，中间体A、三氟乙酸、氢溴酸乙酸溶液的用量比为(6-12)g:(100-200)mL:(50-100)mL；氢溴酸乙酸溶液的质量分数为33wt%；搅拌处理时间为40-60min；密封搅拌条件：密封搅拌温度为20-30℃、密封搅拌时间为1-3h；除杂方法：加入200-400mL冰乙醚以沉淀产物，过滤。
6.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，中间体B、N,N-二甲基甲酰胺、双环己基碳酰亚胺、4-二甲氨基吡啶的用量比为(20-40)g:(150-300)mL:(17.2-34.1)g:(1.5-3)g；反应条件：反应时间为5-7h、反应温度为20-30℃。
7.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，2-二异丙基氨基乙醇、N,N-二甲基甲酰胺的用量比为(7-14)g:(50-100)mL；反应时间为36-54h；除杂方法：离心，离心液经真空蒸馏浓缩后，加入50-100mL冰乙醚以沉淀产物，过滤；真空干燥条件：真空干燥温度为30-35℃、真空干燥时间为6-8h。
8.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中，中间体C、N,N-二甲基甲酰胺、双环己基碳酰亚胺、N-羟基丁二酰亚胺的用量比为(20-40)g:(100-200)mL:(7.1-14.2)g:(0.4-0.8)g；反应时间为4-6h；继续反应条件：继续反应温度为35-45℃、继续反应时间为36-54h；除杂方法：将滤液真空蒸馏浓缩后，加入100-200mL冰乙醚以沉淀产物，再过滤；真空干燥条件：真空干燥时间为12-36h、真空干燥温度为30-35℃；液晶化合物溶液的制备方法，包括以下步骤：将16.2-32g液晶化合物溶于150-300mL N,N-二甲基甲酰胺中得到液晶化合物溶液。
9.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中，液晶化合物的合成，包括以下步骤：
10.一种采用如权利要求1-9任一项所述的方法制备得到的高包载率多肽给药系统。
...【技术特征摘要】
1.一种高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，惰性氛围反应体系的制备方法，包括以下步骤：将6.1-12g n6-苄氧羰基-l-赖氨酸环内酸酐溶于100-200ml n,n-二甲基甲酰胺中，抽真空至真空度为0.09-0.1mpa后，更换2-4次氩气，得到惰性氛围反应体系。
3.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，甲氧基聚乙二醇、n,n-二甲基甲酰胺的用量比为(10-20)g:(200-400)ml；反应条件：反应温度为20-40℃、反应时间为60-84h；搅拌时间为60-84h；除杂方法：真空蒸馏浓缩溶液后，加入200-400ml冰乙醚以沉淀产物，过滤。
4.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液的制备方法，包括以下步骤：将21-42.2g谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶于200-400mln,n-二甲基甲酰胺中得到谷氨酸5-苄酯n-羧基环内酸酐溶液。
5.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，中间体a、三氟乙酸、氢溴酸乙酸溶液的用量比为(6-12)g:(100-200)ml:(50-100)ml；氢溴酸乙酸溶液的质量分数为33wt%；搅拌处理时间为40-60min；密封搅拌条件：密封搅拌温度为20-30℃、密封搅拌时间为1-3h；除杂方法：加入200-400ml冰乙醚以沉淀产物，过滤。
6.根据权利要求1所述的高包载率多肽给药系统的...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙浩，张瑾，向齐琦，苏晴，徐健峰，
申请(专利权)人：南京羚诺生物医药技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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